Die Darstellung löslicher Zellproteine mittels SDS-Polyacrylamidgel-Elektrophorese zur Differenzierung lebensmittelhygienisch relevanter Clostridium spp.:
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
A
EINLEITUNG
1
B
LITERATUR
3
1
GENUS
CLOSTRIDIUM
3
1.1
TAXONOMIE
UND
GATTUNGSMERKMALE
3
1.2
VORKOMMEN
UND
BEDEUTUNG
3
2
C.
PERFRINGENS
5
2.1
C.
PERFRINGENS
ALS
KRANKHEITSERREGER
5
2.1.1
KLASSIFIZIERUNG
ANHAND
DER
TOXINBILDUNG
5
2.1.2
DIE
MAJOR-TOXINE
UND
IHRE
KLINISCHE
BEDEUTUNG
8
2.2
VORKOMMEN
VON
C.
PERFRINGENS
IN
LEBENSMITTELN
9
2.2.1
KONTAMINATION
VON
SCHLACHTTIERKOERPERN
9
2.2.2
GEWUERZE
ALS
KONTAMINATIONSQUELLE
11
2.2.3
C.
PERFRINGENS
ALS
VERDERBNISERREGER
IN
LEBENSMITTELN
11
2.4
C.
PERFRINGENS
TYP
A
-
LEBENSMITTELVERGIFTUNG
12
2.4.1
AETIOLOGIE
UND
SYMPTOMATIK
12
2.4.2
VORKOMMEN
IM
RAHMEN
DER
GEMEINSCHAFTSVERPFLEGUNG
13
3
C.
SPOROGENES
14
3.1
VORKOMMEN
UND
BEDEUTUNG
14
3.2
WIRTSCHAFTLICHE
BEDEUTUNG
ALS
VERDERBNISERREGER
15
4
C.
BLFERMENTANS
16
4.1
VORKOMMEN
16
4.2
BEDEUTUNG
16
5
C.
SORDELLII
17
5.1
VORKOMMEN
UND
BEDEUTUNG
17
6
C.
TYROBUTYRICUM
UND
C.
BUTYRICUM
18
6.1
BEDEUTUNG
ALS
VERDERBNISERREGER
IN
MILCH
UND
MICHPRO
DUKTEN
18
II
6.2
.SPAETBLAEHUNG*
BEI
HARTKAESEN
19
7
IDENTIFIZIERUNG
UND
DIFFERENZIERUNG
VON
BAKTERIEN
20
7.1
DEFINITION
DER
TAXONOMISCHEN
BEGRIFFE
YYSPEZIES*
UND
.SUBSPEZIES
"
20
7.2
VERFAHREN
ZUR
IDENTIFIZIERUNG
UND
DIFFERENZIERUNG VON
BAKTERIEN
20
7.2.1
VERFAHREN
ZUR
GENOTYPISCHEN
CHARAKTERISIERUNG
21
7.2.1.1
PLASMIDANALYSE
22
7.2.1.2
RESTRIKTIONSANALYSE
CHROMOSOMALER
DNA
(REA)
22
7.2.1.3
RIBOTYPISIERUNG
23
7.2.1.4
POLYMERASE
CHAIN
REACTION
(PCR)
24
7.2.2
VERFAHREN
ZUR
PHAENOTYPISCHEN
CHARAKTERISIERUNG
25
7.2.2.1
BIOTYPISIERUNG
26
7.2.2.2
ANTIBIOTIKA-RESISTENZTEST
26
7.2.23
SEROTYPISIERUNG
27
7.2.2.4
BAKTERIOPHAGENTYPISIERUNG
27
7.2.2.5
BAKTERIOCINTYPISIERUNG
28
7.3
ELEKTROPHORESE
28
7.3.1
ALLGEMEINES
29
7.3.2
POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
(PAGE)
29
7.3.3
SDS-POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
30
7.3.4
ELEKTROPHORETISCHE
DARSTELLUNG
DER
ZELLPROTEINE
VON
BAKTERIEN
31
7.3.4.1
ELEKTROPHORETISCHE
ANALYSE
VON
BAKTERIENENZYMEN
32
7.3.4.1.1
MULTILOCUS
ENZYM
ELEKTROPHORESE
(MLEE)
32
7.3.4.1.2
ELEKTROPHORETISCHER
ESTERASEPOLYMORPHISMUS
32
7.3.4.2
DIE
ANWENDUNG
VON
(SDS)-PAGE
ZUR
CHARAKTE
RISIERUNG
VON
BAKTERIEN
33
7.3.4.2.1
SPEZIES-DIFFERENZIERUNG
VON
CLOSTRIDIEN
MITTELS
PAGE
35
7.3.42.2
STAMM-DIFFERENZIERUNG
VON
CLOSTRIDIEN
MITTELS
PAGE
36
III
C
EIGENE
UNTERSUCHUNGEN
1
MATERIAL
39
1.1
TESTSTAEMME
39
1.1.1
CLOSTRIDIUM
PERFRINGENS
TYP
A
39
1.1.2
CLOSTRIDIUM
SPOROGENES
42
1.1.3
CLOSTRIDIUM
BIFERMENTANS
43
1.1.4
CLOSTRIDIUM
SORDELLII
43
1.1.5
CLOSTRIDIUM
BUTYRICUM
45
1.1.6
CLOSTRIDIUM
TYMBUTYRICUM
46
1.2
AUFBEWAHRUNG
DER
CLOSTRIDIEN-STAEMME
46
1.3
NAEHRMEDIEN
FUER
DIE
KULTIVIERUNG
DER
CLOSTRIDIEN
47
1.3.1
FLUESSIGES
NAEHRMEDIUM
47
1.3.2
FESTE
NAEHRMEDIEN
47
1.4
TECHNISCHE
HILFSMITTEL,
LOESUNGEN
UND
REAGENZIEN
FUER
DIE
PROTEINPRAEPARATION
50
1.4.1
TECHNISCHE
HILFSMITTEL
50
1.4.2
LOESUNGEN
UND
REAGENZIEN
51
1.5
REAGENZIEN
UND
TECHNISCHE
HILFSMITTEL
FUER
DIE
BESTIM
MUNG
DER
GESAMTPROTEINKONZENTRATION
52
1.5.1
REAGENZIEN
52
1.5.2
TECHNISCHE
HILFSMITTEL
52
1.6
MATERIALIEN
UND
TECHNISCHE
HILFSMITTEL
FUER
DIE
DURCHFUEH
RUNG
DER
SDS-POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
53
1.6.1
MATERIALIEN
53
1.6.2
APPARATIVE
AUSRUESTUNG
56
1.7
REAGENZIEN
FUER
DIE
FAERBUNG,
ENTFAERBUNG
UND
KON
SERVIERUNG
DER
POLYACRYLAMIDGELE
56
1.7.1
FAERBUNG
56
1.7.2
ENTFAERBUNG
56
1.7.3
KONSERVIERUNG
57
1.8
APPARATIVE
AUSRUESTUNG
FUER
DIE
DENSITOMETRIE
57
IV
2
METHODE
57
2.1
KULTIVIERUNG
DER
CLOSTRIDIENSTAEMME
57
2.2
PROTEINPRAEPARATION
58
2.2.1
PRAEPARATION
SOS-DENATURIERTER
GANZZELL
LYSATE
MIT
ZELLDEBRIS
58
2.2.2
PRAEPARATION
SDS-DENATURIERTER
GANZZELL
LYSATE
OHNE
ZELLDEBRIS
59
2.3
MESSUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
59
2.4
DURCHFUEHRUNG
DER
SDS-PAGE
60
2.5
FAERBEN,
ENTFAERBEN
UND
TROCKNEN
61
2.6
DURCHFUEHRUNG
DER
DENSITOMETRISCHEN
ANALYSE
61
2.7
CLUSTER-ANALYSE
63
D
ERGEBNISSE
64
1
VERGLEICH
GEEIGNETER
NAEHRMEDIEN
FUER
DIE
ANZUECHTUNG
DER
CLOSTRIDIEN-STAEMME
64
2
VERGLEICH
VON
GANZZELL-PROTEIN-LYSATEN
MIT
UND
OHNE
ZELLDEBRIS
ALS
AUSGANGSMATERIAL
FUER
DIE
SDS-PAGE
67
3
ERGEBNISSE
DER
SDS-PAGE
68
3.1
ANALYSE
DER
PROTEINPHEROGRAMME
DER
C.
PERIRINGENS
TYP
A-STAEMME
71
3.1.1
VISUELLE
AUSWERTUNG
71
3.1.2
DENSITOMETRISCHE
AUSWERTUNG
71
3.2
DIFFERENZIERUNG
VON
CLOSTRIDIUM
SPP.
MIT
HILFE
DER
SDS-PAGE
80
3.2.1
ANALYSE
DER
PROTEINPHEROGRAMME
DER
C.
SPOROGENES
-
STAEMME
82
3.2.2
ANALYSE
DER
PROTEINPHEROGRAMME
DER
C.
BIFERMENTANS
STAEMME
84
3.2.3
ANALYSE
DER
PROTEINPHEROGRAMME
DER
C.
SORDELLUE
STAEMME
86
3.2.4
ANALYSE
DER
PROTEINPHEROGRAMME
DER
C.
BUTYRICUM
STAEMME
88
3.2.5
ANALYSE
DER
PROTEINPHEROGRAMME
DER
C.
TYROBUFYRICUM
STAEMME
91
4
CLUSTER-ANALYSE
93
E
DISKUSSION
96
1
ANZUECHTUNG
DER
CLOSTRIDIEN-STAEMME
AUF
PLATE
COUNT
AGAR
96
2
DIE
EIGNUNG
VON
GANZZELL-LYSATEN
MIT
ZELLDEBRIS
FUER
DIE
SDS-PAGE
96
3
PRAKTIKABILITAET
DER
SDS-PAGE
97
4
REPRODUZIERBARKEIT
DER
ELEKTROPHORETISCHEN
TRENN
ERGEBNISSE
98
5
AUSWERTUNG
DER
SDS-PAGE-PROTEINPHEROGRAMME
99
5.1
VISUELLE
AUSWERTUNG
99
5.2
DENSITOMETRISCHE
AUSWERTUNG
104
5.3
CLUSTER-ANALYSE
106
F
SCHLUSSFOLGERUNGEN
107
G
ZUSAMMENFASSUNG
109
H
SUMMARY
111
I
LITERATURVERZEICHNIS
113 |
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