Immunfluoreszenzfibel: Grundlagen und neue Anwendungen in der klinischen Immunologie ; mit 30 Tabellen
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Berlin [u.a.]
Blackwell-Wiss.-Verl.
1997
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| Ausgabe: | 2., neubearb. und erw. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Blackwell Wissenschaft
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | XII, 228 S. zahlr. Ill., graph. Darst. |
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Vorwort V
Abkürzungsverzeichnis XI
1 Einführung in Grundlagen und Technik der Immunfluoreszenz .... 1
1.1 Fluoreszenz, Primär und Sekundärfluoreszenz 1
1.2 Prinzip der Immunfluoreszenz 1
1.3 Nomenklatur der Fluoreszenzerscheinungen bei der Immunfluoreszenz 3
1.4 Kurzdarstellung der wichtigsten Arbeitsgänge der direkten Immun¬
fluoreszenz 4
2 Herstellung von Antikörpern und Markierung mit Fluorochromen . 5
2.1 Struktur und Funktion der Antikörper (Immunglobuline, Ig) 5
2.2 Herstellung der Antiseren 6
2.3 Isolierung der Immunglobuline aus dem Serum 8
2.4 Markierung der Antiseren mit Fluorochromen 9
2.4.1 Fluoreszenzfarbstoffe (Fluorochrome) 9
2.4.1.1 Anforderungen an Fluorochrome 9
2.4.1.2 Fluoreszeinisothiozyanat (FITC) 9
2.4.1.3 Tetramethylrhodaminisothiozyanat(TRITC) 10
2.4.1.4 Weitere Fluorochrome 10
2.4.2 Kopplung mit FITC 11
2.4.3 Kopplung mit TRITC 12
2.5 Reinigung der Konjugate 13
2.5.1 Gelfiltration mit Sephadex G 25 und G 50 13
2.5.2 Gelfiltration mit Biogel P 6 14
2.5.3 Fraktionierung an DEAE Sephadex A 50 15
2.5.4 Adsorption und immunologische Reinigung . 15
2.6 Konzentrierung verdünnter Proteinlösungen 16
3 Charakterisierung und Qualitätskontrolle der Antiseren und
Konjugate 19
3.1 „Kenndaten der Konjugate 19
3.2 Methoden zur Charakterisierung der Antiseren 19
3.2.1 Prüfung auf freien Farbstoff 19
3.2.2 Bestimmung des Farbstoff/Protein Verhältnisses (F/P Quotient) 20
3.2.2.1 Bestimmung des F/P Verhältnisses für FITC Konjugate 20
3.2.2.2 Bestimmung des molaren Fluorochrom Protein Verhältnisses für
TRITC Konjugate 23
3.2.2.3 Bestimmung des F/P Verhältnisses für Konjugate mit anderen
Fluoreszenzfarbstoffen 23
I
VIII Inhaltsverzeichnis
3.2.3 Bestimmung der Proteinverteilung mittels Zelluloseazetatfolien¬
elektrophorese 24
3.2.4 Aktivitätsprüfung der Antiseren durch doppelte radiale Immundiffusion
in Agargel 25
3.2.5 Bestimmung der Antikörperkonzentration durch umgekehrte radiale
Immundiffusion 26
3.2.6 Bestimmung des Ak Proteingehaltes als Präzipitationseinheiten durch
Standardgel Doppeldiffusion 27
3.2.7 Spezifitätskontrolle durch Kopplung der Antigene an künstliche Substra¬
te, sog. DASS Methode 27
3.2.8 Spezifitätskontrolle durch biologische Systeme 28
3.2.8.1 Testung an Knochenmarkzellen 28
3.2.8.2 Spezielle Testung für die Membranimmunfluoreszenz 29
3.3 Eignungsprüfung im speziellen Testsystem mit Bestimmung der optima¬
len Gebrauchsverdünnung des Konjugates 30
4 Eigentliche immiinfliioreszenzoptische Technik 35
4.1 Aufbewahrung des Serums 35
4.2. Vorbereiten und Herstellung von Schnittpräparaten 36
4.2.1 Schnittechniken 36
4.2.1.1 Kryotomschnitte 36
4.2.1.2 Paraffineinbettung 37
4.2.1.3 Gefriertrocknung 38
4.2.2 Immunhistologische Färbung 38
4.2.2.1 Durchführung der direkten Methode 39
4.2.2.2 Durchführung der einfachen indirekten Methode ohne Fixation bei Zim¬
mertemperatur 40
4.2.2.3 Durchführung einer „doppelt indirekten Methode zum Nachweis kom¬
plementbindender Antikörper 40
4.2.2.4 Besondere Methoden 40
4.2.3 Untergrund und Nachfärbung 42
4.2.4 Einbettung 42
4.3 Vorbereiten und Herstellen von Präparaten für die Membranimmunfluo¬
reszenz 43
4.3.1 Membranimmunfluoreszenz an Lymphozyten 43
4.3.1.1 Isolierung der Lymphozyten 43
4.3.1.2 Inkubation 43
4.3.1.3 Einbettung und Anfertigung von Dauerpräparaten 43
4.3.2 Membranimmunfluoreszenz an Leberzellen 44
4.3.2.1 Präparation von Leberzellen 44
4.3.2.2 Inkubation 44
4.4 Unerwünschte Fluoreszenz und Spezifitätskontrollen während der
Durchführung einer immunfluoreszenzoptischen Untersuchung 44
4.4.1 Kontrollen bei der indirekten Immunfluoreszenz zum Nachweis von
Antikörpern 46
4.4.2 Kontrollen bei der direkten Immunfluoreszenz 46
4.4.3 Kontrolle beim Nachweis von komplementbindenden Antikörpern ... 46
5 Gerätetechnik und Befunddokumentation 47
5.1 Mikroskop 47
5.2 Zusatzgeräte 51
Inhaltsverzeichnis IX
5.2.1 Einrichtung zur Mikrophotographie 51
5.2.2 Konfokale Laserscanning Fluoreszenzmikroskopie (CLSM) 52
6 Allgemeine Hinweise 57
6.1 Seren, Antikörper, Konjugate und antigene Substrate 57
6.2 Befunderhebung 57
7 Anwendung der Immunfluoreszenz 59
7.1 Übersicht über Anwendungsgebiete 59
7.2 Nachweis von Immunglobulinen, Immunkomplexen, Auto , Allo , Xeno
und Neoantigenen in Biopsiematerial 59
7.2.1 Nierenbiopsie 59
7.2.2 Leberbiopsie 65
7.2.3 Hautbiopsie 70
7.3 Nachweis von humoralen Antikörpern 72
7.3.1 Ak gegen Zellmembranantigene 75
7.3.1.1 Ak gegen Leberzellmembran 75
7.3.1.2 Ak gegen Membranen von Schilddrüsenzellen 76
7.3.1.3 Ak gegen Membranen von Inselzellen des Pankreas 76
7.3.1.4 Ak gegen Membranen von Lymphozyten 76
7.3.1.5 Ak gegen Membranantigene von Tumorzellen 76
7.3.2 Ak gegen Zytoplasmabestandteile 76
7.3.2.1 Ak gegen Schilddrüsenantigene 76
7.3.2.2 Ak gegen Zellen des Magens 79
7.3.2.3 Ak gegen Zellen des Pankreas 81
7.3.2.4 Ak gegen steroidproduzierende Zellen von Nebenniere, Hoden, Ovar
und Plazenta 83
7.3.2.5 Ak gegen Zellen der Nebenschilddrüse 85
7.3.2.6 Ak gegen Zellen der Hypophyse 85
7.3.2.7 Ak gegen Zellen des Hypothalamus 86
7.3.2.8 Ak gegen Zellen der Ausführungsgänge von Speicheldrüsen 86
7.3.2.9 Ak gegen Zellen der Niere 87
7.3.2.10 Ak gegen Zellen des Darmes 93
7.3.2.11 Ak gegen Endometrium 93
7.3.2.12 Ak gegen Nervengewebe 93
7.3.2.13 Ak gegen Retinazellen 98
7.3.2.14 Ak gegen Granulozyten und Monozyten 98
7.3.2.15 Ak gegen Thrombozyten 103
7.3.2.16 Ak gegen Leberzellzytoplasma 104
7.3.2.17 Ak gegen endoplasmatisches Retikulum (Mikrosomen der Leber und
Niere) 106
7.3.2.18 Ak gegen Mitochondrien 110
7.3.2.19 Ak gegen Ribosomen 116
7.3.3 Ak gegen Zellkerne 116
7.3.3.1 Ak mit Kernmembranfluoreszenz 122
7.3.3.2 Ak mit homogener Kernfluoreszenz 123
7.3.3.3 Ak mit gesprenkelter Kernfluoreszenz 125
7.3.3.4 Ak mit punktförmiger Kernfluoreszenz 128
7.3.3.5 Ak mit nukleolärer Fluoreszenz 131
7.3.3.6 Ak mit Mitose assoziierter Fluoreszenz 134
7.3.4 Ak gegen zytoplasmatische Antigene von Kulturzellen 139
X Inhaltsverzeichnis
7.3.4.1 Ak mit granulärer zytoplasmatischer Fluoreszenz 139
7.3.4.2 Ak mit filamentöser zytoplasmatischer Fluoreszenz 147
7.3.5 Ak gegen besondere Komponenten 147
7.3.5.1 Ak gegen Spermatozoen 147
7.3.5.2 Ak gegen Epidermis 148
7.3.5.3 Ak gegen glatte Muskulatur 158
7.3.5.4 Ak gegen Skelettmuskulatur 165
7.3.5.5 Ak gegen Herzmuskulatur 169
7.3.5.6 Ak gegen Gefäßendothel 171
7.3.5.7 Ak gegen Bindegewebe 175
7.3.5.8 Ak gegen die glomeruläre Basalmembran der Niere 179
7.3.5.9 Ak gegen die Basalmembran von Nierentubuli 180
7.3.5.10 Ak gegen Gallengänge, Gallengangsepithel und Gallencanaliculi 182
7.4 Nachweis von Immunglobulin Rezeptoren an Lymphozyten 185
7.5 Immunfluoreszenz an sphärischen künstlichen Substraten 188
7.5.1 Nachweis von Ak gegen D Penicillamin mit Hilfe haptengekoppelter
Sephadex Kügelchen 189
7.6 Nachweis der Komplementaktivierung durch C reaktives Protein .... 191
Literaturverzeichnis 195
Sachwortverzeichnis 219
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