Röntgenkristallographische Charakterisierung von Thrombin:Inhibitor-Komplexen:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | Undetermined |
| Veröffentlicht: |
1996
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 1996 |
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
1
1
EINLEITUNG
3
1.
THROMBIN
UND
HAEMOSTASE
.
4
PROTHROMBIN
.
6
DIE
STRUKTUR
VON
A-THROMBIN
.
7
DIE
WECHSELWIRKUNG
VON
THROMBIN
MIT
MAKROMOLEKUELEN
.
8
2.
BLUTSAUGENDE
TIERE
.
12
3.
KRISTALLOGRAPHIE
.
14
KRISTALLISATION
.
15
KRISTALLE
.
'
.
16
BEUGUNG
VON
ROENTGENSTRAHLUNG
AN
KRISTALLEN
.
17
STREUUNG
AN
ATOMEN
.
18
TEMPERATURFAKTOR
.
19
BERECHNUNG
DER
ELEKTRONENDICHTE
.
19
LOESUNG
DES
PHASENPROBLEMS
.
20
2
MATERIAL
UND
METHODEN
25
2.1
MATERIALIEN
UND
GERAETE
.
25
2.1.1
BAKTERIEN
.
25
2.1.2
PLASMIDE
.
26
2.1.3
ENZYME
UND
PRAEPARATIONSSYSTEME
.
26
2.1.4
OLIGONUKLEOTIDE
.
26
2.1.5
CHEMIKALIEN,
MATERIALIEN
UND
GERAETE
.
28
2.2
MIKROBIOLOGISCHE
TECHNIKEN
.
29
2.2.1
FLUESSIGKULTUREN
.
29
2.2.2
PLATTENKULTUREN
.
30
2.2.3
FERMENTATION
VON
E.
COLI
.
30
2.2.4
EXTRAKTION
DES
PERIPLASMAS
.
30
2.2.5
AUFBEWAHRUNG
VON
BAKTERIEN
.
31
2.2.6
HERSTELLUNG
TRANSFORMATIONSKOMPETENTER
E.
CO/I-ZELLEN
.
31
2.2.7
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
E.
COLT-ZELLEN
.
32
2.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
TECHNIKEN
.
32
2.3.1
AGAROSE-GEL-ELEKTROPHORESE
.
32
2.3.2
DNA-SEQUENZIERUNG
MITTELS
PCR
(
'
CYCLE
SEQUENCING
'
)
.
32
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.3.3
MIDI-PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.
CO/T-ZELLEN
.
33
2.3.4
MINI-PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.
COH-ZELLEN
.
33
2.3.5
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSE-GELEN
.
34
2.3.6
VERDAU
DER
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
34
2.3.7
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
35
2.3.8
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
35
2.3.9
ZIELGERICHTETE
MUTAGENESE
.
36
2.4
PROTEINBIOCHEMISCHE
TECHNIKEN
.
36
2.4.1
PROTEINPRAEPARATION
.
36
2.4.2
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.
37
2.4.3
BESTIMMUNG
DER
INHIBITORWIRKUNG
.
38
2.4.4
KOMPLEXIERUNG
VON
THROMBIN
MIT
INHIBITOREN
.
38
2.4.5
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
39
2.4.6
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
SDS
POLYACRYLAMID-GELEN
.
40
2.4.7
ENZYMKINETIK
.
40
2.5
KRISTALLOGRAPHISCHE
TECHNIKEN
.
43
2.5.1
KRISTALLISATION
.
43
2.5.2
DATENSAMMLUNG
UND
-AUSWERTUNG
.
44
2.5.3
STRUKTURLOESUNG,
MODELLBAU
UND
VERFEINERUNG
.
44
3
ERGEBNISSE
47
3.1
DER
RHODNIIMTHROMBIN-KOMPLEX
.
47
3.1.1
KLONIERUNG,
MUTAGENESE
UND
EXPRESSION
VON
RHODNIIN
.
47
3.1.2
KRISTALLISATION,
STRUKTURLOESUNG
UND
MODELLBAU
.
48
3.1.2.1
KRISTALLISATION
.
48
3.1.2.2
PATTERSON-SUCHE
.
49
3.1.2.3
MODELLBAU
UND
VERFEINERUNG
.
49
3.1.2.4
STRUKTURBESCHREIBUNG
.
50
3.1.3
DER
AMINOTERMINUS
DER
A-KETTE
VON
A-THROMBIN
.
53
3.1.4
DER
KOMPLEX
VON
RHODNIIN
MIT
THROMBIN
.
59
3.1.4.1
RHODNIINS
AMINOTERMINALE
DOMAENE
.
59
3.1.4.2
DIE
WECHSELWIRKUNGEN
DER
AMINOTERMINALEN
DOMAENE
MIT
THROMBIN
.
62
3.1.4.3 DIE
CARBOXYTERMINALE
DOMAENE
VON
RHODNIIN
.
65
3.1.4.4
WECHSELWIRKUNGEN
DER
CARBOXYTERMINALEN
DOMAENE
MIT
THROM
BIN
.
65
3.1.4.5
DAS
VERBINDUNGSPEPTID
.
66
3.2
DER
ORNITHODORIMTHROMBIN-KOMPLEX
.
67
3.2.1
KLONIERUNG
UND
EXPRESSION
VON
OMITHODORIN
.
67
3.2.2
KINETISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
OMITHODORIMTHROMBIN-WECHSEL
WIRKUNG
.
70
3.2.3
KRISTALLISATION,
STRUKTURLOESUNG
UND
MODELLBAU
.
73
3.2.3.1
KRISTALLISATION
.
73
3.2.3.2
PATTERSON-SUCHE
.
74
*
3.2.3.3
MODELLBAU
UND
VERFEINERUNG
.
77
INHALTSVERZEICHNIS
IN
3.2.3.4
STRUKTURBESCHREIBUNG
.
78
3.2.4
DER
KOMPLEX
VON
ORNITHODORIN
MIT
THROMBIN
.
78
3.2.4.1
STRUKTURVERGLEICH
DER
KUNITZ-DOMAENEN
.
81
3.2.4.2
DIE
INTERAKTION
VON
ORNITHODORIN
MIT
THROMBIN
.
81
3.3
DER
BPTI:HUMANTHROMBIN
E192Q-KOMPLEX
.
85
3.3.1
KRISTALLISATION,
STRUKTURLOESUNG
UND
MODELLBAU
.
85
3.3.1.1
KRISTALLISATION
.
85
3.3.1.2
PATTERSON-SUCHE
.
86
3.3.1.3
MODELLBAU
UND
VERFEINERUNG
.
86
3.3.1.4
STRUKTURBESCHREIBUNG
.
88
3.3.2
DER
KOMPLEX
VON
BPTI
MIT
THROMBIN
E192Q
.
88
3.3.2.1
DIE
WECHSELWIRKUNGEN
ZWISCHEN
BPTI
UND
THROMBIN
.
.
88
3.3.2.2
DIE
STRUKTUR
VON
HUMANTHROMBIN
E192Q
.
90
4
DISKUSSION
95
DER
RHODNIIMTHROMBIN-KOMPLEX
.
95
DER
AMINOTERMINUS
DER
A-KETTE
.
98
DER
ORNITHODORIMTHROMBIN-KOMPLEX
.
99
DER
BPTI:HUMANTHROMBIN
E192Q-KOMPLEX
.
105
VERGLEICH
DER
DREI
NATUERLICHEN
THROMBININHIBITOREN
HIRUDIN,
RHODNIIN
UND
OR
NITHODORIN
.
111
5
LITERATURVERZEICHNIS
117 |
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