Selektive Markierung der Chloroplasten-ATP-Synthase mit dem pH-sensitiven optischen Indikator Fluorescein und Charakterisierung korekonstituierter Proteoliposomen aus Bacteriorhodopsin und ATP-Synthase:
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| Format: | Mikrofilm Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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| Beschreibung: | Darmstadt, Techn. Hochsch., Diss., 1997 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. ZUSAMMENFASSUNG_1
2. EINLEITUNG_3
2.1 BIOENERGETIK_3
2.1.1 BIOLOGISCHE ENERGIEKOPPLUNG _4
2.1.2 ATP ALS UNIVERSELLER ENERGIELIEFERANT_4
2.1.3 WECHSELWIRKUNGEN ZWISCHEN DEM ELEKTROCHEMISCHEN GRADIENTEN UND DER
ATP-BIOSYNTHESE_5
2.2 F-TYP ATP-SYNTHASE_8
2.2.1 STRUKTUR UND FUNKTION DER CHLOROPLASTEN-ATP-SYNTHASE (CF
0FI) _8
2.2.1.1 FI-KOMPLEX_11
2.2.1.2
FO-KOMPLEX
_14
2.2.2 FUNKTIONSMODELL DER ATP-SYNTHASE_17
2.2.3 REGULATION_18
2.2.4 KOPPLUNG DES PROTONENTRANSPORTS_20
2.2.5 ENERGETISIERUNG_21
2.3 BACTERIORHODOPSIN _23
2.4
KOREKONSTITUTION VON MEMBRANPROTEINEN IN LIPIDVESIKEL_25
2.5
PH-EMPFINDLICHE OPTISCHE INDIKATOREN_26
2.6
BIOLUMINOMETRISCHE ATP-BESTIMMUNG_28
2.7 ZIEL DER ARBEIT_29
3. MATERIALIEN UND METHODEN _31
3.1 MATERIALIEN
_31
3.1.1 CHEMIKALIEN _31
3.1.2 GERAETE UND HILFSMITTEL_34
3.2 METHODEN_36
3.2.1 CF
0FI-PRAEPARATION_37
3.2.2 ISOLATION DES CFI-FRAGMENTS DER H
+-ATP-SYNTHASE_40
3.2.3 CFREXTRAKTION_43
3.2.3.1 ISOLATION UND REINIGUNG VON CF, UEBER DEAE-CELLULOSE_44
3.2.4 ISOLATION VON CF
0_46
3.2.5 GELELEKTROPHORETISCHE PROTEINREINIGUNG UND FAERBEMETHODEN_47
3.2.5.1 DISKONTINUIERLICHE SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE _47
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/950516473
3.2.5.2 COOMASSIE-BLAU-FAERBUNG_49
3.2.5.3 MODIFIZIERTE COOMASSIE-BLAU-FAERBUNG _50
3.2.5.4 SILBERFAERBUNG NACH ANSORGE_50
3.2.5.5 SILBERFAERBUNG NACH OAKLEY _51
3.2.6 PROTEINBESTIMMUNGEN_52
3.2.6.1 PROTEINBESTIMMUNG NACH LOWRY UND HARTREE_52
3.2.6.2 PROTEINBESTIMMUNG NACH BRADFORD_53
3.2.7 PRAEPARATION VON LIPOSOMEN NACH DER YYREVERSE - PHASE - METHODE"_53
3.2.8 REKONSTITUTION DER ATP-SYNTHASE IN VORGEFORMTE LIPOSOMEN_54
3.2.9 DCCD-HEMMUNG DER H
+-ATP-SYNTHASE_56
3.2.10 KOREKONSTITUTION VON ATP-SYNTHASE MIT BACTERIORHODOPSIN _56
3.2.11 EINFLUSS VON OCTYLGLUCOSID AUF DIE ATP-SYNTHASE-AKTIVITAET_57
3.2.12 MARKIERUNG DER ATP-SYNTHASE MIT FITC, FSUCC, FMAL UND 5-IAF_57
3.2.13 MARKIERUNG MIT 5-IAF AM CFRKOMPLEX_60
3.2.14 MARKIERUNG MIT 5-IAF AN DEN ISOLIERTEN CF
0-UNTEREINHEITEN_ 61
3.2.15 MARKIERUNG DER THYLAKOIDPROTEINE_61
3.2.16 MARKIERUNGEN AN CF
0-LIPOSOMEN _62
3.2.16.1 DENATURIERUNG DES CF^KOMPLEXES AN PROTEOLIPOSOMEN _62
3.2.16.2 MARKIERUNG DER CF
0-LIPOSOMEN_64
3.2.17 MARKIERUNG DER REKONSTITUIERTEN ATP-SYNTHASE CF^ MIT 5-IAF
~~_64
3.2.18 MARKIERUNG IM INNEREN DER REKONSTITUIERTEN CFOFI-VESIKEL
MIT FITC UND FSUCC_65
3.2.19 MARKIERUNG AN KOREKONSTITUIERTEN PROTEOLIPOSOMEN MIT IAF- UND
FMAL_66
3.2.20 OPTIMIERUNGEN DER MARKIERUNG MIT 5-IAF AN BR- CFOFI-LIPOSOMEN_66
3.2.21 KRYO-ELEKTRONENMIKROSKOPIE_67
3.2.22 ACETONFAELLUNG _68
3.2.23 KONZENTRIERUNG VERDUENNTER PROTEINPROBEN DURCH EXTRAKTION_68
3.2.24 PROTEINKONZENTRIERUNG MITTELS KONZENTRATOREN_69
3.2.25 MESSUNG DES AKTIVEN HMYANSPORTES UEBER DIE MEMBRAN
VON PROTEOLIPOSOMEN_70
3.2.26 ATP-SYNTHESE IN KOREKONSTITUIERTEN BR-CF^-LIPOSOMEN_71
3.2.27 ATP-SYNTHESE IN CFOFRLIPOSOMEN _72
3.2.28 BESTIMMUNG DER ATP-HYDROLYSEGESCHWINDIGKEIT (YYLE BEL-TEST")_73
3.2.29 CHARAKTERISIERUNG DER VESIKEL_75
3.2.30 BESTIMMUNG DES ORIENTIERUNGSGRADES VON BR IM LIPOSOM_75
3.3 SPEKTROSKOPISCHE BESTIMMUNGEN _76
3.3.1 UV/VIS-ABSORPTIONSSPEKTROSKOPIE_76
3.3.2 EMISSIONSSPEKTREN EINER MIT FLUORESCEIN MARKIERTEN ATP-SYNTHASE_77
3.3.3 DENSITOMETRISCHE BESTIMMUNG DER RELATIVEN
PROTEINKONZENTRATIONEN_78
4. ERGEBNISSE_79
4.1 ISOLATION DER CHLOROPIASTEN ATP-SYNTHASE_79
4.2 VERMINDERUNG DER AKTIVITAET DER CHLOROPLASTEN ATP-SYNTHASE_81
4.2.1 LAGERUNG DER ISOLIERTEN ATP-SYNTHASE BEI -80 C ODER -20 C_81
4.2.2 LAGERUNG DER REKONSTITUIERTEN PROTEOLIPOSOMEN BEI 4 C_83
4.2.3 DICYCIOHEXYLCARBODIIMID-HEMMUNG_85
4.2.4 ULTRASCHALLBEHANDLUNG AN REKONSTITUIERTEN PROTEOLIPOSOMEN_86
4.2.5 ANZAHL CF
0FI PRO VESIKEL _88
4.2.6 LAF-MARKIERUNG DER ATP-SYNTHASE_88
4.2.7 KOREKONSTITUTION MIT BACTERIORHODOPSIN UND DAS DAZU
VERWENDETE DETERGENZ_89
4.2.7.1 EINFLUSS VON OCTYLGLUCOPYRANOSID AUF DIE ATP-SYNTHASE
AKTIVITAET_89
4.27.2 EINFLUSS DER BR-KONZENTRATION AUF DIE ATP-SYNTHESERATE_91
4.2.8 EINFLUSS DES REKONSTITUTIONSPUFFERS UND URNPUFFERN DURCH DIALYSE_
93
4.3
ISOLATION VON CF0 NACH MCENERY_95
4.4 CF^EXTRAKTION NACH MCCARTY_96
4.5 VERGLEICH DER ISOLATIONSMETHODEN VON CFI_98
4.6
MARKIERUNG DER ATP-SYNTHASE_ 102
4.6.1 MARKIERUNG AM GESAMTKOMPLEX
CFQFT_102
4.6.2 MARKIERUNG MIT 5-IAF UND FITC AM CF
0-KOMPLEX_109
4.6.3 MARKIERUNG MIT 5-IAF AM ISOLIERTEN CFRFRAGMENT _109
4.6.4 MARKIERUNG AN CHLOROPLASTENTHYLAKOIDEN NACH EDTA-BEHANDLUNG_110
4.6.5 NABR-BEHANDLUNG VON PROTEOLIPOSOMEN_110
4.6.6 GUANIDINIUMTHIOCYANAT-BEHANDLUNG VON PROTEOLIPOSOMEN_111
4.6.7 MARKIERUNG IM AUSSENMEDIUM_112
4.6.7.1 MARKIERUNG AN CF
0-LIPOSOMEN_112
4.67.2 MARKIERUNG VON PROTEOLIPOSOMEN IN REKONSTITUTIONSPUFFER_113
4.67.3 MARKIERUNG VON KOREKONSTITUIERTEN LIPOSOMEN MIT BR & CF^ IN
REKONSTITUTIONSPUFFER_114
4.67.4 MARKIERUNG VON PROTEOLIPOSOMEN IM STANDARDPUFFER DER
KOREKONSTITUTION_115
4.67.5 MARKIERUNG VON PROTEOLIPOSOMEN IN KCI-LOESUNG BEI PH 8,0_117
4.7 MARKER IM VESIKELINNEREN_118
4.8 KRYO-ELEKTRONENMIKROSKOPIE_119
4.9 FLUORESZENZ-EMISSIONSSPEKTREN_122
4.10 KOREKONSTITUTIONEN VON BR UND CF
0FI_123
4.10.1 MONOMERISIERUNG VON BACTERIORHODOPSIN_123
4.10.2 AKTIVER PROTONEN-TRANSPORT IN ABHAENGIGKEIT VOM VERWENDETEN
REKONSTITUTIONSPUFFER_124
4.11 ORIENTIERUNGSGRAD VON BACTERIORHODOPSIN IN VESIKELN_125
4.12 AUSWIRKUNG VON DER ART DER LIPIDE_127
4.12.1 CHOLESTERIN IN REKONSTITUIERTEN LIPOSOMEN_127
4.12.2 KURZKETTIGE LIPIDE_ 128
4.13 CHROMOPHORE DER THYLAKOIDMEMBRAN _129
5. DISKUSSION_131
5.1 VERGLEICH VON ZWEI CFI-LSOLATIONSMETTIODEN_131
5.2 EIGENSCHAFTEN DER ISOLIERTEN ATP-SYNTHASE_133
5.3 MARKIERUNG DER ATP-SYNTHASE MIT EINEM PH-SENSITIVEN
OPTISCHEN INDIKATOR '_134
5.3.1 MARKIERUNG AM CF
0FRKOMPLEX_136
5.3.2 MARKIERUNG AM CFO-KOMPLEX _138
5.3.3 MARKIERUNG AN THYLAKOIDMEMBRANEN _139
5.3.4 MARKIERUNG AN CF0-LIPOSOMEN_139
5.3.5 MARKIERUNG AN REKONSTITUIERTER ATP-SYNTHASE_140
5.3.6 MARKIERUNG DER ATP-SYNTHASE VON DER LUMINALEN SEITE DER
LIPOSOMEN_143
5.4 DENATURIERENDE AGENZIEN_145
5.5 REKONSTITUTION DER ATP-SYNTHASE_146
5.6 KOREKON^TITUTIONEN VON CF^ UND BR_147
5.7 AUSBLICK_150
6. LITERATURVERZEICHNIS_152
7. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS_160
8. ANHANG_162 |
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| spellingShingle | Middendorf, Kornelia 1961- Selektive Markierung der Chloroplasten-ATP-Synthase mit dem pH-sensitiven optischen Indikator Fluorescein und Charakterisierung korekonstituierter Proteoliposomen aus Bacteriorhodopsin und ATP-Synthase Fluoreszenzmarkierung (DE-588)4154829-2 gnd Bakteriorhodopsin (DE-588)4143927-2 gnd Liposom (DE-588)4122262-3 gnd Protonentransfer (DE-588)4176024-4 gnd Wasserstoff-ATP-Synthase (DE-588)4165283-6 gnd |
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