Analytische Untersuchungen zum allometrischen Muskelwachstum beim Rind: Quantifizierung der Expression des insulinähnlichen Wachstumsfaktors-1 und rekombinante Herstellung des Wachstumshormonbindungsproteins
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München
Utz, Wiss.
1997
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| Schriftenreihe: | Veterinärmedizin
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| Beschreibung: | Zugl.: München, Techn. Univ., Diss., 1997 |
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I
NHALTSVERZEICHNIS
I
I
NHALTSVERZEICHNIS
I
1
E
INLEITUNG
UND
A
UFGABENSTELLUNG
1
2
L
ITERATUROBERSICHT
3
2.1
ALLOMETRISCHES
MUSKELWACHSTUM
BEIM
WIEDERKAEUER
3
2.2
INSULIN-AEHNLICHER
WACHSTUMSFAKTOR
(IGF-1)
6
2.2.1
BIOLOGISCHE
EFFEKTE
DES
IGF-1
7
2.2.2
BILDUNGSORTE
UND
MOLEKULARE
WIRKUNGSMECHANISMEN
8
2.2.3
IGF-1
EXPRESSION
UND
ALTERNATIVES
SPLICING
10
2.2.4
IGF-1
WIRKUNGEN
AUF
DIE
MUSKULATUR
WAEHREND
DES
POSTNATALEN
WACHSTUMS
13
2.3
WACHTUMSHORMONBINDUNGSPROTEIN
(GHBP)
15
2.3.1
DER
WACHSTUMSHORMONREZEPTOR
(GHR)
15
2.3.2
PROTEINSTRUKTUR
UND
ENTSTEHUNG
DES
GHBP
17
2.3.3
AUFGABEN
DES
GHBP
18
2.3.4
REGULATION
DES
GHR
UND
GHBP
19
2.4
QUANTIFIZIERUNG
SPEZIFISCHER
MRNAS
21
2.4.1
VERGLEICH
DER
QUANTIFIZIERUNGSMETHODEN
21
2.4.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
UND
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(RT-PCR)
23
2.4.3
FUNKTIONSWEISE
DER
KOMPETITIVEN
RT-PCR
26
2.5
REKOMBINANTE
EXPRESSION
VON
PROTEINEN
29
2.5.1
REKOMBINANTE
EXPRESSION
VON
FUSIONSPROTEINEN
IN
E.
COLI
29
2.5.2
PMAL
EXPRESSIONSSYSTEM
31
II
I
NHALTSVERZEICHNIS
3
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
GEWEBESPEZIFISCHEN
E
XPRESSION
VON
IGF-1
M
RNA.
M
ETHODISCHER
T
EIL
MIT
D
ISKUSSION
36
3.1
CHARAKTERISTIKA
UND
AUFBAU
DER
VERSUCHSTIERGRUPPEN
36
3.1.1
VERSUCH
ZUM
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
EMAEHRUNGSNIVEAUS
36
3.1.2
VERSUCH
ZUM
EINFLUSS
VON
SEXUALSTEROIDEN
37
3.1.3
GEWEBEPROBEN
38
3.1.3.1
CHARAKTERISTIKA
DER
UNTERSUCHTEN
MUSKELN
UND
GEWEBE
38
3.1.3.2
GEWEBE
UND
BLUTPROBENTNAHME
40
3.1.3.3
MESSUNG
UND
BERECHNUNG
DER
SCHLACHTKOERPERZUSAMMENSETZUNG
40
3.2
ENTWICKLUNG
UND
VALIDIERUNG
DER
IGF-1
MRNA
QUANTIFIZIERUNG
42
3.2.1
KONSTRUKTION
DER
INTERNEN
STANDARD
IGF-1
CDNA
42
3.2.2
TRANSKRIPTION
DER
STANDARD
IGF-1
CRNA
45
3.2.3
QUANTIFIZIERUNG
DER
STANDARD
IGF-1
CRNA
46
3.2.4
OPTIMIERUNG
DER
KOMPETITIVEN
IGF-1
RT-PCR
47
3.2.5
EFFIZIENZ
DER
INTERN
STANDARDISIERTEN
KOAMPLIFIKATION
52
3.2.6
DETEKTION
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
PCR-PRODUKTE
MITTELS
HPLC-UV
55
3.2.7
BERECHNUNG
DER
IGF-1
MRNA
GEHALTE
IN
DEN
RNA-PRAEPARATIONEN
57
3.2.8
EMPFINDLICHKEIT
UND
MESSGENAUIGKEIT
58
3.2.9
DISKUSSION
ZUR
TESTENTWICKLUNG
UND
VALIDIERUNG
DER
KOMPETITIVEN
IGF-1
RT-PCR
60
3.3
QUANTIFIZIERUNG
DES
GH-REZEPTORS
IN
DER
LEBER
64
3.4
QUANTIFIZIERUNG
DER
PLASMA
IGF-1
GEHALTE
65
3.5
BEZUGSGROESSEN
65
3.5.1
EXTRAKTION
UND
QUANTIFIZIERUNG
DER
GESAMT
RNA
65
3.5.2
FLUOROMETRISCHE
DNA-QUANTIFIZIERUNG
68
3.5.3
DISKUSSION
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
DER
BEZUGSGROESSEN
69
3.6
STATISTISCHE
METHODEN
ZUR
AUSWERTUNG
DER
ERGEBNISSE
71
I
NHALTSVERZEICHNIS
IN
4
E
RGEBNISSE
DER
V
ERSUCHE
ZUR
G
EWEBESPEZIFISCHEN
E
XPRESSION
VON
IGF-1
M
RNA
72
4.1
ERGEBNISSE
AUS
DEM
VERSUCH
ZUM
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
FUETTERUNGSNIVEAUS:
72
4.1.1
MAST
UND
SCHLACHTLEISTUNG
72
4.1.2
GESAMT-RNA-GEHALTE
IN
DEN
EINZELNEN
GEWEBEN
77
4.1.3
GESAMT-DNA-GEHALTE
IN
DEN
EINZELNEN
GEWEBEN
78
4.1.4
TRNA
/
DNA
VERHAELTNIS
79
4.1.5
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
VON
IGF-1
MRNA
79
4.1.6
GH-REZEPTOR
IN
DER
LEBER
83
4.2
ERGEBNISSE
AUS
DEM
VERSUCH
ZUM
EINFLUSS
VON
SEXUALSTEROIDEN:
84
4.2.1
MAST
UND
SCHLACHTLEISTUNG
84
4.2.2
GESAMT-RNA-GEHALTE
IN
DEN
EINZELNEN
GEWEBEN
84
4.2.3
GESAMT-DNA-GEHALTE
IN
DEN
EINZELNEN
GEWEBEN
85
4.2.4
TRNA
/
DNA
VERHAELTNIS
86
4.2.5
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
VON
IGF-1
MRNA
87
4.2.6
GH-REZEPTOR
IN
DER
LEBER
89
4.2.7
IGF-1-PLASMAWERTE
89
5
D
ISKUSSION
DER
V
ERSUCHSERGEBNISSE
ZUR
R
EGULATION
DER
G
EWEBESPEZIFISCHEN
E
XPRESSION
VON
IGF-1
M
RNA
91
5.1
MAST
UND
SCHLACHTLEISTUNG
DER
UNTERSUCHTEN
VERSUCHSTIERGRUPPEN
91
5.1.1
VERAENDERUNG
BEI
UNTERSCHIEDLICHER
FUETTERUNG
91
5.1.2
VERGLEICH
VON
OCHSEN
UND
BULLEN
93
5.2
REGULATION
DER
TRNA
UND
TRNA/DNA
RATIO
93
5.3
FUETTERUNGSEINFLUSS
AUF
DIE
IGF-1
MRNA
EXPRESSION
95
5.4
KASTRATIONSEINFLUSS
AUF
DIE
IGF-1
EXPRESSION
98
5.5
IGF-1
EXPRESSIONSRATEN
UND
REGULATION
DURCH
DIE
IGF-BPS
100
5.6
AFFINITAET
UND
KAPAZITAET
DES
HEPATISCHEN
GH
REZEPTORS
UND
AUSWIRKUNG
AUF
DIE
IGF-1
EXPRESSION
102
5.7
IGF-1
UND
IGF-1-REZEPTOR
INTERAKTIONEN
103
5.8
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
MUSKELFASERZUSAMMENSETZUNG
105
IV
I
NHALTSVERZEICHNIS
6
R
EKOMBINANTE
E
XPRESSION
UND
R
EINDARSTELLUNG
DES
OVINEN
GHBP
M
ETHODISCHER
T
EIL
MIT
E
RGEBNISSEN
106
6.1
KLONIERUNG
UND
EXPRESSION
DES
FUSIONSPROTEINS
106
6.1.1
KONSTRUKTION
DES
VEKTORS
PMAL-C2-OGHBP
UND
PMAL-C2-OGHR
UND
DIE
TRANSFORMATION
IN
E.
COLI
106
6.1.2
UEBEREXPRESSION
DER
FUSIONSPROTEINE:
MBP-OGHBP
UND
MBP-OGHR
110
6.1.3
OPTIMIERUNG
DER
UEBEREXPRESSION
DES
FUSIONSPROTEINS
MBP-OGHBP
112
6.2
REINIGUNG
DES
FUSIONSPROTEINS
113
6.2.1
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
114
6.2.2
QUANTIFIZIERUNG
DES
PROTEINGEHALTES
DER
AFFINITAETSGEREINIGTEN
FRAKTIONEN
115
6.2.3
REINDARSTELLUNG
DES
ROGHBP
117
6.2.3.1
VERDAU
DES
FUSIONSPROTEINS
ZU
MBP
UND
ROGHBP
117
6.2.3.2
ANIONENTAUSCHERCHROMATOGRAPHIE
119
6.2.3.3
PRAEPARATIVE
POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE
121
6.3
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
DER
REKOMBINANTEN
PROTEINE
125
6.3.1
PROTEIN-DISULFID-ISOMERASE
125
6.3.2
GELFILTRATION
MITTELS
FPLC
127
6.3.3
LIGAND-REZEPTOR
BINDUNGSSTUDIEN
127
7
D
ISKUSSION
DER
E
XPRESSION
VON
REKOMBINANTEN
R
EZEPTORPROTEINEN
UND
DEREN
R
EINDARSTELLUNG
129
8
R
EKOMBINANTESO
GHBP:
W
EITERFUEHRENDE
E
XPERIMENTE
UND
A
USBLICK
138
9
Z
USAMMENFASSUNG
/
S
UMMARY
139
9.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
GEWEBESPEZIFISCHEN
EXPRESSION
VON
IGF
1
MRNA
139
9.2
REKOMBINANTE
EXPRESSION
UND
REINDARSTELLUNG
DES
OVINEN
GHBP
142
9.3
SUMMARY
143
I
NHALTSVERZEICHNIS
V
10
L
ITERATUR
-
UND
Q
UELLENVERZEICHNIS
146
11
A
NHANG
V
11.1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
VI
11.2
DARSTELLUNGSVERZEICHNIS
X
11.3
SEQUENZEN
XIV
11.3.1
MBP-OGHBP
SEQUENZ
(1914
BP;
637
AS)
IN
PMAL-C2
XIV
11.3.2
ROGHBP
SEQUENZ
(723
BP;
250
AS)
IN
PMAL-C2
XV
11.3.3
IGF-1
(240
BP)
UND
IGF-1
STANDARD
(184
BP)
SEQUENZEN
XVI
11.4
TABELLENANHANG
XVII
11.5
DANKSAGUNG
XXIX
11.6
LEBENSLAUF
XXX |
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