Isolierung, Charakterisierung und Funktion eines induzierbaren Metalloproteaseinhibitors der Großen Wachsmotte Galleria mellonella:
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| Format: | Buch |
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| Veröffentlicht: |
1997
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
.
1-5
1
EINLEITUNG
.
6-18
1.1
BEZIEHUNGEN
ZWISCHEN
INSEKTEN
UND
PILZEN
.
6
1.2
WECHSELBEZIEHUNGEN
ZWISCHEN
INSEKTENPATHOGENEN
PILZEN UND
IHREN
WIRTEN
.
8
1.3
DIE
BEDEUTUNG
DER
VON
INSEKTENPATHOGENEN
PILZEN
FREIGESETZTEN
TOXINE
UND
PROTEASEN
IN
DER
PATHOGENESE
.
10
1.4
DAS
IMMUNSYSTEM
VON
INSEKTEN
.
13
1.4.1
DIE
ZELLULAEREN
ABWEHRREAKTIONEN
VON
INSEKTEN
GEGEN
PILZE
.
13
1.4.2
DIE
HUMORALEN
ABWEHRREAKTIONEN
VON
INSEKTEN
GEGEN
PILZE
.
15
1.4.3
DAS
PROPHENOLOXIDASE/PHENOLOXIDASE-SYSTEM
.
17
2
ZIELE
DIESER
ARBEIT.
.
19-20
2.1
INDUKTION DES
MPI
IM
RAHMEN
VON
HUMORALEN
IMMUNREAKTIONEN
BEI
G.
MELLONELLA
.
19
2.2
ISOLIERUNG DES
MPI
AUS
DER
IMMUNHAEMOLYMPHE
VON
G.
MELLONELLA
.
19
2.3
CHARAKTERISIERUNG
DES
MPI
AUS
DER
IMMUNHAEMOLYMPHE
VON
G.
MELLONELLA
.
20
2.4
BIOLOGISCHE
FUNKTION
DES
MPI
.
20
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
21-74
3.1
DIE
GROSSE
WACHSMOTTE
GALLERIA
MELLONELLA
.
21
3.1.1
VORBEMERKUNG
.
21
3.1.2
HALTUNG
UND
ZUCHT
.
21
3.1.3
ENTWICKLUNG
.
22
3.1.4
INJEKTION
UND
HAEMOLYMPHENTNAHME
.
23
3.2
MIKROBIOLOGISCHE
METHODEN
.
23
3.2.1
VERWENDETE
PILZE
.
23
3.2.2
VERWENDETE
BAKTERIEN
.
24
3.2.3
HERSTELLUNG
DER
VERWENDETEN
NAEHRMEDIEN
.
25
3.2.4
GEWINNUNG
DES
INFEKTIONSMATERIALS
.
26
3.2.5
GEWINNUNG
EXTRAZELLULAERER
PROTEASEN
VON
B.
BASSIANA
UND
M.
ANISOPLIAE
.
29
3.2.6
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
DES
LYSOZYMS
MIT
DEM
LYSISHOFTEST
GEGEN
MICROCOCCUS
LUTEUS
.
29
3.2.7
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
DER
ANTIBAKTERIELLEN
AKTIVITAET
GEGEN
ESCHERICHIA
COLI
MIT
HILFE
DES
HEMMHOFTESTES
.
33
3.3
BIOCHEMISCHE
METHODEN
-
ANALYTISCHE
TECHNIKEN
.
35
3.3.1
QUANTITATIVE
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
.
35
3.3.1.1
PHOTOMETRIE
.
35
3.3.1.2
BRADFORD-ASSAY
.
35
3.3.2
QUALITATIVE
UND
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
PROTEOLYTISCHER
AKTIVITAET
MIT
HILFE
DES
AZOCOLL-ASSAYS
.
37
3.3.2.1
ENZYMKINETISCHE
GRUNDLAGEN
.
37
3.3.2.2
QUALITATIVE
UND
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
DER
PROTEASEINHIBITOREN
IN
DER
ZELLFREIEN
HAEMOLYMPHE
VON
G.
MELLONELLA
.
40
3.3.2.3
THERMOLYSINAKTIVITAET
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
ZYMOSANKONZENTRATION
48
3
3
2
4
WIRKUNG
VON
METALLIONEN
AUF
DIE
THERMOLYSINAKTIVITAET
.
.
.48
3
3.2.5
WIRKUNG
VON
METALLOTHIONEIN
AUF
DIE
THERMOLYSINAKTIVITAET
.
49
3.3.2.6
NACHWEIS
DER
PROTEINNATUR
DES
METALLOPROTEASEINHIBITORS
IN
DER
ZELLFREIEN
HAEMOLYMPHE
VON
G.
MELLONELLA
.
49
3.3.3
MASSENSPEKTROMETRIE
.
51
INHALT
3.3.4
AMINOSAEURENSEQUENZANALYSE
.
51
3.3.5
CHEMISCHE
DEGLYKOSYLIERUNG
.
51
3.3.6
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
DER
PHENOLOXIDASEAKTIVITAET
IN
DER
HAEMOLYMPHE
VON
G.
MELLONELLA
.
51
3.3.7
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
55
3
3.7.1
GELELKTROPHORESE
.
55
3.3.7.2
SDS-POLYACRYLAMIDGRADIENTENGELE
.
56
3
3.7.3
SDS-POLYACRYLAMIDPEPTIDGELE
.
58
3.3.7.4
COOMASSIE-FAERBUNG
.
60
3.3.7.5
SILBER-FAERBUNG
.
60
3.3
7.6
KUPFER-FAERBUNG
.
61
3.4
BIOCHEMISCHE
METHODEN
-
PRAEPARATIVE
TECHNIKEN
.
62
3.4.1
FAELLUNG
VON
PROTEINEN
MIT
HILFE
VON
DENATURANTIEN
.
62
3.4.1.1
TCA-FAELLUNG
.
62
3.4.1.2
HITZE-FAELLUNG
.
63
3.4.2
TRENNUNG
NACH
LOESLICHKEIT
DURCH
AMMONIUMSULFAT-FAELLUNG
.
63
3.4.3
DIALYSE
VON
PROTEINEN
.
65
3.4.4
EINENGUNG
VON
PROTEINLOESUNGEN
.
65
3
4.4.1
GEFRIERTROCKNEN
-
LYOPHILISATION
.
65
3.4.4.2
SPEED-VAC
.
66
3.4.4.3
DRUCKFILTRATION
.
66
3.4.5
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
THERMOLYSIN-CNBR-AKTIVIERTER
SEPHAROSE
4B
.
66
3
4.5.1
HERSTELLUNG
DER
SAEULENMATRIX
.
67
3.4.5
2
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
.
69
3.4.6
GELFILTRATION
MIT
SUPEROSE
6
.
70
3.4.7
WEITERE
SAEULENCHROMATOGRAPHIETECHNIKEN
.
72
3.4.7.1
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
BLUE
SEPHAROSE
.
72
3.4.7.2
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
MIT
DEAE
SEPHAROSE
.
72
3
4.7.3
KATIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
MIT
MONO
S
.
72
3.4.7.4
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
MIT
MONO
Q
.
73
3.4.7
5
REVERSE
PHASE-CHROMATOGRAPHIE
MIT
DER
C4-SAEULE
.
73
3.4.8
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
MIT
KIESELGEL
.
73
4
ERGEBNISSE
.
75-127
4.1
INDUKTION
VON
PROTEASEINHIBITOREN
IM
RAHMEN
EINER
HUMORALEN
IMMUNANTWORT
VON
G.
MELLONELLA
.
75
4.1.1
BESTIMMUNG
DER
PROTEASEINHIBITORAKTIVITAET
IN
DER
HAEMOLYMPHE
VOR
UND
NACH
DER
INJEKTION
VON
PROVOKATOREN
.
75
4.1.2
VERGLEICH
DER
THERMOLYSININHIBITORAKTIVITAET
MIT
DER
ANTIBAKTERIELLEN
AKTIVITAET
IN
DER
HAEMOLYMPHE
IMMUNISIERTER
G.
MELLONELLA-LARVEN.
.
78
4.1.3
VERGLEICH
DER
INDUKTIONSKINETIK
VON
PROTEASEINHIBITOREN
UND
ANTIBAKTERIELLEN
PROTEINEN
IM
VERLAUF
EINER
HUMORALEN
IMMUNANTWORT
.
78
4.1.4
INHIBITORAKTIVITAET
GEGEN
THERMOLYSIN
NACH
DER
INFEKTION
MIT
KONIDIOSPOREN
VONAF.
ANISOPLIAE
.
82
4.2
ISOLIERUNG
DES METALLOPROTEASEINHIBITORS
AUS
DER
IMMUNHAEMOLYMPHE
VON
G.
MELLONELLA
.
84
4.2.1
ENTWICKLUNG
DER
METHODE
FUER
DIE
ISOLIERUNG
DES
METALLOPROTEASEINHIBITORS
AUS
DER
HAEMOLYMPHE
.
84
4.2.2
ISOLIERUNG
DES
METALLOPROTEASEINHIBITORS
.
97
4.3
SPEZIFITAET DES
METALLOPROTEASEINHIBITORS
.
104
4.3.1
THERMOLYSINAKTIVITAET
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
ZYMOSANKONZENTRATION
.
104
4.3.2
ISOLIERUNG
DES
MPI
AUS
DER
HAEMOLYMPHE
VON
UNBEHANDELTEN
TIEREN.
105
4.3.3
WIRKUNG
VON
METALLIONEN
AUF
DIE
THERMOLYSINAKTIVITAET
.108
4.3.4
WIRKUNG
VON
METALLOTHIONEIN
AUF
DIE
THERMOLYSINAKTIVITAET
.108
4.3.5
NACHWEIS
DES
PROTEINCHARAKTERS
DES
MPI
MIT
PROTEINASE
K
.
111
4.3.6
BESTIMMUNG
DER
SPEZIFITAET
VON
MPI
IM
THT-UEBERSTAND
.
112
4.3.7
NACHWEIS
DER
WIRKSPEZIFITAET
MIT
GEREINIGTEM
MPI
.
113
4.4 UNTERSUCHUNGEN
ZU
DEN
BIOLOGISCHEN
FUNKTIONEN
DES
METALLOPROTEASEINHIBITORS
.
115
4.4.1
INUNUNISIERBARKEIT
VON
G.
MELLONELLA
GEGEN
THERMOLYSIN
.
115
4.4.2
WIRKUNG
DES
MPI
AUF
DIE
AKTIVIERUNG
DER
PROPHENOLOXIDASE
DURCH
THERMOLYSIN
.
117
4.5
CHARAKTERISIERUNG
DES
METALLOPROTEASEINHIBITORS
.
119
5
DISKUSSION
.
128-142
5.1
INDUKTION
DES
METALLOPROTEASEINHIBITORS IM
VERLAUF
EINER
HUMORALEN
IMMUNANTWORT
VON
G.
MELLONELLA
.
128
5.2
ISOLIERUNG
DES
METALLOPROTEASEINHIBITORS
AUS
DER
IMMUNHAEMOLYMPHE
VON
G.
MELLONELLA
.
132
5.3
CHARAKTERISIERUNG
DES METALLOPROTEASEINHIBITORS
AUS
DER
IMMUNHAEMOLYMPHE
VON
G.
MELLONELLA
.
134
5.4
DIE
POTENTIELLE
FUNKTION
DES
METALLOPROTEASEINHIBITORS
.
136
5.5
AUSBLICK
.
142
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
143
7
LITERATUR.
.
144-154
8
ANHANG
.
155-160
9
DANKSAGUNG.
.
161
10
LEBENSLAUF
.
162 |
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| spelling | Wedde, Marianne 1967- Verfasser (DE-588)115393838 aut Isolierung, Charakterisierung und Funktion eines induzierbaren Metalloproteaseinhibitors der Großen Wachsmotte Galleria mellonella vorgelegt von Marianne Wedde 1997 161 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Berlin, Freie Univ., Diss., 1997 Immunreaktion (DE-588)4133841-8 gnd rswk-swf Große Wachsmotte (DE-588)4158252-4 gnd rswk-swf Hämolymphe (DE-588)4322615-2 gnd rswk-swf Metalloproteinaseninhibitor (DE-588)4305228-9 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Große Wachsmotte (DE-588)4158252-4 s Immunreaktion (DE-588)4133841-8 s Hämolymphe (DE-588)4322615-2 s Metalloproteinaseninhibitor (DE-588)4305228-9 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007670939&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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