Transkriptionelle Regulation des humanen Papillomvirus Typ 18: Rolle des Transkriptionsfaktors YY1
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| Format: | Buch |
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 STRUKTUR UND ERSCHEINUNGSFORMEN VON PAPILLOMVIREN 2
1.2 PAPILLOMVIREN - IHRE ROLLE BEI DER ENTSTEHUNG VON ANOGENITALEM KREBS
5
1.3 FUNKTION DER REGULATORISCHEN REGION VON HPV18 9
1.4 DER TRANSKRIPTIONSFAKTOR YY1 11
1.5 FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 13
2 MATERIAL 14
2.1 ARBEITSMATERIALIEN, GERAETE 14
2.2 REAGENZIEN 15
2.2.1 CHEMIKALIEN 15
2.2.2 ENZYME UND ANDERE PROTEINE 17
2.2.3 DNA-GROESSENMARKER UND NUKLEOTIDE 18
2.2.4 PLASMIDE 19
2.2.5 SYNTHETISCHE OLIGONUKLEOTIDE 20
2.2.6 PUFFER UND LOESUNGEN 24
2.3 ZELLINIEN UND BAKTERIENSTAEMME 33
3 METHODEN 36
3.1 ZELLKULTUR 36
3.1.1 STABILE TRANSFORMATION VON HELA-ZELLEN 36
3.2 PLASMIDKONSTRUKTIONEN 37
3.2.1 RESTRIKTIONS VERDAU 38
3.2.2 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 39
3.2.3 ISOLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUS DEM AGAROSEGEL 40
3.2.4 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 41
3.2.5 KLONIERUNG IN PLASMIDVEKTOREN 45
3.2.6 TRANSFORMATION KOMPETENTER BAKTERIEN 47
3.2.7 EXTRAKTION UND REINIGUNG VON PLASMID-DNA 48
3.2.8 SEQUENZIERUNG POSITIVER KLONE 50
3.3 TRANSFEKTIONSEXPERIMENTE 51
3.3.1 TRANSFEKTION VON ZELLEN MIT DNA 51
3.3.2 BESTIMMUNG DER LUCIFERASEAKTIVITAET NACH ZELLTRANSFEKTION 52
3.3.3 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON PROTEINEN 53
3.3.4 CHLORAMPHNICOL-ACETY LTRANSFERASE-ASSAY (C AT-ASSAY) 5 3
3.3.5 FLUESSIG-SZINTILLATION 54
3.4 EXTRAKTION VON DNA UND RNA SOWIE IHRE ANALYSE IM SOUTHERN BLOT BZW.
NORTHERN BLOT 54
3.4.1 ISOLATION HOCHMOLEKULARER DNA AUS SAEUGETIERZELLEN 54
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.4.2 ISOLATION GESAMTZELLULAERER RNA AUS SAEUGETIERZELLEN 55
3.4.3 SPEKTROMETRISCHE BESTIMMUNG DER NUKLEINSAEUREKONZENTRATION 56
3.4.4 AGAROSEGELELEKTROPHORESE
56
3.4.5 TRANSFER VON DNA BZW. RNA AUF NYLONMEMBRANEN 57
3.4.6 MARKIERUNG VON DNA MIT HILFE VON "RANDOM"-01IGONUKLEOTIDEN ALS
PRIMER
(RANDOM PRIMED DNA LABELING) 59
3.4.7 HYBRIDISIERUNG VON NYLONMEMBRANEN 60
3.5 DNA-PROTEIN-BINDUNGSANALYSEN: GEL-RETARDATION 61
3.5.1 HYBRIDISIERUNG VON OLIGONUKLEOTID-EINZELSTRAENGEN 61
3.5.2 RADIOAKTIVE MARKIERUNG DER 5'-ENDEN VON OLIGONUKLEOTIDEN 62
3.5.3 GEL-RETARDATION 62
3.6 SYNTHETISCHE OLIGONUKLEOTIDE 63
4 ERGEBNISSE 64
4.1 NORTHERN BLOT- UND SOUTHERN BIOT-ANALYSEN 64
4.1.1 NORTHERN BLOT-ANALYSEN -
YY
64
4.1.2 SOUTHERN BLOT ANALYSEN 69
4.2 TRANSFEKTIONSEXPERIMENTE 75
4.2.1 FUNKTIONELLE UNTERSUCHUNG DES PROXIMALEN FRAGMENTS DER HPV 18-URR
76
4.2.2 VERHALTEN DER YY1-BINDUNGSSTELLE DES OL13 IM GESAMTKONTEXT DER URR
85
4.2.3 DELETIONSANALYSE DER HPV 18-URR 96
4.2.4 MUTATION DER HPV 18-URR AN POSITION -251 BIS -245 109
4.2.5 KOTRANSFEKTIONSEXPERIMENTE 115
4.3 GEL-RETARDATIONSANALYSEN 118
4.4 STABILE INTEGRATION VON CAT-PLASMIDEN IN HELA-ZELLEN 122
5 DISKUSSION 129
5.1 YYL-EXPRESSION IN VERSCHIEDENEN ZELLINIEN 131
5.2 YY1-BINDUNGSSTELLE IM PROXIMALEN FRAGMENT DER HPV 18-URR 132
5.3 PROXIMALES FRAGMENT IM GESAMTKONTEXT DER HPV18-URR 139
5.4 DELETIONSANALYSE DER HPV18-URR 143
5.5 MUTATION DER OL22-REGION IN DER HPV18-URR 149
5.6 INTERAKTION ZWISCHEN YY1 UND EINEM WEITEREN TRANSKRIPTIONSFAKTOR 152
5.7 PATHOGENITAETSMECHANISMEN EINER HPV-INFEKTION:
WELCHE ROLLE KOENNTE YY1 SPIELEN? 153
6 ZUSAMMENFASSUNG 155
7 LITERATURVERZEICHNIS 157
8 LEBENSLAUF 177
9
DANKSAGUNG
178 |
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