Stadienabhängiger Nachweis der Tyrosinase im Blut von Melanompatienten der Universitätshautklinik Ulm unter Verwendung einer geschachtelten Polymerase-Kettenreaktion: Vergleich der RNA-Präparation aus Vollblut und mit Erythrozytenlysepuffer behandeltem Blut
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
0. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 5
1. EINLEITUNG 6
1.1 EPIDEMIOLOGIE 6
1.2 PROGNOSE DES MALIGNEN MELANOMS 6
1.3 BEDEUTUNG ZIRKULIERENDER MELANOMZELLEN 8
1.4 POLYMERASE-KETTENREAKTION 8
1.5 TYROSINASE 9
1.6 NACHWEIS DER TYROSINASE MITHILFE DER PCR 9
1.7 PROBLEMATIK DES TYROSINASE-NACHWEISES MIT DER PCR 10
2. MATERIAL UND METHODEN 12
2.1 PATIENTEN 12
2.2 REFERENZ-ZELLINIE 12
2.3 MATERIALIEN, GERAETE, CHEMIKALIEN, ENZYME UND PUFFER 13
2.3.1 MATERIALIEN UND GERAETE 13
2.3.2 CHEMIKALIEN
13
2.3.3 ELEKTROPHORESE-LAENGENSTANDARD 14
2.3.4 ENZYME FUER CDNA-SYNTHESE UND PCR 14
2.3.5 GELE
14
2.3.6 PUFFER 15
2.4 BLUTENTNAHMEN UND VERARBEITUNG BIS ZUR ZUGABE VON GIT-PUFFER 16
2.4.1 DURCHFUEHRUNG DER ERYTHROZYTENLYSE 16
2.5 RNA-PRAEPARATION 17
2.6 PHOTOMETRISCHE REINHEITS- UND AUSBEUTEBESTIMMUNG DER RNA 18
2.7 SYNTHESE VON CDNA 18
2.8 POLYMERASE-KETTENREAKTION 19
2.8.1 TYROSINASE PCR - GESCHACHTELTE PCR (NESTED PCR) 20
2.8.2 AEUSSERE PCR 21
2.8.3 INNERE PCR 22
2.9 KONTROLLEXPERIMENTE 24
2.9.1 SENSITIVITAET DER METHODE 24
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.9.2 KONTROLLE DER PRAEPARATE MIT DER GAPDH-PCR 25
2.10 ELEKTROPHORESE 27
2.11 STATISTIK 27
3. ERGEBNISSE 28
3.1 PATIENTENCHARAKTERISTIK 28
3.2 RNA-PRAEPARATION 31
3.2.1 AUSBEUTE DER RNA-PRAEPARATION 31
3.2.2 POSITIVE TYROSINASE-PCR IN ABHAENGIGKEIT VON DER RNA-AUSBEUTE 32
3.2.3 REINHEIT DER PRAEPARIERTEN RNA 36
3.2.4 POSITIVE TYROSINASE-PCR IN ABHAENGIGKEIT VON DER REINHEIT
DER RNA 37
3.3 POSITIVE TYROSINASE-PCR - VOLLBLUT- UND LYSEMETHODE IM DIREKTEN
VERGLEICH 41
3.4 POSITIVE TYROSINASE-PCR IN ABHAENGIGKEIT VON DER
PRIMAERTUMORLOKALISATION 45
3.5 REZIDIVFREIES GESAMTUEBERLEBEN IN ABHAENGIGKEIT VON DER
TYROSINASE-PCR 47
3.51 KLINISCHES STADIUM III 47
3.5.2 KLINISCHES STADIUM IV 48
4. DISKUSSION 50
4.1 PATIENTENCHARAKTERISTIK 50
4.2 RNA-PRAEPARATION 51
4.2.1 RNA-AUSBEUTE 51
4.2.2 REINHEIT DER RNA 52
4.3 STADIENABHAENGIGKEIT DER POSITIVEN TYROSINASE-PCR 53
4.4 PROGNOSE IN ABHAENGIGKEIT DER TYROSINASE-PCR 55
5. ZUSAMMENFASSUNG 57
6. LITERATURVERZEICHNIS 59
7. DANKSAGUNG 64
8. LEBENSLAUF 65 |
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