Durchflusszytometrische Charakterisierung von B-Zellvorläuferpopulationen in der Maus:
Gespeichert in:
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|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
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INHALTSVERZEICHNIS
A
EINLEITUNG
.
1
A.1
GENERIERUNG
DER
DIVERSITAET
VON
ANTIGENREZEPTOREN
.
1
A.2
ABFOLGE
DER
REARRANGEMENTS
VON
IMMUNGLOBULIN-GENEN
WAEHREND
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
.
8
A.3 ANALYSE
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
IN
DER
MAUS
.
11
A.4
DER
"SECOND
PATHWAY
"
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
.
17
A.5
ZIELE
DER
ARBEIT
.
18
B
MATERIAL
UND
METHODEN
.
2
0
B.1
CHEMIKALIEN
.
20
B.2
MAEUSE
.
20
B.3
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.
20
B.3.1
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
.
20
B.3.2
KONJUGATION
VON
BIOTIN
UND
FLUORESCEIN-ISOTHIOCYANAT
AN
ANTIKOERPER
.
21
B.3.3
PE
UND
APC-MARKIERUNG
VON
ANTIKOERPERN
.
22
B.3.4
REINIGUNG
DER
FLUOROCHROM-MARKIERTEN
ANTIKOERPER
UEBER
HYDROXYAPATIT-SAEULEN
.
22
B.3.5
PRAEPARATION
VON
LYMPHOZYTEN
FUER
DIE
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
23
B.3.6
OBERFLAECHENFAERBUNG
.
23
B.3.
7
MAGNETISCHE
ZELLSORTIERUNG.
24
B.3.
8
ZELLSORTIERUNG/IMMUNFLUORESZENZ
.
25
B.3.9
INTRAZELLULAERE
FAERBUNGEN
.
25
B.3.
10
ZELLZYKLUSANALYSEN
.
26
B.3.1
1
INJEKTION
VON
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
ZUR
IN
VIVO
SUPPRESSION
.
26
B.3.12
HERSTELLUNG
VON
X5-SPEZIFISCHEN
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN.
.27
B.3.
13
ELISA
.
28
B.3.
14
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
PROTEINEN
UND
IMMUNPRAEZIPITATION
.
29
INHALTSVERZEICHNIS
B.3.15
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
30
B.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN.
30
B.4.1
BAKTERIENSTAEMME
UND
PLASMIDE
.
30
B.4.2
POLYMERASEKETTENREAKTION
.
30
B.4.3
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE.
31
B.4.4
KLONIERUNG
DER
AMPLIFIZIERTEN
V
K
J
K
FRAGMENTE
.
32
B.4.5
SEQUENZIERUNG
DER
V
K
J
K
REARRANGEMENTS
.
33
B.4.6
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
GEWEBEN
.
33
B.4.7
SOUTHERN
BLOT
ANALYSEN
.
34
C
ERGEBNISSE
.
36
C.1
CHARAKTERISIERUNG
VON
B-ZELLVORLAEUFERPOPULATIONEN
IM
KNOCHENMARK
.
36
C.1
.1
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
IN
WILDTYP
UND
MUTANTEN
MAEUSEN
.
36
C.
1.2
ISOLIERUNG
VON
B-ZELLVORLAEUFERPOPULATIONEN.
39
C.1
.3
ZELLEN
DER
FRAKTIONEN
A-F
UNTERSCHEIDEN
SICH
IN
DER
ZELLGROESSE
UND
IM
ZELLZYKLUSSTATUS
.
40
C.1
.4
EXPRESSION
VON
TDT
WAEHREND
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
.
44
C.1
.5
EXPRESSION
VON
P-KETTEN
WAEHREND
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
.
46
C.1
.6
EXPRESSION
VON
C-KIT
UND
IL-7
REZEPTOR
WAEHREND
DER
B-ZELL
ENTWICKLUNG
.
48
C.2
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
"
SECOND
PATHWAY"
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
.
50
C.2.1
V
K
J
K
REARRANGEMENTS
IN
CD43+
-VORLAEUFERZELLEN
.
50
C.2.1
.1
V
K
J
K
REARRANGEMENTS
AUS
CD43+,
TDT-AUSPRAEGENDEN
B-ZELLVORLAEUFERN
ENTHALTEN
WENIG
N-SEQUENZEN
.
51
C.2.
1.2
KONSTANTE
LAENGE
DER
CDR3-REGION
IN
V
K
J
K
REARRANGEMENTS
AUS
CD43+
B-ZELLVORLAEUFERN
.
56
C.2.2
B-ZELLENTWICKLUNG
IN
V
K
4J
K
4
TRANSGENEN,
X.5T
MAEUSEN
.
58
INHALTSVERZEICHNIS
C.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
AUSPRAEGUNG
DES
PBCR
WAEHREND
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
IN
DER
MAUS
.
64
C.3.1
HERSTELLUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
MONOKLONALEN
ANTI
X5
ANTIKOERPERN
.
64
C.3.2
DER
PBCR
IST
AUF
DER
ZELLOBERFLAECHE
VON
FRISCH
ISOLIERTEN
B-ZELLVORLAEUFERN
DURCHFLUSSZYTOMETRISCH
NICHT
NACHWEISBAR
.
67
C.3.
3
INDIREKTER
NACHWEIS
DER
PBCR-EXPRESSION
AUF
DER
ZELLOBERFLAECHE
VON
B-ZELLVORLAEUFERN
IM
KNOCHENMARK
.
69
D
DISKUSSION
.
75
D.1
DIE
AUSPRAEGUNG
DES
PBCR
IST
NOTWENDIG
FUER
DIE
DIFFERENZIERUNG
VON
CD43+
VORIAEUFERZELLEN
IN
.
75
D.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
CD43+
B-ZELLVORLAEUFER
.
77
D.3
V
K
J
K
REARRANGEMENTS
AUS
CD43+,
TDT+
B-ZELLVORLAEUFEM
ENTHALTEN
SELTEN
N-SEQUENZEN
UND
BESITZEN
EINE
KONSTANTE
LAENGE
DER
CDR3
REGION
.
80
D.4
K-KETTEN
KOENNEN
DIE
FUNKTION
DER
"SURROGATEN
LEICHTEN
KETTE"
FUER
DIE
B-ZELLENTWICKLUNG
UEBERNEHMEN
.
86
D.5
EXPRESSION
DES
PBCR
WAEHREND
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
IN
DER
MAUS
.
90
E.
ZUSAMMENFASSUNG
.
96
F.
LITERATURVERZEICHNIS
.
97
ANMERKUNGEN
.
117
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
118
LEBENSLAUF
.119 |
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