Molekulare Sequenzanalyse der cysteinreichen extrazellulären Region des RET-Protoonkogens bei Tumoren der Nebenschilddrüse:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 7
2 EINLEITUNG 8
3 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 14
4 MATERIAL UND METHODIK 16
4.1 PATIENTEN 16
4.2 TUMOREN 16
4.3 DNA-PRAEPARATION UND DNA-AUFBEREITUNG 17
4.3.1 AUFBEREITUNG VON KRYOKONSERVIERTEM TUMORGEWEBE ZUR DNA PRAEPARATION
17
4.3.2 AUFBEREITUNG VON IN PARAFFIN EINGEBETTETEM TUMORGEWEBE ZUR DNA
PRAEPARATION 18
4.3.3 DNA-ISOLIERUNG UND AUFREINIGUNG MITTELS
PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTION UND ETHANOL-
PRAEZIPITATION 19
4.3.4 DNA-ISOLIERUNG UND AUFREINIGUNG MIT DEM YYQIAAMP TISSUE KIT" 20
4.3.5 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN 21
4.4 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR) 22
4.4.1 PRIMER - 22
4.4.2 PCR-REAKTION 24
4.4.3 NACHWEIS DES PCR-PRODUKTS AUF DEM AGAROSE-GEL 26
4.5 DYNALBEADS M-280 STREPTAVIDIN DNA-STRANGTRENNUNG 27
4.5.1 VORBEREITUNG UND REINIGUNGSSCHRITT 27
4.5.2 BINDUNGSREAKTION UND WASCHSCHRITTE 28
4.5.3 SEPARATION, TRENNUNG DER DOPPELSTRANG-DNA 28
4.5.4 REINIGUNG DER BIOTINYLIERTEN EINZELSTRANG-DNA 29
4.6 NICHT-RADIOAKTIVE LASER-FLUORESZENZ-SEQUENZIERUNG 29
4.6.1 ERLAEUTERUNGEN ZU DEN SEQUENZIERUNGSPRIMEM 30
4.6.2 NICHT-RADIOAKTIVE EINZELSTRANG-SEQUENZIERUNGSREAKTION NACH SAENGER
31
4.6.3 GELPLATTEN- UND GELKASSETTENVORBEREITUNG FUER DEN A.L.F.-DNA
SEQUENZER 34
4.6.4 ACRYLAMIDGEL- UND PUFFERVORBEREITUNG FUER DEN A.L.F.-DNA SEQUENZER
35
4.6.5 HERSTELLUNG DES ACRYLAMIDGELS FUER DEN A.L.F.-DNA SEQUENZER 36
4.6.6 EINBAU DER GELKASSETTE IN DEN A.L.F.-DNA SEQUENZER 37
4.6.7 VORBEREITENDE EINSTELLUNGEN UEBER DIE SOFTWARE (A.L.F. MANAGER 2.6)
38
4.6.8 START EINES A.L.F.-LAUFS UND AUFTRAEGEN DER SEQUENZIERUNGSPRODUKTE
39
4.6.9 TECHNISCHE ANGABEN DES A.L.F.-DNA SEQUENZERS 40
5 ERGEBNISSE 41
5.1 OPTIMIERUNG DER METHODIK 41
5.1.1 OPTIMIERUNG DER PCR 41
5.1.2 ETABLIERUNG DER AUTOMATISCHEN LASER-FLUORESZENZ-SEQUENZIERUNG 44
5.1.3 OPTIMIERUNG DURCH AENDERUNG DES PRIMERLAYOUTS 45
5.1.4 ERMITTLUNG DER PRIMERLAGE UND AUFDECKUNG DER INTRONSEQUENZ BIS ZU
DEN PRIMERN 46
5.1.5 OPTIMIERUNG DURCH AENDERUNG DER LABELING-REAKTION 47
5.2 GENOMANALYSEN DES RET-PROTOONKOGENS 49
5.2.1 PATIENTEN UND TUMORMATERIAL 49
5.2.2 SEQUENZIERERGEBNISSE 50
6 DISKUSSION 58
6.1 FRAGESTELLUNG 5G
6.2 METHODIK 60
6.3 ERGEBNISSE 62
6.4 LITERATUR 63
5
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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