HPLC-Bestimmung von Lipidhydroperoxiden in biologischen Proben unter Verwendung selektiver Detektionsmethoden:
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Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
1997
|
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
UND
FRAGESTELLUNG
_
1
2
MATERIALIEN
UND
METHODEN
_
6
2.1
GERAETE
_
6
2.2
CHEMIKALIEN
.
.
7
23
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
9
2.4
AUFBAN
UND
INBETRIEBNAHME
DES HPLC-SYSTEMS
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY*YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY .
10
2.5
LIPOSOMEN
-
HERSTELLUNG
UND
OXIDATIONSANSAETZE.
_
.
16
2.6
PFLANZENMATERIAL
-
OZONBEHANDLUNG
VON
TABAKPFLANZEN.
_
.20
2.7
EXTRAKTION
DER
LIPIDE
AUS
DEN
TABAKPFLANZEN.
------
.
21
2A
LIPOPROTEINE
-
OXIDATIONSANSAETZE UND
EXTRAKTION.
_
.
_
23
2.9
SPEISEOELE
-
OXIDATIONSANSAETZE.
_
.
_
.
_
.24
2.10
LODOMETRIE
UND
PEROXIDZAHL
.
.
24
2.11
FOX2-TEST
_
25
2.12
THIOBARBITURSAEURE
(TBA)-TEST
.
.
.
.26
2.13
PHOSPHATBESTIMMUNG.
_
.
-
.
.
-
.27
3
SYNTHESE
VON
LIPIDHYDROPEROXIDEN
_
28
3.1
GRUNDLAGEN.
_
.
_
.28
3.1.1
AUTOXIDATION
.
'.
.
28
3.1.2
PHOTOSENSIBILISIERTE
OXIDATION
.
32
3.1.3
ENZYMATISCHE
OXIDATION
.
35
3.1.4
DARSTELLUNG
VON
LIPIDHYDROPEROXIDESTEM
.
37
3.1.5
VERGLEICH
DER
SYNTHESEMETHODEN
.
38
32
OXIDATION
MIT
SINGULETTSAUERSTOFF
_
.
-------------------------------
.39
3.2.1
METHYLOLEAT
.
40
3.2.2
METHYLLINOLEAT
.
41
3.2.3
METHYLLINOLENAT
.
41
3.2.4
CHOLESTERYLOLEAT
.
42
3.2.5
CHOLESTERYLLINOLEAT
.
42
3.2.6
TRIOLEIN
.
43
3.2.7
STEAROYL-LINOLEOYL-PHOSPHATIDYLCHOLIN
.
43
3.3
ENZYMATISCHE
OXIDATION
VON
LINOLSAEURE
UND
LINOLENSAEURE
MIT
LIPOXY
GENASE-TYP
1
.
44
3.3.1
DARSTELLUNG
VON
13S'-HYDROPEROXY-OCTADECA-9FZ/LL(C^-DIENSAEURE-
METHYLESTER
(13-HPODME)
UND
135-HYDROPEROXY-OCTADECA-
9(Z),
11
(E),
1
5(ZJ-TRIENSAEURE-METHYLESTER
(13-HPOTME)
.
45
3.4
DARSTELLUNG
VON
13-HYDROPEROXY-OCTADECA-9(Z),LL()-DIENSAEURE
CHOLESTERYLESTER
_
.
_
.
_
.
_
45
3.5
IDENTIFIZIERUNG
DER
OXIDATIONSPRODUKTE.
_
_
.47
3.5.1
NMR-SPEKTROSKOPIE
.
47
3.5.2
MASSENSPEKTROMETRIE
.
57
3.5.3
HPLC-MS
.
58
3.6
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
.
60
4
HPLC
-
METHODENENTWICKLUNG
_
65
4.1
OPTIMIERUNG
DES
MEERRETTICHPEROXIDASE-SYSTEMS
.
_
.
_
69
4.1.1
EINFLUSS
DER
NATRONLAUGE
.
69
4.1.2
EINFLUSS
DES
PH
DER
REAGENZLOESUNG
.
70
4.1.3
EINFLUSS
DER
REAKTIONSSCHLANGEN
.
71
4.1.4
EINFLUSS
DER
TEMPERATUR
.
73
4.2
BESTIMMUNG
VON
N-ALKYLHYDROPEROXIDEN
.
.
74
4.2.1
ISOKRATISCHE
TRENNUNG
.
74
4.2.2
TRENNUNG
MITTELS
GRADIENTENELUTION
.
76
4.2.3
KALIBRIERUNG
DES
VERFAHRENS
UND
ERMITTLUNG
VON
NACHWEISGRENZE
UND
BESTIMMUNGSGRENZE
.
80
43
BESTIMMUNG
VON
SEKUNDAEREN
ALKYLHYDROPEROXIDEN
.
_
85
4.4
OPTIMIERUNG
DES
MIKROPEROXIDASE-HPLC-SYSTEMS
_
.88
4.4.1
EINFLUSS
DER
NATRONLAUGE
.
88
4.4.2
EINFLUSS
DES
PH
DER
REAGENZLOESUNG
.
89
4.4.3
EINFLUSS
DER
REAKTIONSSCHLANGEN
.
91
4.4.4
EINFLUSS
DES
GUANIDINIUMCHLORID
.
93
4.4.5
OPTIMIERUNG
DER
FLUORESZENZDETEKTION
.
93
43
TRENNUNG
VON
LIPIDHYDROPEROXIDEN.
_
.96
4.5.1
ISOKRATISCHE
TRENNUNG
.
96
4.5.2
TRENNUNG
MITTELS
GRADIENTENELUTION
.
99
4.5.3
KALIBRIERUNG
UND
ERMITTLUNG
VON
NACHWEIS
UND
BESTIMMUNGSGRENZE.
101
4.6
NARROWBORE-HPLC
MIT DEM
MIKROPEROXIDASE-SYSTEM
-----------------
.
103
4.6.1
OPTIMIERUNG
DES
SYSTEMS
.
104
4.7
BESTIMMUNG
VON
HYDROPEROXIDEN
MIT
DEM
EISEN(II)/XYLENOIORANGE
HPLC-SYSTEM
.
106
4.7.1
BESTIMMUNG
DER
N-ALKYLHYDROPEROXIDE
.
107
4.7.2
BESTIMMUNG
DER
LIPIDHYDROPEROXIDE
.
109
4.7.3
BESTIMMUNG
DER
NACHWEISGRENZE
UND
DES
LINEAREN
BEREICHES
.
109
4.8
DISKUSSION.
---------------------
111
5
UNTERSUCHUNG
VON
BIOLOGISCHEM
PROBENMATERIAL
------
121
5.1
UNTERSUCHUNG
VON
DISTELOEL
AUF
LIPIDHYDROPEROXIDE.
---------------------
121
5.1.1
UNTERSUCHUNG
DES
OXIDATIONSVERLAUFES
VON
DISTELOEL
MITTELS
PEROXIDZAHLL21
5.1.2
UNTERSUCHUNG
DES
OXIDATIONSVERLAUFES
VON
DISTELOEL
MIT
DEM
FOX-TESTL22
5.1.3
PROBENVORBEREITUNG
UND
HPLC-BESTIMMUNG
DER
TRIGLYCERIDHYDRO
PEROXIDE
.
125
5.1.4
UMESTERUNG
DER
TRIGLYCERIDE
.
129
5.1.5
BESTIMMUNG
DER
WIEDERFINDUNGSRATE
.
131
5.1.6
BESTIMMUNG
VON
LIPIDHYDROPEROXIDEN
IN
DISTELOEL
MIT
DEM
MIKROPER
OXIDASE-HPLC-SYSTEM
.
135
5.1.7
BESTIMMUNG
VON
LIPIDHYDROPEROXIDEN
IN
DISTELOEL
MIT
DEM
FOX-HPLC
SYSTEM
.
138
5.1.8
VERGLEICH
DER
ANGEWANDTEN
METHODEN
ZUR
BESTIMMUNG
VON
LIPIDHYDRO
PEROXIDEN
IN
DISTELOEL
.
140
5.1.9
IDENTIFIZIERUNG
DER
LIPIDHYDROPEROXIDE
MITTELS
HPLC-MS
UND
HPLC
MS-MS
.
142
5.2
UNTERSUCHUNG
VON
LIPOSOMEN
AUF
LIPIDHYDROPEROXIDE.
_
148
5.2.1
LIPOSOMEN
ALS
MODELLE
FUER
BIOMEMBRANEN
UND
LIPOPROTEINE
.
148
5.2.2
IDENTIFIZIERUNG
DER
HYDROPEROXIDE
VON
SLPC
UND
DLPC
MITTELS
HPLC-MS
.
151
5.2.3
BESTIMMUNG
VON
LIPIDHYDROPEROXIDEN
IN
OXIDIERTEN
LIPOSOMEN
MIT
DEM
MIKROPEROXIDASE-HPLC-SYSTEM
.
155
5.2.4
BESTIMMUNG
VON
LIPIDHYDROPEROXIDEN
IN
OXIDIERTEN
LIPOSOMEN
MIT
DEM
FOX-HPLC-SYSTEM
.
160
5.2.5
SUMMENBESTIMMUNG
DER
LIPIDHYDROPEROXIDE
MIT
DEM
FOX2-TEST
.
164
5.2.6
BESTIMMUNG
VON
ALDEHYDEN
IN
OXIDIERTEN
LIPOSOMEN
MITTELS
TBA-TESTL65
53
UNTERSUCHUNG
VON
LIPOPROTEINEN
AUF
LIPIDHYDROPEROXIDE MIT
DEM
MIKROPEROXIDASE-HPLC-SYSTEM
NACH
YYIN
VITRO
"
-OXIDATION
_
.
_
167
5.4
NACHWEIS
VON
LIPIDHYDROPEROXIDEN
IN
DEN
TABAKKULTIVAREN
BEL
B
UND
BEL
W3
----------------------------------------------------------------------------------
169
5.4.1
NACHWEIS
VON
LIPIDHYDROPEROXIDEN
IN
OZONBEHANDELTEM
TABAK
MIT
DER
MIKROPEROXIDASE/PES-HPLC
.
171
5.5
DISKUSSION.
-
176
6
ZUSAMMENFASSUNG
-----------------------------------------------------------------
184
7
LITERATURVERZEICHNIS
---------------------------------------------------------
187
8
ANHANG
204 |
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