Molekularbiologische und biochemische Charakterisierung zweier Komplexe der Atmungskette von Natronobacterium pharaonis:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
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| Beschreibung: | Dortmund, Univ., Diss., 1996 |
| Beschreibung: | 150 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
.
.
.
1
2.
MATERIALIEN
.
10
2.1
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
.
10
2.2
OLIGONUKLEOTIDE
.
11
2.3
PLASMIDE
.
11
2.4
BAKTERIENSTAEMME
.
11
2.5
PUFFER,
LOESUNGEN
UND
MEDIEN
.
11
2.6
INSTRUMENTATION
.
12
3.
METHODEN
.
14
3.1
MOLEKULARGENETISCHE
VERFAHREN
.
14
3.1.2
ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER
DNA
.
14
3.1.3
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
.
14
3.1.4
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
15
3.1.5
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
15
3.1.6
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
.
16
3.1.7
REVERSE
TRANSKRIPTION
UND
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(RT-PCR)
.
17
3.1.8
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV-UND
NICHT-RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA-SONDEN
.
17
3.1.9
YYSOUTHENT-TRANSFER
.
18
3.1.10
FORMALDEHYD-GELE
UND
,NORTHERN
"
-TRANSFER
.
18
3.1.11
HYBRIDISIERUNG
FILTERGEBUNDENER
DNA
1
RNA
UND
DETEKTION
.
19
3.1.12
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
MIT
PLASMID-DNA
.
20
3.1.13
KOLONIE-HYBRIDISIERUNG
.
20
3.1.14
DNA-SEQUENZIERUNG
.
21
3.1.15
SEQUENZANALYSEN
.
21
3.1.16
PHYLOGENETISCHE
ANALYSEN
.
21
3.2
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.
22
3.2.1
ZELLANZUCHT
.
22
3.2.2
PRAEPARATION
DER
MEMBRANPROTEINE
.
22
3.2.3
ENZYMATISCHE
BESTIMMUNGEN
.
24
3.2.4
AMINOTERMINALE
SEQUENZBESTIMMUNG
VON
PROTEINEN
.
24
3.2.5
INTERNE
SEQUENZINFORMATION
DURCH
ENZYMATISCHE
GELSPALTUNG
.
25
3.2.6
ANALYSE
DER
HAEMZUSAMMENSETZUNG
.
26
3.2.7
REDOXREAKTION
VON
CYTOCHROM
BA
3
MIT
HALOCYANIN
.
26
3.2.8
ANALYTISCHE
METHODEN
.
27
4.
ERGEBNISSE
.
28
4.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
CYTOCHROM
BA
3
.
28
4.1.1
AMINOTERMINALE
SEQUENZBESTIMMUNG
.
28
4.1.2
INTERNE
SEQUENZINFORMATION
DES
40
KDA
PROTEINS
.
30
4.1.3
AUSWERTUNG
DER
SEQUENZDATEN
UND
KLONIERUNGSSTRATEGIE
.
32
4.1.4
SOUTHERN-ANALYSE
MIT
EINER
PCR-GENERIERTEN
CYTOCHROM
BA
3
-SONDE
.
33
4.1.5
KLONIERUNG,
KARTIERUNG
UND
SUBKLONIERUNG
DES
2,7
KB
PSFL-FRAGMENTES
.
35
4.1.6
SEQUENZIERUNG
DES
2,7
KB
PSFL-FRAGMENTS
SOWIE
IDENTIFIZIERUNG
UND
KLONIERUNG
EINES
GENOMISCHEN
3'-FOLGEFRAGMENTS
.
35
4.1.7
DNA-SEQUENZANALYSE
DES
CYTOCHROM
BA
3
GEN-LOCUS
.
37
4.1.8
NORTHERN
UND
RT-PCR
ANALYSE
DES
BA
3
GEN-LOCUS
.
39
4.1.9
UNTERSUCHUNG
DER
ABGELEITETEN
PROTEINSEQUENZEN
.
42
4.1.10
MODIFIZIERTE
REINIGUNG
DES
CYTOCHROM
BA
3
KOMPLEXES
UND
IDENTIFIZIERUNG
SEINER
UNTEREINHEITEN
.
46
4.2
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
CYTOCHROM
BA
3
.
49
4.2.1
FAERBUNGSVERHALTEN
DER
UNTEREINHEIT
II
.
49
4.2.2
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
DES
KOMPLEXES
DURCH
NATIVE
GELFILTRATION
.
51
4.2.3
HAEMANALYSE
VON
CYTOCHROM
BA
3
,
CYTOCHROM
BC
UND
NATRONOBAKTERIELLER
MEMBRAN
53
4.2.4
SPEKTROSKOPISCHE
ANALYSE
DES
CYTOCHROM
BA
3
.
55
4.2.5
KOMPLEXBILDUNG
VON
CYTOCHROM
BA
3
UND
HALOCYANIN
.
60
4.2.6
ENZYMATISCHE
AKTIVITAET
DES
CYTOCHROM
BA
3
UND
REDOXREAKTION
MIT
HALOCYANIN
.
61
4.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
SUCCINAT-DEHYDROGENASE
.
65
4.3.1
AUSGANGSPUNKT
DER
MOLEKULARGENETISCHEN
ARBEITEN
.
65
4.3.2
GEWINNUNG
EINER
PCR-SONDE
UND
SOUTHERN-ANALYSE
.
67
4.3.3
KLONIERUNG
UND
SUBKLONIERUNG
DES
5,8
KB
SACL-FRAGMENTS
.
71
4.3.4
SEQUENZIERUNG
DES
5,8
KB
SACL-FRAGMENTS
UND
KLONIERUNG
EINES
3
'-UEBERLAPPENDEN
5,8
KB
PSFL-FRAGMENTS
.
72
4.3.5
DNA-SEQUENZANALYSE
DER
UEBERLAPPENDEN
SAD
UND
PSTL-FRAGMENTE
.
73
4.3.6
NORTHERN
UND
RT-PCR
ANALYSE
DES
SDH
GEN-LOCUS
.
76
4.3.7
UNTERSUCHUNG
DER
ABGELEITETEN
PROTEINSEQUENZEN
.
79
4.3.8
GENOMISCHE
ORGANISATION
DER
REDOXPROTEINE
VON
N.
PHARAONIS
.
84
4.4
BIOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
SUCCINAT-DEHYDROGENASE
.
86
4.4.1
VERGLEICH
DER
PARTIELL GEREINIGTEN
KOMPLEXE
UND
ZUORDNUNG
DER
UNTEREINHEITEN
.
86
4.4.2
SPEKTROSKOPISCHE
EIGENSCHAFTEN
DER
SUCCINAT-DEHYDROGENASE
.
89
5.
DISKUSSION
.
.
91
5.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
TERMINALEN
OXIDASE
CYTOCHROM
BA
3
.
91
5.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
SUCCINAT-DEHYDROGENASE
.
114
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
130
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
.
.
.
_
.
_
.
132
8.
ANHANG
.
.
139 |
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