Reinigung und Rekonstitution pflanzlicher Zuckertransportproteine:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
1
2
ERGEBNISSE
17
2.1
CHARAKTERISIERUNG
UND
REINIGUNG
DES
SACCHAROSETRANSPORTERS
PMSUC2
VON
PLANTAGO
MAJOR
17
2.1.1
EXPRESSIONSSTAERKE
VON
PMSUC2
IN
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
_
17
2.1.1.1
IDENTIFIKATION
VON
PMSUC2
IN
ANGEREICHERTEN
PLASMAMEMBRANEN
17
2.1.1.2
MESSUNG
DER
TRANSPORTAKTIVITAET
IN
ISOLIERTEN
PLASMAMEMBRANEN
18
2.1.2
HERSTELLUNG
UND
BIOTINYLIERUNG
EINES
PMSUC2-FUSIONSPROTEINS
_
20
2.1.2.1
HERSTELLUNG
VON
PMSUC2BIOHIS6
20
2.1.2.2
BESTIMMUNG
DES
ANTEILS
BIOTINYLIERTER
PMSUC2BIOHIS6-
PROTEINE
_
22
2.1.2.3
STEIGERUNG
DER
BIOTINYLIERUNG
24
2.1.3
SOLUBILISIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
PMSUC2BIOHIS6
25
2.1.3.1
SOLUBILISIERUNG
UND
REINIGUNG
UNTER
VERWENDUNG
VON
OG
25
2.1.3.2
SOLUBILISIERUNG
UND
REINIGUNG
UNTER
VERWENDUNG
VON
DDM
27
2.1.4
REKONSTITUTION
VON
PMSUC2BIOHIS6
28
2.1.4.1
REKONSTITUTION
DER
TRANSPORTAKTIVITAET
DURCH
DETERGENZ
VERDUENNUNG
28
2.1.4.2
REKONSTITUTION
DER
TRANSPORTAKTIVITAET
DURCH
ADSORPTION
DES
DETERGENZ
29
2.1.5
STABILITAET VON
PMSUC2BIOHIS6
31
2.1.5.1
EINFLUSS
VON
LIPID,
TEMPERATUR,
PH-WERT,
SALZ
UND
SACCHAROSEKONZENTRATIONEN
31
2.1.5.2
EINFLUSS
VON
DETERGENZIEN
33
2.1.6
ANSAETZE
ZUR
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
PMSUC2
_
35
2.1.6.1
NACHWEIS
PMSUC2-SPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
DURCH
WESTERN
BLOT
35
2.1.6.2
NACHWEIS
PMSUC2-SPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
DURCH
ELISA
_
37
2.2
CHARAKTERISIERUNG
UND
REINIGUNG
DES
MONOSACCHARIDTRANSPORTERS
AISTP1
VON
ARABIDOPSIS
THALIANA
40
2.2.1
HERSTELLUNG
VON
ATSTPI
HIS6
40
2.2.2
LOKALISATION
VON
ATSTPI
HIS6
IN
DER
PLASMAMEMBRAN
TRANSGENER
HEFEZELLEN
41
2.2.3
REINIGUNG
VON
ATSTPI
HIS6
44
2.2.4
REKONSTITUTION
DER
TRANSPORTAKTIVITAET
VON
ATSTP
1
HIS6
47
2.2.4.1
REKONSTITUTION
VON
ATSTPI
HIS6
DURCH
FUSION
47
2.2.4.2
REKONSTITUTION
VON
ATSTPIHIS6
AUS
SOLUBILISIERTEN
PLASMAMEMBRANEN
48
2.2.4.3
REKONSTITUTION
DES
GEREINIGTEN
PROTEINS
49
2.2.5
HERSTELLUNG
UND
CHARKTERISIERUNG
BIOTINYLIERTER
ATSTPI
-
FUSIONSPROTEINE
50
2.3
HERSTELLUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
EINES
DOMINANT
SELEKTIONIERBAREN
EXPRESSIONSPLASMIDS
FUER
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
53
2.3.1
HERSTELLUNG
VON
FREP-20RN
53
2.3.2
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
VON
FREP-20RN
55
2.3.2.1
RESISTENZ
GEGEN
FORMALDEHYD
55
2.3.2.2
EXPRESSION
VON
ATSTPIHIS6
56
3
DISKUSSION
59
4
MATERIAL
UND
METHODEN
68
4.1
MATERIAL
68
4.1.1
ORGANSIMEN
UND
VEKTOREN
68
4.1.1.1
BAKTERIEN
UND
HEFESTAEMME
68
4.1.1.2
VEKTOREN
68
4.1.2
ENZYME,
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
69
4.1.3
GERAETE
69
4.2
METHODEN
70
4.2.1
GENETISCHE
METHODEN
70
4.2.1.1
HERSTELLUNG
VON
FREP-E,
FREP-R
UND
FREP-20RN
70
4.2.1.2
HERSTELLUNG
BIOTINYLIERTER
ATSTPI-FUSIONSPROTEINE
70
4.2.2
TRANSFORMATION
UND
ANZUCHT
VON
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
71
4.2.3
ZUCKERAUFNAHMEMESSUNG
BEI
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
72
4.2.4
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
72
4.2.4.1
SDS-GELELEKTROPHORESE
72
4.2.4.2
PROTEIN-SEQUENZIERUNG
73
4.2.4.3
PRAEPARATION
VON
GESAMTMEMBRANEN
AUS
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
73
4.2.4.4
ISOLATION
VON
PLASMAMEMBRANEN
AUS
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
73
4.2.4.5 BESTIMMUNG
DER
AKTIVITAET
DER
PLASMAMEMBRAN-ATPASE
_
74
4.2.4.6
PROTEINBESTIMMUNG
74
4.2.4.7
SOLUBILISIERUNG
VON
GESAMT
ODER
PLASMAMEMBRANEN
_
74
4.2.4.8
REINIGUNG
HISTIDINMARKIERTER
TRANSPORTPROTEINE
74
4.2.4.9
REINIGUNG
VON
BIOTINYLIERTEN
TRANSPORTPROTEINEN
74
4.2.5
REKONSTITUTION
DER
TRANSPORTAKTIVITAET
75
4.2.5.1
REINIGUNG
VON
E.
CO/R-LIPIDEN
75
4.2.5.2
ISOLATION
VON
CYTOCHROM
C
OXIDASE
AUS
RINDERHERZEN
_
76
4.2.5.3
INKORPORATION
VON
CYTOCHROM
C
OXIDASE
IN
LIPID
76
4.2.5.4
FUSION
VON
PLASMAMEMBRANEN
MIT
PROTEOLIPOSOMEN
76
4.2.5.5
ENTFERNUNG
VON
OG
DURCH
VERDUENNUNG
77
4.2.5.6
ADSORPTION
VON
DDM
AN
BIO-BEADS
77
4.2.5.7
AKTIVITAETSBESTIMMUNG
IN
REKONSTITUIERTEN
VESIKELN
78
4.2.6
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
79
4.2.6.1
WESTERN-BLOT
79
4.2.6.2
ELISA
79
5
ZUSAMMENFASSUNG
80
6
LITERATURVERZEICHNIS
81 |
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