Untersuchungen zur TNF-Resistenz in MCF-7-Mammakarzinom-Zellen:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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I
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG-*-
1.1 PROBLEMSTELLUNG.
1.2
.
1.2.1 ENTDECKUNGSGESCHICHTE
.
1.2.2 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE DATEN
.
1.2.3 GENETISCHE STRUKTUR
.
1.2.4 REGULATION DER TNF BIOSYNTHESE IN VITRO UND IN VIVO
.
1.3 .
L .4
SIGNALUEBERTRAGUNG VON
TNF
.
1.5
RESISTENZMECHANISMEN GEGENUEBER
TNF.
1.6
BIOLOGISCHE WIRKUNGEN VON
TNF.
2. MATERIAL-*-
3. METHODEN--
3.1
ZELLKULTUR.
3.2 AKTIVITAETSBESTIMMUNG VON TNF IM L929-BIOASSAY.
3.3 FAERBUNG VON ZELLEN MIT KRISTALLVIOLETT.
3.4 MESSUNG DER ZELLPROLIFERATION DURCH [3H]-THYMIDINEINBAU.
3.5
MTT-ASSAY ZUR BESTIMMUNG DER CYTOTOXIZITAET VON
TNF.
3.6 MIKROSPEKTROFLUORIMETRIE ZUR MESSUNG DES CA2+ -SIGNALS.
3.7 BESTIMMUNG DER INTRAZELLULAEREN CAMP-KONZENTRATION.
3.8
RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON
TNF
MIT
[125J]
.
3.8.1 LACTOPEROXIDASE-GLUCOSEOXIDASE-METHODE
.
3.8.2 10D0-GEN
-
METHODE
.
3.9
TNF-REZEPTOR
ASSAY MIT
[,25J]
- MARKIERTEM
TNF
.
3.10
AFFINTTY CROSSLINKING VON
[,25J]-TNF
AN
MCF-7
ZELLEN.
3.11 DENATURIERENDE SDS-POLYACRYLAMID- GELELEKTROPHORESE FUER PROTEINE
3.12 SILBERFAERBUNG DER MARKERPROTEINE.
3.13 QUANTIFIZIERUNG LOESLICHER TNF-REZEPTOREN.
3.14 QUANTIFIZIERUNG VON ENDOGENEM
TNF.
3.15 QUANTITATIVE BESTIMMUNG VON MANGANSUPEROXID DISMUTASE.
3.16 MESSUNG DER ENZYMAKTIVITAET VON PROTEINKINASE C.
3.17 ISOLIERUNG UND REINIGUNG VON NUCLEINSAEUREN.
3.17.1 EXTRAKTION VON DNA
.
3.17.2 EXTRAKTION VON RNA
.
3.17.3 QUANTIFIZIERUNG VON DNA UND RNA
.
3.18 GELELEKTROPHORESE FUER NUCLEINSAEUREN.
3.18.1 NATIVE AGAROSE-GELELEKTROPHORESESSR DNA ODER RNA
.
3.18.2 ELUTION VON DNA AUS AGAROSEGELEN
.
.1
.2
.3
.3
.4
.5
.7
.9
13
.17
.18
.23
.28
.28
.29
.29
.30
.30
.31
.32
.33
.33
.34
.37
.37
.38
.40
.41
.43
.43
.44
.45
.
45
.
46
.
47
.48
.
48
.
48
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/949752967
N
3.18.3 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE FUER RNA NACH DENATURIERUNG MIT GLYOXAL
UND DMSO
.49
3.19 POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR).50
3.19.1 CDNA-SYNTHESE
.51
3.19.2 ANALYSE DER EXPRESSION DES MDRL-GENS
.51
3.19.3 ANALYSE DER EXPRESSION DES TNF-GENS
.52
3.19.4 KONTROLLE DURCH ANALYSE DER EXPRESSION VON
GLYCERINALDEHYD-3-PHOSPHAT- DEHYDROGENASE
(GAPDH)
.53
3.19.5 NESTED PCR ZUM NACHWEIS DER TRANSKRIPTION DER BEIDEN
TNF-REZEPTOREN P55 UND P75
.54
3.20 NORTHERN-BLOT-ANALYSE. 56
3.20.1 TRANSFER DURCH DIFFUSION
.56
3.20.2 VAKUUM-TRANSFER
.57
3.21 FAERBUNG DER IMMOBILISIERTEN RNA MIT METHYLENBLAU.57
3.22 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA DURCH RANDOM PRIMING LABELING.58
3.23 HYBRIDISIERUNG MARKIERTER DNA-SONDEN GEGEN RNA.58
4. ERGEBNISSE_ 60
4.1 DIE ETABLIERUNG DES TESTSYSTEMS.60
4.2 TNF INDUZIERT APOPTOSE IN MCF-7S ZELLEN.61
4.3 PRODUKTION VON ENDOGENEM TNF.62
4.3.1 NACHWEIS IM TNF-ELIBA
.62
4.3.2 NACHWEIS DER TNF MRNA DURCH PCR
.63
4.3.3 NACHWEIS UND QUANTIFIZIERUNG DER TNF MRNA IM NORTHERN BLOT
.64
4.4 EXPRESSION VON MANGAN-SUPEROXID-DISMUTASE.65
4.5 RESISTENZ GEGENUEBER TNF UND MULTIDRUG RESISTANCE'.66
4.5.1 UNTERSUCHUNGEN ZUR KREUZRESISTENZ
.66
4.5.2 EXPRESSION DES MDRL-GENS
.69
4.6 DIE SIGNALUEBERTRAGUNG DURCH CAMP.71
4.6.1 EINFLUSS VON CHOLERA-TOXIN UND PERTUSSIS-TOXIN AUF DIE
TNF-VERMITTELTE CYTOTOXIZITAET
.71
4.6.2 STIMULATION DER ADENYLATCYCLASE DURCH FORSKOLIN
.73
4.6.3 SPEZIFISCHE INHIBIERUNG VON PKA DURCH H-89
.74
4.7 DIE ROLLE VON CALCIUM IN DER SIGNALUEBERTRAGUNG VON TNF.75
4.7.1 UNTERSUCHUNGEN ZUR MODULATION DER INTRAZELLULAEREN CA
2* -KONZENTRATION DURCH TNF.76
4.7.2 EINFLUSS VON MODULATOREN DES INTRAZELLULAEREN CA
2* -SPIEGELS AUF DIE CYTOTOXIZITAET VON TNF.78
4.8 TNF-REZEPTOREN AUF SENSITIVEN UND RESISTENTEN MCF-7 ZELLEN.79
4.8.1 ERMITTLUNG DER BIOLOGISCHEN AKTIVITAET VON [
125J]-TNF.79
4.8.2 BINDUNGSSTUDIEN MIT [
I25J]-TNF.80
4.8.3 DARSTELLUNG DES P55 TNF-REZEPTORS DURCH CROSSLINKING
.82
4.8.4 NACHWEIS DER EXPRESSION VON TNF-REZEPTOREN DURCH PCR
.83
4.8.5 NORTHEM-BLOT ANALYSE ZUR QUANTIFIZIERUNG VON
TNF-REZEPTOREN-SPEZIFISCHER MRNA
.84
4.8.6 DER P55 TNF-REZEPTOR VERMITTELT CYTOTOXIZITAET IN MCF-7S ZELLEN
.85
4.9 LOESLICHE TNF-REZEPTOREN.86
4.9.1 FREISETZUNG LOESLICHER REZEPTOREN IN MCF-7 ZELLEN
.86
4.9.2 EINFLUSS VON PROTEASE-INHIBITOREN AUF DIE BILDUNG LOESLICHER
REZEPTOREN
.87
M
4.9.3 EINFLUSS VON CYCLOHEXIMID AUF DIE BILDUNG LOESLICHER REZEPTOREN
.89
4.10 EINFLUB VON CYCLOHEXIMID AUF DIE TNF-VERMITTELTE CYTOTOXIZITAET.90
4.11 PROTEINKINASEN IN DER SIGNALKASKADE VON TNF.91
4.11.1 EINFLUSS VON PROTEINKINASE-INHIBITOREN AUF DIE CYTOTOXIZITAET VON
TNF
.91
4.11.2 AKTIVIERUNG VON PROTEINKINASE C DURCH PMA
.94
4.11.3 PROTEINKINASE C-AKTIVITAET NACH STIMULATION MIT TNF.
.95
4.11.4 UNTERDRUECKUNG DER PROTEINKINASE C-AKTIVITAET DURCH PMA
.97
4.11.5 CYTOTOXIZITAET VON TNF IN PKC-DEFIZIENTEN MCF-7 ZELLEN
.98
4.11.6 VERGLEICH DER CYTOTOXIZITAET VON TNF IN ZWEI WEITEREN MIT
PMA-BEHANDELTEN ZELLINIEN
.99
4.11.7 LANGZEITSTUDIEN MIT PMA-BEHANDELTEN MCF-7 ZELLEN
.100
4.11.8 TNF-REZEPTOREN IN PMA-BEHANDELTEN MCF-7 ZELLEN
.102
4.11.9 LOESLICHE TNF-REZEPTOREN IN PMA-BEHANDELTEN MCF-7 ZELLEN
.104
5.
DISKUSSION_106
6. ZUSAMMENFASSUNG.YY.127
7. LITERATUR_129
DANKSAGUNG_ 146
LEBENSLAUF.147 |
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