Nachweis der Lokalisation von Aminopeptidasen in Pseudomonas aeruginosa:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG 1
1.1 CHARAKTERISIERUNG VON
PSEUDOMONAS AERUGINOSA 1
1.1.1 VORKOMMEN UND BEDEUTUNG 1
1.1.2 MORPHOLOGIE UND KULTUR 1
1.1.3 PATHOGENESE UND KRANKHEITSBILDER 2
1.2 STRUKTUR UND FUNKTION DER ZELLHUELLE GRAM-NEGATIVER BAKTERIEN 2
1.3 DER PERIPLASMATISCHE RAUM 6
1.4 METHODEN ZUM NACHWEIS DER PERIPLASMATISCHEN LOKALISATION VON
PROTEINEN 7
1.5 PROTEASEN AN DER ZELLOBERFLAECHE UND IM PERIPLASMA - NUTZUNG VON
EXOGENEN 9
PEPTIDEN ~-
1.6 LOKALISATION UND FUNKTION DER ALANYL-AMINOPEPTIDASE (AMINOPEPTIDASE
N, 12
EC 3.4.11.2.)
1.7 AUFGABENSTELLUNG 13
2 MATERIAL UND METHODEN 14
2.1 VERWENDETE REAGENTIEN 14
2.1.1 ENZYMSUBSTRATE 14
2.1.2 ENZYME UND COENZYME 14
2.1.3 DETERGENTIEN 14
2.1.4 EICHPROTEINE FUER ELEKTROPHORESE 14
2.1.5 GELE 15
2.1.6 WEITERE REAGENTIEN 15
2.2 KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN 16
2.3 METHODEN DES ZELLAUFSCHLUSSES 18
2.3.1 GLASPERLENAUFSCHLUSS 18
2.3.2 ULTRASCHALLAUFSCHLUSS 20
2.3.3 BAKTERIENAUFSCHLUSS DURCH LYSOZYM 20
2.4 BESTIMMUNG DER ENZYMAKTIVITAETEN 21
2.4.1 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET DER ALANYL-AMINOPEPTIDASE (AAP) 21
2.4.2 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET DER LEUCYL-AMINOPEPTIDASE (LAP) 22
2.4.3 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET DER SAUREN PHOSPHATASE (SP) 22
2.4.4 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET DER ALKALISCHEN PHOSPHATASE (AP) 23
II
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2.4.5 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET DES MALAT-ENZYMS 23
2.5 PROTEINBESTIMMUNG MIT BCA 24
2.5.1 AUFSCHLUSS UNLOESLICHER PROTEINE 24
2.5.2 DURCHFUEHRUNG DER BCA-METHO |E 25
2.6 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE 26
2.6.1 VORBEREITUNG DER PROBEN 26
2.6.2 HERSTELLUNG DER GELE UND PUFFER 26
2.6.3 DURCHFUEHRUNG DER ELEKTROPHORESE 26
2.6.4 SILBERFAERBUNG 27
2.7 ELEKTRONENMIKROSKQPISCHER NACHWEISXLER LOKALISATION DER ALANYL- 28
AMINOPEPTIDASE
2.8 NACHWEIS DER LOKALISATION DER ALANYL-AMINOPEPTIDASE DURCH 32
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
2.9 NACHWEIS DER LOKALISATION DER ALANYL-AMINOPEPTIDASE DURCH SPALTUNG
33
EINES HOCHMOLEKULAREN SUBSTRATES
2.9.1 SUBSTRATSYNTHESE 33
2.9.2 NACHWEIS VON L-ALANIN DURCH DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 37
3 ERGEBNISSE 38
3.1 NACHWEIS VON AMINOPEPTIDASEN IM PERIPLASMA 38
3.1.1 BEHANDLUNG VON ZELLEN MIT CHLOROFORM 38
3.1.2 POLYMYXINBEHANDLUNG 41
3.1.3 WAESCHE VON BAKTERIENZELLEN MIT MAGNESIUMCHLORIDLOESUNG 44
3.1.4 BILDUNG VON SPHAEROBLASTEN DURCH EDTA UND LYSOZYM 47
3.1.5 BILDUNG VON SPHAEROBLASTEN DURCH MAGNESIUM UND LYSOZYM 49
3.2 UNTERSUCHUNG DER INTERAKTION VON PROTEINEN MIT DER ZELLHUELLE 50
3.2.1 WAESCHE VON EDTA/LYSOZYM-SPHAEROBLASTEN 50
3.2.2 WAESCHE VON ZELLHUELLEN AUS MGCL
2
/LYSOZYM-SPHAEROBLASTEN 52
3.2.3 WAESCHE VON ZELLHUELLEN NACH BEHANDLUNG VON ZELLEN MIT
TRIS-HCL-PUFFER 56
3.2.4 CHLOROFORMBEHANDLUNG ISOLIERTER ZELLHUELLEN AUS EDTA/LYSOZYM- 58
SPHAEROBLASTEN
3.3 UNTERSUCHUNG ZUR KRYPTIZITAET DER ALANYL-AMINOPEPTIDASE - SPALTUNG
VON 59
L-ALANYL-P-NITROANILID DURCH INTAKTE BAKTERIENZELLEN
III
INHALTSVERZEICHNIS
3.4
3.5
3.6
3.6.1
3.6.2
4
5
6
7
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHER NACHWEIS DER LOKALISATION DER ALANYL- 64
AMINOPEPTIDASE
NACHWEIS DER LOKALISATION DER ALANYL-AMINOPEPTIDASE DURCH 66
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
NACHWEIS DER LOKALISATION DER ALANYL-AMINOPEPTIDASE DURCH SPALTUNG 70
EINES HOCHMOLEKULAREN SUBSTRATES
ANALYSE DES SYNTHESEPRODUKTES 70
NACHWEIS DER ENZYMLOKALISATION 72
DISKUSSION 76
ZUSAMMENFASSUNG 87
LITERATURVERZEICHNIS 89
THESEN 98
IV |
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