Untersuchungen zur Modulation von Fibroblasten im Verlauf der Wundheilung:
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| Format: | Buch |
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1997
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| Beschreibung: | Leipzig, Univ., Diss., 1997 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
INHALTSVERZEICHNIS
1 ABKUERZUNGEN 4
2 EINLEITUNG 5
2.1 DYNAMIK DER WUNDHEILUNG 6
2.2 BEDEUTUNG DER ADHAESIONSMOLEKUELE BEI DER WUNDHEILUNG 17
2.3 REGULATION DER FIBROBLASTENFUNKTIONEN 22
3 AUFGABENSTELLUNG 28
4 MATERIAL UND METHODEN 30
4.1 MATERIAL 30
4.1.1 CHEMIKALIEN 30
4.1.2 MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 31
4.1.2.1 ZELLKULTUR 31
4.1.2.2 MOLEKULARBIOLOGIE 31
4.1.2.3 ANTIKOERPER UND CHEMOATTRAKTANTIEN 33
4.1.2.4 ENZYME 33
4.1.2.5 GENSONDEN 34
4.1.2.6 FILME UND FOTOGRAFISCHES ZUBEHOER 34
4.2 METHODEN 34
4.2.1 GEWINNUNG DES GRANULATIONSGEWEBES 34
4.2.2 ZELLKULTUR 35
4.2.2.1 PASSAGIEREN DER ZELLKULTUREN 35
4.2.3 PLASMIDPRAEPARATION 35
4.2.4 LINEARISIERUNG DER PRAEPARIERTEN PLASMID-DNA 35
4.2.5 NICHTRADIOAKTIVE MARKIERUNG VON RNA-SONDEN DURCH
IN V/TRO-TRANSKRIPTION 35
4.2.6 NICHTRADIOAKTIVE MARKIERUNG DER PDGF-REZEPTOR-(ALPHA-KETTE) SONDE
DURCH ENDMARKIERUNG 36
4.2.7 PRAEPARATION DER GESAMT-RNA 36
4.2.8 FORMALDEHYDGEL-ELEKTROPHORESE DER RNA 36
4.2.9 RNA-TRANSFER 37
4.2.10 NICHTRADIOAKTIVE HYBRIDISIERUNG DER RNA 37
4.2.11
IN S/FU-HYBRIDISIERUNG 3G
4.2.11.1 BESCHICHTUNG DER OBJEKTTRAEGER 39
4.2.12 CHEMOTAXIS 39
4.2.13 UNTERSUCHUNGEN MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE (FACS-ANALYSE) 40
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2
4.2.14 KOLLAGENGELKONTRAKTION 40
4.2.14.1 HERSTELLUNG VON KOLLAGENLOESUNGEN 40
4.2.14.2 PRIPARATION DER KOLLAGENGELE 40
5 ERGEBNISSE 42
5.1 ALLGEMEINE METHODISCHE ERGEBNISSE 42
5.1.1 EXPERIMENTELLES DESIGN 42
5.1.2 GEWINNUNG UND KULTIVIERUNG HUMANER DERMALER FIBROBLASTEN 43
I
5.1.3 NORTHERN HYBRIDISIERUNG 43
5.1.4 UNTERSUCHUNGEN MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE 45
5.1.5
IN SZRW-HYBRIDISIERUNG 45
5.1.6 CHEMOTAXIS 46
5.2 UNTERSUCHUNGEN ZUM MIGRATORISCHEN VERHALTEN VON FIBROBLASTEN AUS
NORMALHAUT UND
GRANULATIONSGEWEBE _ 47
5.2.1 PDGF-VERMITTELTE CHEMOTAXIS 47
5.2.2 ANALYSE DES PDGF-REZEPTORS 48
5.2.2.1 MRNA-STEADY-STATE-KONZENTRATIONEN DER SS-KETTE DES PDGF-REZEPTORS
48
5.2.2.2 MRNA-STEADY-STATE-KONZENTRATION DER A-KETTE DES PDGF-REZEPTORS
49
5.2.2.3 FLOWZYTOMETRISCHE ANALYSE DER SS-KETTE DES PDGF-REZEPTORS 50
5.2.2.4 FLOWZYTOMETRISCHE ANALYSE DER A-KETTE DES PDGF-REZEPTORS 51
5.2.2.5
IN /-ANALYSE DES PDGF-REZEPTORS IN HAUT- UND GRANULATIONSGEWEBE 52
5.3 ANALYSE DER INTEGRINEXPRESSION VON HAUT- UND
GRANULATIONSGEWEBSFIBROBLASTEN 54
5.3.1 ANALYSE DER SSI-UNTEREINHEIT DER VLA-INTEGRINE 55
5.3.2 FLOWZYTOMETRISCHE ANALYSE DER A2-UNTEREINHEIT DES VLA-2 INTEGRINS
57
5.3.3 FLOWZYTOMETRISCHE ANALYSE DER ASS-UNTEREINHEIT DES VLA-3 INTEGRINS
58
5.3.4 FLOWZYTOMETRISCHE ANALYSE DER A4-UNTEREINHEIT DES VLA-4 INTEGRINS
59
5.3.5 FLOWZYTOMETRISCHE ANALYSE DER A5-UNTEREINHEIT DES VLA-5 INTEGRINS
60
5.3.6 FLOWZYTOMETRISCHE ANALYSE DER AY-UNTEREINHEIT DES
VITRONEKTINREZEPTORS 61
5.4 UNTERSUCHUNGEN ZUR EXPRESSION DES ICAM-1 IM GRANULATIONSGEWEBE UND
IN HAUT- UND
GRANULATIONSGEWEBSFIBROBLASTEN 63
5.4.1 MRN
A-STEADY-STATE-KONZENTRATIONEN VON ICAM-1 IN HAUT- UND
GRANULATIONSGEWEBSFIBROBLASTEN 63
5.4.2 FLOWZYTOMETRISCHE ANALYSE DES ADHAESIONSMOLEKUELS ICAM-1 AUF HAUT-
UND
GRANULATIONSGEWEBSFIBROBLASTEN 64
5.4.3
IN SITU-ANALYSE DES ICAM-1 IN HAUT- UND GRANULATIONSGEWEBE 65
5.5 UNTERSUCHUNGEN ZUR KONTRAKTION VON TYP-I-KOLLAGENGELEN 67
INHALTSVERZEICHNIS
3
5.6 CHARAKTERISIERUNG DES KOLLAGENSTOFFWECHSELS IM VERLAUF DER
WUNDHEILUNG 68
5.6.1 MRNA-STEAUE^-STATE-KONZENTRATION VON KOLLAGEN TYP I IN KULTIVIERTEN
FIBROBLASTEN
AUS HAUT- UND GRANULATIONSGEWEBE 69
5.6.2
IN SITU-ANALYSE DER A I (I)-PROKOLLAGEN-MKNA-EXPRESSION IN HAUT-
UND GRANULATIONSGEWEBE 70
5.6.3 MRNA-S/EACFY-STARE-KONZENTRATION DER INTERSTITIELLEN KOLLAGENASE
(MMP-1)
IN KULTIVIERTEN FIBROBLASTEN AUS HAUT- UND GRANULATIONSGEWEBE 72
5.6.4
IN SITU-ANALYSE DER INTERSTITIELLEN KOLLAGENASE-(MMP-L)-MRNA-EXPRESSION
IN HAUT- UND
GRANULATIONSGEWEBE 73
6 DISKUSSION 75
6.1 UNTERSUCHUNGEN ZUM MIGRATORISCHEN VERHALTEN VON
GRANULATIONSFIBROBLASTEN 76
6.2 CHARAKTERISIERUNG DER EXPRESSION VON ADHAESIONMOLEKUELEN IM VERLAUF
DER WUNDHEILUNG 79
6.3 UNTERSUCHUNGEN ZUM VERHALTEN VON GRANULATIONSFIBROBLASTEN IN
DREIDIMENSIONALEN
KOLLAGENGELEN 83
6.4 ANALYSE DES KOLLAGENSTOFFWECHSEL IM VERLAUF DER WUNDHEILUNG 84
7 ZUSAMMENFASSUNG 88
8
LITERATURVERZEICHNIS
92 |
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