Strategien zur Antikörperproduktion gegen Troponin-I und Troponin-T: monoklonale Antikörper als Werkzeuge zur Differenzierung von Isoformen eines konservativen Proteins
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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| Beschreibung: | Bochum, Univ., Diss., 1997 |
| Beschreibung: | 121 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
REGULATION
DER
MUSKELKONTRAKTION
2
1.2
IMMUNOGENITAET
KONSERVATIVER
PROTEINE:
TROPONIN
5
1.3
PEPTIDE
ALS
IMMUNOLOGISCHE
WERKZEUGE
7
1.4
ZIELSETZUNG
8
2
MATERIAL
UND
METHODEN
10
2.1
MATERIAL
10
2.1.1
CHEMIKALIEN
10
2.1.2
GEBRAUCHSMATERIALIEN
11
2.1.3
PEPTIDE
11
2.1.4
ANTIKOERPER
UND
PROTEINE
11
2.1.5
PUFFER
UND
ZELLKULTURMEDIEN
13
2.1.5.1
STANDARDPUFFER
13
2.1.5.2
LOESUNGEN
FUER
DEN
ELISA
13
2.1.5.3
LOESUNGEN
FUER
DIE
SDS-PAGE
13
2.1.5.4
LOESUNGEN
FUER
DEN
IMMUNOBLOT
14
2.1.5.5
ZELLKULTURMEDIEN
14
2.1.6
ZELLINIEN
14
2.1.7
VERSUCHSTIERE
15
2.1.8
GEWEBEPROBEN
15
2.2
METHODEN
15
2.2.1
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
15
2.2.1.1
IMMUNISIERUNGEN
15
2.2.1.2
FESTPHASENASSAY
ZUR
SERUMTITERBESTIMMUNG
16
2.2.1.3
FUSIONEN
16
2.2.1.4
KULTURBEDINGUNGEN
FUER
NEUGEWONNENE
HYBRIDZELLEN
16
2.2.1.5
KLONIERUNG
VON
ZELLEN
17
2.2.1.6
KRYOKONSERVIERUNG
VON
ZELLINIEN
17
2.2.2
LANGZEIT-KULTUR
VON
HYBRIDOMZELLEN
18
2.2.2.1
FLASCHENKULTUR
18
2.2.22
GEWINNUNG
VON
ASZITESFLUESSIGKEIT
19
2.2.23
INTENSIVKULTUR
VON
HYBRIDOMZELLEN
IN
DER
MINIPERM
19
2.2.3
SICHTEN
VON
KULTURUEBERSTAENDEN
20
2.2.3.1
INDIREKTER
FESTPHASENASSAY
20
2.2.32
IMMUNFLUORESZENZ
21
2.2.4
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
22
2.2.4.1
KONZENTRATION
VON
PROTEINLOESUNGEN
22
2.2.4.2
BESTIMMUNG
DER PROTEIN-
BZW.
ANTIKOERPERKONZENTRATIONEN
22
2.2.4.3
SAEULENCHROMATOGRAPHISCHE
REINIGUNG
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
AUS
ASZITES
ODER
MINIPERM-KULTUTUEBERSTAND
23
2.2.5
CHARAKTENSIERUNG
GEWONNENER
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
23
2.2.5.1
BESTIMMUNG
DER
ANTIKOERPERKLASSE
23
22.5.2
KOMPETITIVER
/
INHIBITORISCHER
FESTPHASENASSAY
24
22.5.3
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
25
22.5.4
BLOTTEN
VON
SDS-GELEN
26
2.2.6
MIKROTITERPLATTENTEST
ZUM
NACHWEIS
BIOTINYLIERTEN
PEPTIDS
27
3
ERGEBNISSE
28
3.1
ARBEITEN
MIT DEM
TNL
18
.
2
Z-PEPTIDPEPTID
28
3.1.1
KOVALENTE
KOPPLUNG
DES
PEPTIDS
AN
EIN
CARRIERMOLEKUEL
28
3.1.1.1
KOPPLUNG
VON
PEPTID
AN
CARRIERMOLEKUELE
MIT
HILFE
VON
CARBODIIMID
29
3.1.1.2
GERICHTETE
KOPPLUNG
DES
PEPTIDS
AN
CARRIERMOLEKUELE
31
3.1.1.2.1
KOPPLUNG
UEBER
DEN
AMINOTERMINUS
DES
PEPTIDS
31
3.1.1.2.2
KOPPLUNG
UEBER
DEN
CARBOXYTERMINUS
DES
PEPTIDS
32
3.1.2
BIOTINYLIERUNG
DES
PEPTIDS
32
3.1.2.1
BIOTINYLIERUNG
DES
PEPTIDS
MIT
HILFE
VON
DIAZOBIOTIN
32
3.1.2.2
BIOTINYLIERUNG
DES
PEPTIDS
MIT
HILFE
VON
NHS-LC-BIOTIN
34
3.1.3
AFFINITAETSBINDUNG
VON
BIOTINYLIERTEM
PEPTID
AN
AVIDIN
35
3.2
IMMUNISIERUNGEN
36
3.2.1
NOMENKLATUR
36
3.2.2
TESTVERFAHREN
ZUR
SERUMTITERBESTIMMUNG
37
3.2.3
EINFLUSS
DES
IMMUNOGENS
AUF
DEN
ANTIKOERPERTITER
40
3.2.4
ABHAENGIGKEIT
DES
ANTIKOERPERTITERS
VON
DER
ART
DER
APPLIKATION
DES
ANTIGENS
44
3.2.5
EINFLUSS
DES
IMMUNISIERUNGSZEITRAUMES
UND
DER
ANZAHL
DER
EINZELIMMUNISIERUNGEN
AUF
DEN
BINDUNGSTITER
46
3.2.6
EINFLUSS
DES
ABSTANDES
ZWISCHEN
DEN
LETZTEN
BEIDEN
IMMUNISIERUNGEN
AUF
DEN
ANTIKOERPERTITER
46
3.3
FUSIONEN
47
3.3.1
ANWACHSRATE
48
3.3.2
FUSIONSERGEBNISSE
47
3.3.2.1
HYBRIDOME,
DIE
ANTIKOERPERN
DER
KLASSE
IGM
SEZEMIEREN
50
3.3.2.2
HYBRIDOME,
DIE
ANTIKOERPERN
DER
KLASSE
IGG
SEZEMIEREN
50
3.4 ANALYTISCHE
VERFAHREN
ZUR
CHARAKTERISIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
51
3.4.1
KLASSEN
UND
SUBKLASSENTYPISIERUNG
51
3.4.2
IMMUNFLUORESZENZ-MIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
51
3.4.3
GELELEKTROPHORETISCHE
DARSTELLUNG
VON
MUSKELPROTEINEN
53
3.4.3.1
ANALYTISCHE
SDS-POLYACRYLAMID-GEL-ELEKTROPHORESE
54
3.4.3.2
NACHWEIS
DER
BINDUNGSSPEZIFITAET
MITTELS
IMMUNOFAERBUNG
55
3.5
BESTIMMUNG
VON
TN/TNL-KONZENTRATIONEN
59
3.5.1
SELEKTIVER
NACHWEIS
FREIER
TNL-MOLEKUELE
IN
LOESUNGEN
59
3.5.2
QUANTITATIVER
NACHWEIS
VON
TNL
UND
TNT
MITTELS
HEMMTEST
60
3.6
BESTIMMUNG
DER
AFFINITAET
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
63
3.6.1
BERECHNUNG
DER
RELATIVEN
ANTIKOERPERAFFINITAETEN
63
3.6.2
ERMITTLUNG
DER
ANTIKOERPER-AFFINITAETEN
AUS
DEN
ERGEBNISSEN
EINES
KOMPETITIVEN
FESTPHASENASSAYS
64
3.6.2.1
MATHEMATISCHE
GRUNDLAGEN
64
3.6.3
BERECHNUNG
DER
ANTIKOERPERAFFINITAET
65
3.6.4
KOMPETITIONSANALYSE
68
4
DISKUSSION
70
4.1
VERSUCHE
ZUR
KOPPLUNG
DES
DEKAPEPTIDS
AUS
CTNL
70
4.2
IMMUNISIERUNGEN
72
4.3
ERGEBNISSE
DER
FUSIONEN
76
4.4
EINSATZBEREICHE
FUER
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
GEGEN
HERZMUSKEL-TROPONIN
(CTNL/CTNT)
81
4.5
BESTIMMUNG
DER
ANTIKOERPERAFFINITAET
AUS
EINEM
HEMM-ELISA
84
4.6
AUSBLICK
85
5
ZUSAMMENFASSUNG
86
6
LITERATUR
89
ANHANG
A
100
ANHANG
B
116
ANHANGC
119 |
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