Untersuchungen zur Funktion des TSPY (testis-specific protein, Y-encoded) bei Säugern:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
5
1.1
DAS
WESEN
DES
SAEUGER-Y-CHROMOSOMS
5
DAS
HUMANE
Y-CHROMOSOM
-
ORIENTIERUNG
5
1.1.1
DIE
EVOLUTION
DES
SAEUGER
Y-CHROMOSOMS
7
VON
XY-HOMOLOGEN
GENKOPIEN
ZU
Y-GENEN
MIT
MAENNLICH-SPEZIFISCHEN
EIGENSCHAFTEN
9
1.1.2
TSPY
-
FESTE
SPECIFIC
PROTEIN
Y-ENCODED
10
1.2
DAS
WESEN
DER
TESTIKULAEREN
DIFFERENZIERUNG
15
1.2.1
TESTISDETERMINIENMG
UND
ORGANOGENESE
16
1.2.1.1
MOLEKULARGENETIK
DER
TESTISDETERMINIERUNG
16
1.2.1.2
ORGANOGENESE
UND
HISTOLOGIE
DES
TESTIS
19
1.2.2
KEIMZELLREIFUNG
21
1.2.3
PATHOLOGISCHE
VORGAENGE
IM
TESTISGEWEBE
22
1.2.3.1
OLIGO-UND
AZOOSPERMIE
22
1.2.3.2
TESTIKULAERE
TUMOREN
25
KLASSIFIZIERUNG
25
CARCINOMA
IN
SITU
DES
TESTIS
25
1.2.4
DIE
REGULATION
DES
ZELLZYKLUS
27
1.2.4.1
DAS
PRINZIP:
MODULIERTE
KINASE
28
1.2.4.2
CYCLINE:
KENNDATEN
FUER
STRUKTUR
UND
FUNKTION
30
1.3
ZIELSETZUNG
DIESER
ARBEIT
32
2.
MATERIAL
&
METHODEN
33
2.1
MATERIAL
33
2.1.1
CHEMIKALIEN
33
2.1.1.1
ALLGEMEINE
CHEMIKALIEN
33
2.1.1.2
ENZYME
UND
BIOLOGISCHE
SUBSTANZEN
UND
RADIOCHEMIE
33
2.1.1.3
KITS
34
2.1.2
MATERIALIEN
UND
GERAETE
34
2.1.2.1
SAEULENMATERIAL,
FILTER,
ROENTGENFILME
34
2.1.2.2
GERAETE
35
2.1.3
STANDARDLOESUNGEN,-MEDIEN
UND-PUFFER
35
2.1.4
MIKROORGANISMEN
38
2.1.5
GEWEBE,
PRAEPARATE
UND
CDNA-BANKEN
38
2.1.6
PRIMERSEQUENZEN
39
2.1.7
GENBANK-ACCESSFON-NUMMEM
39
2.1.8
COMPUTERPROGRAMME
39
2.2
METHODEN
40
2.2.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
VERFAHREN
40
2.2.1.1
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
GEWEBEN
40
2.2.1.2
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
AUS
GEWEBEN
41
2.2.1.3
ISOLIERUNG
VON
POLY(A)
+
-RNA
AUS
GEWEBEN
41
2.2.1.4
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
41
2.2.1.5
DNA-REINIGUNG
42
DNA-PRAEZIPITATION
42
CENTRICON-100
ULTRAFILTRATION
42
PIC-EXTRAKTION
43
2.2.1.6
KLONIERUNG
UND
PLASMIDAMPLIFIKATION
IN
BAKTERIEN
43
HERSTELLUNG
CA2
+
-KOMPETENTER
BAKTENEN
(NACH
HANAHAN,
1985)
43
TRANSFORMATION
43
HERSTELLUNG
VON
FLUESSIGEN
BAKTERIENKULTUREN
UND
GLYCERINSTOCKS
43
PLASMIDPRAEPARATIONEN
43
2.2.1.7
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
AUS
GENOMISCHER
DNA
44
2.2.1.8
PCR
AUS
REVERS-TRANSKRIBIERTER
RNA
(RT-PCR)
44
2.2.1.9
RESTRIKTIONSVERDAU
45
2.2.1.10
SOUTHERN-BLOT
45
2.2.1.11
NORTHERN-BLOT
46
2.2.1.12
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
SONDEN
47
2.2.1.13
HERSTELLUNG
DIGOXIGENIN-MARKIERTER
DNA
UND
RNA-SONDEN
48
DIG-MARKIERTE
DNA-SONDEN
48
DIG-MARKIERTE
RNA-SONDEN
(DIG-RIBO-PMBES)
48
2.2.1.14
DURCHSUCHEN
VON
PHAGEN-CDNA-BANKEN,
X-UNI-ZAPII-TYP
49
PLATTIERUNG
UND
TITRATION
DER
CDNA-BANK
49
HERSTELLUNG
VON
PLAQUEFIITEM
49
PLAQUEHYBRIDISIERUNG
UND
AUSWERTUNG
50
SEKUNDAERE
ANALYSE
DER
KANDIDATENKLONE
50
VEREINZELUNG
DER
KANDIDATENKLONE
50
HERAUSSCHNEIDEN
VON
PHAGEMIDS
(IN
VRVO-EXDSION)
DOFFO
EF
AL
,
1984
51
2.2.1.15
DNA-SEQUENZIERUNG
51
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMID-DNA
52
SEQUENZIERUNG
VON
DOPPELSTRANG-PCR-PRODUKTEN
53
SEQUENZIERUNG
VON
EINZELSTRANG-PCR-PRODUKTEN
53
ELEKTROPHORESE
VON
SEQUENZIERUNGSPRODUKTEN
53
2.2.1.16
EXPRESSION
REKOMBINANTER
PROTEINE
IM
PATH-SYSTEM
54
2.2.2
PROTEINBIOCHEMISCHE
VERFAHREN
54
2.2.2.1
PROTEINEXTRAKTION
AUS
GEWEBEN
54
DIREKTLYSAT
IN
1
X
LSB
54
HYPOTONES
ZELLYSAT
55
2.2.2.2
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
55
2.2.23
SDS-PAGE
55
2.2.2.4
WESTEM-BLOT
56
ELEKTROTRANSFER
56
IMMUNDETEKTION
57
2.2.2.5
PRAEPARATIVE
SDS-PAGE
ZUR
REINIGUNG
REKOMBINANTER
PROTEINE
58
2.2.2.6
IN
WFRO-DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
PROTEINEXTRAKTEN
58
2.2.3
IMMUNHISTOCHEMIE
59
2.2.3.1
BOUIN-FIXIERUNG
HUMANER
TESTISGEWEBE
59
2.2.3.2
HERSTELLUNG
VON
PARAFFINSCHNITTEN
59
2.2.3.3
PEROXIDASE-ANTIPEROXIDASE-ABC-FAERBUNG
60
2.2.3.4
HAEMATOXILIN-EOSIN-FAERBUNG
(HE-FAERBUNG)
62
3.
ERGEBNISSE
63
3.1
CHARAKTERISIERUNG
DES
HUMANEN
TSPY-GENPRODUKTES
63
3.1.1
CHARAKTERISIERUNG
DES
ANTI-HTSPY-ANTISERUMS
DURCH
WESTEMANLYSE
63
3.1.2
IN
WTRO-DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
TESTISEXTRAKT
69
3.1.3
IMMUNHISTOCHEMISCHE
ANALYSEN
71
3.1.3.1
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNGEN
IN
NORMALEM
TESTISGEWEBE
71
3.1.3.2
IMMUNHISTOCHEMISCHE
ANALYSE
VON
TESTISTUMOREN
74
CARDNOMA
IN
SITU
UND
AUFLOESUNG
DER
TUBULAEREN
STRUKTUR
74
AUFLOESUNG
DER
TUBULAEREN
STRUKTUREN
UND
BILDUNG
SOLIDER
TUMORANTEILE
75
LEYDIGZELLTUMOR
75
3.1.3.3
IMMUNHISOTCHEMISCHE
ANALYSE
BEIM
SERTOLI-ONLY-SYNAEMM
75
3.1.3.4
IMMUNHISTOCHEMISCHE
ANALYSE
DYSGENETISCHER
GONADEN
VON
FRAUEN
MIT
XYKARYOTYP
TI
3.2
UNTERSUCHUNGEN
DES
TSPY
BEIM
RIND
80
3.2.1
ISOLIERUNG
EINER
BOVINEN
TSPY-CDNA
80
3.2.2
ERGEBNISSE
DER
CHARAKTERISIERUNG
BOVINER
TSPY-TRANSKRIPTE
81
3.2.3
EVOLUTIONAERE
KONSERVIERUNG
ZUM
HUMANEN
TSPY
82
3.3
VERWANDSCHAFT
DES
TSPY
ZU
SET/NAP-PROTEINFAMILIE
82
3.4
UNTERSUCHUNGEN
DES
TSPY
BEI
DER
MAUS
89
3.4.1
SUCHE
NACH
TSPY-VERWANDTEN
SEQUENZEN
IM
GENOM
DER
MAUS
89
3.4.2
ISOLIERUNG
EINER
TSPY-KREUZHYBRIDISIERENDEN,
TESTIKULAEREN
CDNA
DER
MAUS
90
3.4.2.1
NORTHEMANALYSE
90
3.4.2.2
DURCHSUCHEN
EINER
CDNA-BANK
AUS
MURINEM
TESTIS
91
3.4.2.3
VEREINZELUNG
DER
KANDIDATENPHAGENKLONE
93
3.4.2.4
HERSTELLUNG
DER
PHAGEMIDS
AUS
DEN
KANDIDATENPHAGENKLONEN
94
3.4.2.5
VERWANDTSCHAFT
DER
BEIDEN
KANDIDATENKLONE
4.7
UND
4.15
(PUSH)
94
3.4.2.6
SOUTHEMANALYSE
VON
PUSH
95
3.4.27
SEQUENZANALYSE
VON
PUSH
97
3.4.3
GEWEBESPEZIFITAET
UND
ONTOGENETISCHE
EXPRESSION
VON
PUSH-MRNAS
98
3.4.4
IDENTIFIKATION
DER
ISOLIERTEN
CDNA
ALS
VERWANDTE
DER
TYP
A
CYCLINE
101
3.4.5
HOMOLOGIEBEZIEHUNGEN
VON
PUSH-CDNA
UND
-PROTEIN
ZU
TSPY-SEQUENZEN
105
4.
DISKUSSION
110
4.1
DAS
GENPRODUKT
DES
TSPY
110
4.1.1
DAS
ANTI-JA923-ANTISERUM
837/3
ALS
ANTI-TSPY-ANTISERUM
110
WESTEMANALYSEN
110
4.1.2
GEWEBESPEZIFITAET
UND
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
112
4.1.3
TSPY
IN
TESTIKULAEREN
TUMOREN
114
TSPY
ALS
CIS-MARKER
114
TSPY
IN
SEMINOMEN
115
TSPY
IN
LEYDIGZELLTUMOREN
116
TSPY
BEIM
SERTO/;-ON/Y-SYNDROM
117
4.1.4
TSPY
IM
KONTEXT
VON
PSEUDOHERMAPHRODITISMUS
UND
TESTIKULAERER
FEMINISIERUNG
117
PSEUDOHERMAPHRVDITISMUS
MASCULINUS
117
TSPY
BEI
ZWEI
GESCHWISTERN
MIT
TESTIKULAERER
FEMINISIERUNG
119
4.1.5
TSPY
ALS
KANDIDAT
FUER
DEN
Y-CHROMOSOMALEN
GONADOBLASTOMLOCUS,
GBY
120
4.2
EVOLUTIONAERE
KONSERVIERUNG
UND
VERWANDTE
PROTEINE
122
4.2.1
KONSERVIERUNG
ZWISCHEN
HUMANEM
UND
BOVINEM
TSPY
DIE
KONSEQUENZEN
122
4.2.2
FUNKTIONSANALYSE
AUFGRUND
VON
VERWANDSCHAFT
ZUR
SET/NAP-PROTEINFAMILIE
123
FUNKBONELLE
KONSEQUENZEN
DER
SEQUENZHOMOLOGIE
123
FUNKTIONELLE
DATEN
ZU
SET
UND
NAP
124
4.3
SUCHE
NACH
DEM
MURINEN
TSPY
UND
KLONIERUNG
EINES
MURINEN
TESTISSPEZIFISCHEN
CYCLINA
127
4.3.1
HOMOLOGIE
ZWISCHEN
TSPY
UND
DEM
KREUZHYBRIDISIERENDEN
MURINEN
TESTISSPEZIFISCHEN
CYDIN-A
128
4.3.2
EXPRESSION
DES
TESTISSPEZIFISCHEN
CYCLM-A
DER
MAUS
129
4.3.3
AUSBLICK.
DIE
WEITERFUEHRENDE
CHARAKTERISIERUNG
DER
PUSH-SEQUENZ
130
5.
ZUSAMMENFASSUNG
132
6.
LITERATURVERZEICHNIS
133
7.
DANKSAGUNGEN
144
ANHANG
I
-
ABKUERZUNGEN
145
ANHANG
II
-
ENGLISH
SUMMARY
146
ANHANG
III
-
LEBENSLAUF
147
ANHANG
IV
-
EIGENE
VEROEFFENTLICHUNGEN
148 |
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