Untersuchungen zur Proteinglykosylierung bei Haloferax volcanii:
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1996
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| adam_text | O UNTERSUCHUNGEN ZUR PROTEINGLYKOSYLIERUNG BEI HALOFERAX VOLCANUE
DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER NATURWISSENSCHAFTEN (DR.
RER. NAT.) DER NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET HI -BIOLOGIE UND
VORKLINISCHE MEDIZIN- DER UNIVERSITAET REGENSBURG VORGELEGT VON CORNELIA
KUNTZ AUS INGOLSTADT 1996 INHALTSVERZEICHNIS 1. EINLEITUNG 1 1.1
HALOFERAX VOLCANII, EIN ARCHAEBACTERIUM 1 1.2
ZELLOBERFLAECHENGLYKOPROTEINE VON HALOBAKTERIEN 2 1.2.1. STRUKTUR DES
ZELLOBERFLAECHENGLYKOPROTEINS VON HALOBACTERIUM HALOBIUM 2 1.2.2.
FUNKTION DES ZELLOBERFLAECHENGLYKOPROTEINS 4 1.2.3. DAS
ZELLOBERFLAECHENGLYKOPROTEIN VON HALOFERAX VOLCANII 5 1.3. DIE
GLYKOPROTEIN-BIOSYNTHESE 6 1.3.1. DIE GLYKOPROTEIN-BIOSYNTHESE BEI
EUKARYOTEN 6 1.3.2. DIE GLYKOPROTEIN-BIOSYNTHESE BEI HALOBACTERIUM
HALOBIUM 10 1.4. ZIELSETZUNG .-. 12 2. ERGEBNISSE UND DISKUSSION 13 2.1.
ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DOLICHOL-GEBUNDENER OLIGO- SACCHARIDE
13 2.1.1. PRAEPARATIVE ANREICHERUNG 13 2.1.2. SPALTUNG DER DOLICHOLZUCKER
IN DEN LIPID- UND SACCHARIDANTEIL 16 2.1.3. CHARAKTERISIERUNG DES
SACCHARIDANTEILS 1 8 2.1.3.1. ANIONENAUSTAUSCHERCHROMATOGRAPHIE 18
2.1.3.2. MOLEKULARGEWICHTSABSCHAETUNG MITTELS
GELFILTRATIONSCHROMATOGRAPHIE 21 2.1.3.3. QUALITATIVE ZUSAMMENSETZUNG
DER SACCHARIDANTEILE 22 2.1.3.4. MASSENSPEKTROMETRISCHE UNTERSUCHUNG VON
S-3 UND S-2 25 2.1.3.5. STRUKTURANALYSE DER SACCHARIDANTEILE 27 2.1.4.
CHARAKTERISIERUNG DES LIPIDANTEILS 31 2.1.4.1. PHOSPHATNACHWEIS 31
2.1.4.2. MASSENSPEKTROMETRISCHE UNTERSUCHUNG 31 2.1.5. ANALYSE DER
INTAKTEN DOLICHOLZUCKER 33 2.1.5.1. DEAE-CHROMATOGRAPHIE VON DZ-1
UNDDZ-3 33 2.1.5.2. H-NMR-SPEKTRUM VON DZ-1 33 2.1.5.3. MASSENSPEKTREN
DER DOLICHOLZUCKER DZ-1 BISDZ-4 37 2.1.5.4. ZUSAMMENFASSUNG DER
VORGESCHLAGENEN STRUKTUREN FUER DIE DOLICHOLZUCKER DZ-1 BISDZ-4 41 2.1.6.
DISKUSSION 43 2.2. UNTERSUCHUNGEN ZUR O-GLYKOSYLIERUNG DES
ZELLOBERFLAECHENGLYKO- PROTEINS VON HALOFERAX VOLCANII 46 2.2.1. SUCHE
NACH LIPIDVORSTUFEN FUER DAS O-GLYKOSIDISCH GEBUNDENE DISACCHARID
GLUCOSYL(L* 2)GALACTOSE 46 2.2.1.1. RADIOAKTIVE MARKIERUNG DES
C/M-EXTRAKTES 46 2.2.1.2. EINFLUSS DER ZUGABE EINES VOM
ZELLOBERFLAECHENGLYKOPROTEIN ABGELEITETEN SYNTHETISCHEN PEPTIDS AUF DIE
C/M-EXTRAHIERBAREN LIPIDE 50 2.2.1.3. ZEITABHAENGIGKEIT DER
GLYKOSYLIERUNG DES SYNTHETISCHEN PEPTIDS P3 MIT U C-GALACTOSE 53 2.2.2.
BESTIMMUNG DER ZUSAMMENSETZUNG UND DER POSITION DER AUF DAS SYNTHETISCHE
PEPTID P3 UEBERTRAGENEN SACCHARIDE 53 2.2.3. UNTERSUCHUNG DER
STRUKTURVORAUSSETZUNGEN FUER DIE O-GLYKOSYLIERUNG 60 2.2.4. DISKUSSION 64
3. MATERIALIEN UND METHODEN 67 3.1. KULTURHALTUNG 67 3.1.1.
STAMMKULTURHALTUNG 67 3.1.2. KULTURHALTUNG FUER RADIOAKTIVE MARKIERUNGEN
67 3.1.3. KULTURHALTUNG FUER DIE PRAEPARATIVE ISOLIERUNG DER LIPIDE 67
3.2. RADIOAKTIVE MARKIERUNGEN 68 3.2.1. RADIOAKTIVE MARKIERUNG UND
ISOLIERUNG VON LIPIDEN 68 3.2.1.1. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON LIPIDEN 68
3.2.1.2. ISOLIERUNG RADIOAKTIV MARKIERTER LIPIDZUCKER 68 3.2.2.
RADIOAKTIVE MARKIERUNG UND ISOLIERUNG SYNTHETISCHER PEPTIDE 69 3.2.2.1.
RADIOAKTIVE MARKIERUNG SYNTHETISCHER PEPTIDE 69 3.2.2.2. REINIGUNG
RADIOAKTIV MARKIERTER SYNTHETISCHER PEPTIDE 69 3.2.2.2.1. REINIGUNG UEBER
RP-PHENYL-SAEULCHEN 69 3.2.2.2.2. REINIGUNGBIOTINYLIERTER PEPTIDE UEBER
AVIDIN-AGAROSE 69 3.3. PRAEPARATIVE ISOLIERUNGEN 70 3.3.1. PRAEPARATIVE
ISOLIERUNG DER DOLICHOLZUCKER 70 3.3.2. PRAEPARATIVE ISOLIERUNG
GLYKOSYLIERTER SYNTHETISCHER PEPTIDE 71 3.4. METHODEN ZUR ANALYSE DER
DOLICHOLZUCKER 72 3.4.1. DEAE-CHROMATOGRAPHIE 72 3.4.2. SPALTUNG DER
BINDUNG ZWISCHEN SACCHARID- UND LIPIDANTEIL BEI DOLICHOLZUCKERN DURCH
MILDE SAURE HYDROLYSE 72 3.4.3. METHODEN ZUR AUFKLAERUNG DER
SACCHARIDSTRUKTUR DER DOLICHOLZUCKER 73 3.4.3.1. REINIGUNG DER
SACCHARIDE DURCH ALKALISCHE ANIONENAUSTAUSCHER-HPLC 73 3.4.3.2.
BESTIMMUNG DES MOLEKULARGEWICHTES MITTELS GELFILTRATIONSCHROMATOGRAPHIE
73 3.4.3.3. TOTALHYDROLYSE DER OLIGOSACCHARIDE 74 3.4.3.4. REDUKTION MIT
NABRI 74 3.4.3.5. DERIVATISIERUNG ZU ALDITOLACETATEN 74 3.4.3.6.
PERMETHYLIERUNG 74 3.4.3.7. GC/MS-ANALYSEN 75 3.5. SYNTHETISCHE PEPTIDE
76 3.5.1. PEPTIDSYNTHESE 76 3.5.2. REINIGUNG SYNTHETISCHER PEPTIDE 77
3.5.3. BIOTINYLIERUNG DER SYNTHETISCHEN PEPTIDE 77 3.5.4. REINIGUNG DER
BIOTINYLIERTEN PEPTIDE 77 M 3.5.5. QUANTIFIZIERUNG DER BIOTINYLIERTEN
PEPTIDE 78 3.5.6. FRAKTIONIERUNG IN VIVO GLYKOSYLIERTER SYNTHETISCHER
PEPTIDE 79 3.5.7. BESTIMMUNG DES SACCHARIDANTEILS GLYKOSYLIERTER
SYNTHETISCHER PEPTIDE 79 3.5.7.1. TOTALHYDROLYSE ZU DEN MONOSACCHARIDEN
79 3.5.7.2. REDUKTIVE SS-ELIMINIERUNG 79 3.5.7.3. ALKALISCHE
ANIONENAUSTAUSCHER-HPLC 79 3.6. BESTIMMUNG DES MOLEKULARGEWICHTES DURCH
MASSENSPEKTROMETRIE 80 3.7. BIOCHEMISCHE STANDARDMETHODEN 80 3.7.1.
PHOSPHATBESTIMMUNG 80 3.7.2. DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 80 3.8.
CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSMATERIAL 81 3.9. GERAETE 81 4. ZUSAMMENFASSUNG
83 5. LITERATURVERZEICHNIS 85 RV
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