Untersuchungen zur Rolle des Plasminogenaktivator-Inhibitor-2 (PAI-2) in epidermalen Keratinozyten:
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IV
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS PLASMINOGENAKTIVATOR-SYSTEM 1
1.2 DIE KOMPONENTEN DES PA-SYSTEMS 2
1.2.1 PLASMIN(OGEN) 2
1.2.2 GEWEBETYP PLASMINOGENAKTIVATOR (TPA) , 4
1.2.3 UROKINASETYP PLASMINOGENAKTIVATOR (UPA) UND SEIN REZEPTOR (UPA-R)
4
1.2.4 PLASMINOGENAKTIVATOR-INHIBITOR-1 (PAI-1) 6
1.2.5 PLASMINOGENAKTIVATOR-INHIBITOR-2 (PAI-2) 6
1.3 DAS PA-SYSTEM IN DER HAUT 10
1.3.1 DAS PA-SYSTEM IN KERATINOZYTEN DER NORMALHAUT 10
1.3.2 DAS PA-SYSTEM IN "AKTIVIERTEN" KERATINOZYTEN 10
1.4 ZYTOKINE - 11
1.4.1 TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A (TNF-A) 13
1.4.2 INTERLEUKIN-1 SS (IL- ISS) 14
1.4.3 TRANSFORMIERENDER WACHSTUMSFAKTOR-A (TGF-A) 15
1.5 APOPTOSE 16
1.6 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 17
2 MATERIAL UND METHODEN 18
2.1 IMMUNHISTOLOGISCHE METHODEN 18
2.1.1 PATIENTEN 18
2.1.2 GEFRIERSCHNITTE 18
2.1.3 PATHOLOGISCHE UNTERSUCHUNG 19
2.1.4 IMMUNHISTOLOGISCHE FAERBUNGEN 19
2.2 IMMUNOLOGISCHE METHODEN 22
2.2.1 ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) 22
2.2.2 IMMUNBLOT 24
2.3 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 25
2.3.1 DIE HUMANE KERATINOZYTENLINIE HACAT 25
2.3.2 ZYTOKINBEHANDLUNG DER ZELLEN 26
2.3.3 HERSTELLUNG VON KULTURUEBERSTAENDEN UND ZELL-LYSATEN 27
2.3.4 ZYTOTOXIZITAETSTESTS 27
2.4 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 28
2.4.1 MOLEKULARSIEBCHROMATOGRAPHIE 28
2.4.2 INDIREKTER CHROMOGENER PEPTIDSUBSTRATTEST 29
2.4.3 PROTEINBESTIMMUNG (BCA-TEST) 30
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
II
2.S MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 31
2.5.1 RNS-PRAEPARATION UND TRANSFER AUF NYLONMEMBRANEN
(NORTHEM-TRANSFER) 31
2.5.2 HERSTELLUNG DER DNS-SONDEN 32
2.5.3 RADIOAKTIVE MARKIERUNG DER DNS-SONDEN 33
2.5.4 DNS-RNS-HYBRIDISIERUNG 34
2.5.5
IN S/FT/-HYBRIDISIERUNG 35
2.5.6 TRANSFEKTION VON HACAT-ZELLEN MIT PAI-2 38
2.6 VERSUCHE ZUR APOPTOSE 40
2.6.1 NACHWEIS DER DNS-FRAGMENTATION 40
2.6.2 DNS-ANFAERBUNG (KERN-MORPHOLOGIE) 41
3 ERGEBNISSE 42
3.1 IMMUNHISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 42
3.1.1 PAI-2 IN NORMALHAUT 42
3.1.2 PAI-2 IN LAESIONALER HAUT VON LUPUS ERYTHEMATODES 42
3.1.3 PAI-2 IN KERATINOZYTEN AUS LAESIONALER HAUT NACH VERBRENNUNG 43
3.2
IN S/FW-UNTERSUCHUNGEN ZUR EXPRESSION VON PAI-2-MRNS 44
3.3 KOLOKALISATION VON PAI-2 MIT INVOLUCRIN UND TRANSGLUTAMINASE 44
3.4 REGULATION DER PAI-2-EXPRESSION IN HACAT-ZELLEN DURCH
TNF-A, IL-1 SS UND TGF-A 51
3.4.1 DER EINFLUSS VON TNF-A, IL-1 SS UND TGF-A AUF DIE
PAI-2-MRNS-EXPRESSION 54
3.4.2 DER EINFLUSS VON TNF-A, II-1 SS UND TGF-A AUF DIE
PAI-2-ANTIGEN-EXPRESSION 60
3.5 UEBERPRUEFUNG DER FUNKTIONELLEN AKTIVITAET VON PAI-2 AUS HACAT
UEBERSTAENDEN UND -LYSATEN 62
3.6 DIE ROLLE DES PAI-2 ALS APOPTOSE-SCHUTZPROTEIN 65
3.7 DIE WIRKUNG VON TGF-A AUF DIE TNF-A/CHX-INDUZIERTE APOPTOSE
IN HACAT-ZELLEN 72
4 DISKUSSION 76
4.1 PAI-2 IST IN LAESIONALER HAUT VON LE-PATIENTEN AUFREGULIERT 77
4.2 PAI-2 IST MIT TRANSGLUTAMINASE UND INVOLUCRIN IM STRATUM
GRANULOSUM KOLOKALISIERT 79
4.3 DIE PAI-2-EXPRESSION IST IN REEPITHELIALISIERENDEN KERATINOZYTEN
ERHOEHT 80
INHALTSVERZEICHNIS
III
4.4 SEZEMIERTER PAI-2 IST FUNKTIONELL AKTIV 80
4.5 TNF-A, IL-LSS UND TGF-A INDUZIEREN DIE PAI-2-EXPRESSION IN
HACAT-ZELLEN 82
4.6 PAI-2 SCHUETZT HACAT-ZELLEN VOR DER TNF-A/CHX-INDUZIERTEN
APOPTOSE 85
4.7 TGF-A ANTAGONISIERT DIE TNF-A/CHX-INDUZIERTE APOPTOSE IN
HACAT-ZELLEN 88
4.8 SCHLUSSBEMERKUNGEN UND AUSBLICK 90
5 ZUSAMMENFASSUNG 91
6 LITERATURVERZEICHNIS 92
7 PUBLIKATIONSLISTE; 107
TABELLARISCHER LEBENSLAUF |
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