Counterflow Centrifugal Elutriation (CCE) von Knochenmark, Stammzellseparations- und Leukaphereseprodukten zur T-Zell-Depletion sowie zur Anreicherung und Charakterisierung CD34-positiver Zellen:
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| Veröffentlicht: |
1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
EINFUEHRUNG
.
1
1.2.
HAEMATOPOESE
.
1
1.2.1
STAMM
UND
VORLAEUFERZELLEN
.
1
1.2.2.
HAEMATOPOETISCHE
WACHSTUMSFAKTOREN
.
2
1.2.3.
DAS
CD34-ANTIGEN
.
3
1.2.4.
IN
VITRO
ASSAYS
ZUR
IDENTIFIZIERUNG
VON
VORLAEUFERZELLEN
.
4
1.2.4.1.
KOLONIE-ASSAYS
.
4
1.2.4.2.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
4
1.3.
TRANSPLANTATIONEN
.
6
1.3.1.
KNOCHENMARKTRANSPLANTATION
.
6
1.3.2.
TRANSPLANTATION
PERIPHERER
BLUTSTAMMZELLEN
.
6
1.3.2.1.
MOBILISATION
PERIPHERER
BLUTSTAMMZELLEN
.
7
1.3.2.2.
AUTOLOGE
TRANSPLANTATION
PERIPHERER
BLUTSTAMMZELLEN
.
7
1.3.2.3.
ALLOGENE
TRANSPLANTATION
PERIPHERER
BLUTSTAMMZELLEN
.
8
1.3.3.
INDIKATIONEN
ZUR
TRANSPLANTATION
.
8
1.4.
GRAFT
VERSUS
HOST
DISEASE
.
9
1.4.1.
DEFINITION
.
9
1.4.2.
AKUTE
GRAFT
VERSUS
HOST
DISEASE
.
9
1.4.3.
CHRONISCHE
GRAFT
VERSUS
HOST
DISEASE
.
9
1.4.4.
PATHOPHYSIOLOGIE
.
10
1.4.5.
PROPHYLAXE
DER
GRAFT
VERSUS
HOST
DISEASE
.
10
1.5.
T-ZELL-DEPLETION
.
11
1.5.1.
METHODEN
DER
T-ZELL-DEPLETION
.
11
1.5.2.
RISIKEN
DER
T-ZELL-DEPLETION
.
12
1.5.2.1.
ABSTOSSUNG
.
12
1.5.2.2.
REZIDIV
UND
GRAFT
VERSUS
LEUKEMIA
REACTION
.
12
1.6.
COUNTERFLOW
CENTRIFUGAL
ELUTRIATION
.
12
1.6.1.
PRINZIP
DER
COUNTERFLOW
CENTRIFUGAL
ELUTRIATION
.
12
1.7.
PROBLEMSTELLUNG
UND
ZIELSETZUNG
.
16
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
17
2.1.
UNTERSUCHUNGSMATERIALIEN
.
17
2.1.1.
STAMMZELLSEPARATIONS
UND
LEUKAPHERESEPRODUKTE
.
17
2.1.2
KNOCHENMARK
.
18
2.2.
SUBSTANZEN
.18
2.3.
ISOLATION
MONONUKLEAERER
ZELLEN
MIT
FICOLL-PAQUE
VOR
DER
ELUTRIATION
.
20
2.4.
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
UND
-GROSSE
MIT
DEM
CASY1
.
21
2.5.
ELUTRIATIONSMEDIUM
.
21
2.6.
COUNTERFLOW
CENTRIFUGAL
ELUTRIATION
(CCE)
.
23
2.6.1.
VERSUCHSANORDNUNG
.
23
2.6.2.
STERILISATION
DES
ELUTRIATIONSSYSTEMS
.
24
2.6.3.
EICHUNG
DER
PUMPE
.
24
2.6.4.
DURCHFUEHRUNG
DER
ELUTRIATION
.
25
2.6.5.
ERRECHNUNG
DER
AUSBEUTE,
STANDARDAUSBEUTE
UND
ANREICHERUNG
.
26
2.7.
WEITERE
BEARBEITUNG
DER
FRAKTIONEN
.
27
2.7.1
WASCHENDER
FRAKTIONEN,
VITALITAETSBESTIMMUNG
.
27
2.7.2
KRYOKONSERVIERUNG
.
28
2.8.
KOLONIEANSAETZE
.
28
2.8.1.
HERSTELLUNG
DER
ANSAETZE
.
28
2.8.2.
AUSWERTUNG
DER
KOLONIEANSAETZE
.
28
2.9.
MIKROSKOPISCHE
ANALYSE
DER
ZELLMORPHOLOGIE
.
29
2.9.1.
PRAEPARATEHERSTELLUNG
.
29
2.9.2.
AUSWERTUNG
DER
PRAEPARATE
.
29
2.10.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
30
2.10.1.
EINGESETZTE
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
.
30
2.10.2.
AUFTAUEN
KRYOKONSERVIERTER
ZELLEN
.
31
2.10.3.
BINDUNG
DER
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
AN
DIE
ZELLEN
.
31
2.10.4.
ANALYSE
.
31
2.10.5.
ANGABE
DER
ERGEBNISSE
DER
DURCHFLUSSZYTOETRIE
.
32
2.11.
STATISTIK
.
33
3.
ERGEBNISSE
.
35
3.1.
ELUTRIATIONSCHARAKTERISTIK
.
35
3.1.1.
AUSBEUTE
.
35
3.1.2.
ZELLGROESSE
.
35
3.1.3.
VITALITAET DER
ZELLEN
.
38
3.
2.
METHYLZELLULOSE-ZELLKULTUREN
.
38
3.2.1
KOLONIEFREQUENZ
.
39
3.2.2.
ABSOLUTE
ANZAHL
DER
KOLONIEBILDENDEN
ZELLEN
.
39
3.2.3.
AUSBEUTE,
TEILAUSBEUTE
UND
STANDARDAUSBEUTE
DER
KOLONIE-BILDENDEN
ZELLEN
.
40
3.2.4.
ANREICHERUNG
KOLONIEBILDENDER
ZELLEN
.
42
3.2.5.
PROZENTANTEILE
DER
BFU-E
UND
CFU.GM
IN
DER
LADUNG
UND
DEN
EINZELNEN
FRAKTIONEN
.
42
3.2.6.
BFU-E
/
CFU-GM-VERHAELTNIS
.
43
3.3.
ZELLMORPHOLOGIE
.
44
3.3.1.
AUSGANGSMATERIAL
(VOR
FICOLL-PAQUE
SEPARATION)
.
44
3.3.2.
PROZENTANTEILE
DER
VERSCHIEDENEN
ZELLTYPEN
IN
DER
LADUNG
UND
DEN
EINZELNEN
FRAKTIONEN
.
44
3.3.3.
ABSOLUTE
ZAHL
DER
LYMPHOZYTEN,
DER
NICHT
LYMPHOZYTAEREN
MONO-NUKLEAEREN
ZELLEN
UND
DER
NICHT-MONONUKLEAEREN
ZELLEN
.
47
3.3.4.
AUSBEUTE,
TEILAUSBEUTE
UND
STANDARDAUSBEUTE
DER
ZELLTYPEN
.
50
3.3.5.
ANREICHERUNG
.
53
3.4.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
54
3.4.1.
LYMPHOZYTAERE
ANTIGENE
.
54
3.4.1.2.
AUSBEUTE
UND
TEILAUSBEUTE
IN
DEN
FRAKTIONEN.
.59
3.4.1.3.
STANDARDAUSBEUTE
.
60
3.4.1.4.
CD3/CFU-VERHAELTNIS
.
61
3.4.2.
CD34-POSITIVE
ZELLEN
.
62
3.4.2.1.
PROZENTUALE
HAEUFIGKEIT
UND
ANREICHERUNG
.
62
3.4.2.2.
AUSBEUTE
DER
CD34-POS.
ZELLEN
UND
DIE
TEILAUSBEUTEN
IN
DEN
FRAKTIONEN
.
63
3.4.2.3.
STANDARDAUSBEUTE
DER
CD34-POS.
ZELLEN
.
64
4.
DISKUSSION
.
69
4.1.
VERWENDUNG
DER
ELUTRIATION
ZUR
T-ZELL
DEPLETION
.
71
4.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
PERIPHEREN
BLUTVORLAEUFERZELLEN
.
74
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
81
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
83
GLOSSAR
.
99
DANKSAGUNG.
101
ANHANG
.
102
ERKLAERUNG
.
LEBENSLAUF
. |
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