Funktionelle Analyse des S-Locus in Solanum tuberosum L.:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
1.1
SELBST-INKOMPATIBILITAET
IN
ANGIOSPERMEN
2
1.1.1
GENETISCHE
GRUNDLAGEN
UND
PHYSIOLOGIE
2
1.1.1.2
HOMOMORPHE,
SPOROPHYTISCHE
SELBST-INKOMPATIBILITAET
3
1.1.1.3
GAMETOPHYTISCHE
SELBST-INKOMPATIBILITAET
4
1.1.1.4
S-LOCUS
MUTANTEN
5
1.1.1.5
SELBST-KOMPATIBILITAET
DURCH
MUTATIONEN
AUSSERHALB
DES
S-LOCUS
6
1.1.1.6
PHYSIOLOGISCH
BEDINGTE
SELBST-KOMPATIBILITAET
7
1.2
MOLEKULARE
GRUNDLAGEN
DER
SELBST-INKOMPATIBILITAET
7
1.2.1
MOLEKULARE
GRUNDLAGEN
SPOROPHYTISCHER
SELBST-INKOMPATIBILITAET
7
1.2.2
MOLEKULARE
GRUNDLAGEN
GAMETOPHYTISCHER
SELBST-INKOMPATIBILITAET
9
1.3
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
13
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
16
2.1
ABKUERZUNGEN
16
2.2
MATERIAL
17
2.2.1
CHEMIKALIEN,
RADIOISOTOPE
UND
ENZYME
17
2.2.2
HAEUFIG
VERWENDETE
MEDIEN
UND
PUFFER
18
2.2.3
PFLANZENMATERIAL
19
2.2.4
BAKTERICNSTAEMME,
HEFESTAEMME
UND
DNA-VEKTOREN
20
2.3
METHODEN
22
2.3.1
REINIGUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
22
2.3.1.1
ISOLIERUNG
VON
PFLANZEN-DNA
FUER
SOUTHERN-BLOT
ANALYSEN
22
2.3.1.2
ISOLIERUNG
VON
PFLANZEN-DNA
FUER
PCR-ANALYSCN
23
2.3.1.3
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
23
2.3.1.4
ISOLIERUNG
VON
GESAMT
UND
POLY(A)+
RNA
23
2.3.2
KONSTRUKTION
EINER
PLASMID
CDNA
BANK
24
2.3.3
SYNTHESE
UND
REINIGUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
24
2.3.4
IN
VITRO
AMPLIFIKATION
VON
DNA
DURCH
"POLYMERASE
CHAIN
REACTION"
24
(PCR)
2.3.5
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
25
2.3.6
NUKLEINSAEURE-HYBRIDISIERUNGEN
25
2.3.6.1
SOUTHERN-BLOT
ANALYSE
25
2.3.6.2
KOLONIE-HYBRIDISIERUNG
25
2.3.7
DNA-SEQUENZANALYSE
26
2.3.8
KONSTRUKTION
UEBERLAPPENDER
DCLETIONSKLONE
26
2.3.9
COMPUTERAUSWERTUNG
26
2.3.10
TRANSIENTE
EXPRESSION
MITTELS
MIKROPROJEKTIL-BOMBARDEMENT
27
2.3.10.1
PRAEPARATION
DES
PFLANZENGEWEBCS
27
2.3.10.2
PRAEPARATION
DER
GOLDPARTIKEL
UND
BALLISTISCHE
DNA-TRANSFEKTION
27
2.3.11
STABILE
PFLANZENTRANSFONNATION
28
2.3.11.1
TRANSFORMATION
VON
AGROBACTERIUM
TUMEFACIENS
MIT
BINAEREN
T-DNA
28
VEKTOREN
2.3.11.2
PRAEPARATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
T-DNA
PLASMID-DNA
28
2.3.11.3
TRANSFORMATION
VON
NICOTIANA
TABACUM
UND
SOLANUM
TUBEROSUM
28
2.3.12
HISTOCHCMISCHCR
NACHWEIS
VON
SS-GLUCURONIDASE-AKTIVITAET
29
2.3.13
FLUOROMCTRISCHC
SS-GLUCURONIDASE-AKTIVITAETSBESTIMMUNG
29
2.3.14
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
DER
CHLORAMPHCNICOL-ACCTYLTRANSFCRASC
30
AKTIVITAET
2.3.15
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
PFLANZENPROTEINEN
30
2.3.15.1
GESAMTPROTEIN-EXTRAKTION
30
2.3.15.2
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
30
2.3.15.3
WESTERN-BLOT-ANALYSE
31
2.3.16
TRANSFORMATION
VON
HEFEZCLLCN
31
2.3.17
STABILE
INTEGRATION
VON
PLASMIDEN
IN
DAS
HEFEGENOM
32
2.3.18
FILTER-ASSAY
ZUM
NACHWEIS
DER
B-GALAKTOSIDASE
AKTIVITAET
IN
ILEFEZELLEN
32
2.3.19
IN
SITU
ANALYSE
DES
POLLCNSCHLAUCHWACHSTUMS
MITTELS
FLUORESZENZ
32
MIKROSKOPIE
3.
ERGEBNISSE
33
3.1
GENOM
ISCHE
ORGANISATION
DES
S2-IX CUS
VON
TUBEROSUM
34
3.2
EXPRCSSIONSANALYSE
DER
S2-RNASC
IN
TRANSGENEN
TABAK-PFLANZEN
37
3.2.1
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
S2-RNASC
EXPRESSION
IN
POLLEN
TRANSGENER
TABAK
37
PFLANZEN
3.2.2
EXPRESSIONSANALYSE
DER
S2-RNASE
IN
TRANSGENEN
TABAK-PFLANZEN
39
3.2.3
CHIMAERE
GENFUSIONEN
DES
S2-RNASC
PROMOTORS
MIT
DEM
GUS-RCPORTERGEN
44
3.2.4
HISTOCHEMISCHE ANALYSE
VON
CHIMAEREN
S2-RNASE
GUS-FUSIONEN
IN
47
TRANSGENEN
TABAK-PFLANZEN
3.2.5
QUANTITATIVE
ANALYSE
VON
CHIMAEREN
S2-RNASC
GUS-FUSIONEN
IN
TRANSGENEN
53
TABAK-PFLANZEN
3.2.6
ENTWICKLUNGSSPEZIFISCHE
EXPRESSION
VON
CHIMAEREN
S2-RNASE
GUS
54
FUSIONEN
IN
TRANSGENEN
TABAK-PFLANZEN
3.2.7
QUANTITATIVE
ANALYSE
DER
GEWEBESPEZIFISEBEN
EXPRESSION
VON
CHIMAEREN
S2
55
RNASE
GUS-FUSIONEN
IN
TRANSGENEN
TABAK-PFLANZEN
3.2.8
TRANSIENTE
EXPRESSION
VON
CHIMAEREN
S2-RNASE
GUS-FUSIONEN
IN
TABAK
56
POLLEN
MITTELS
MIKROPROJEKTIL-BOMBARDEMENT
3.3
HISLOEHEMISCHE
UND
QUANTITATIVE
ANALYSE
VON
CHIMAEREN
S2-RNASE
GUS
60
FUSIONEN
IN
SOLANUM
TUBEROSUM
3.4
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
SK2-PROMOTORS
AUS
SOLANUM
64
TUBEROSUM
3.4.1
ISOLIERUNG
DES
SK2-PROMOTORS
64
3.4.2
CHARAKTERISIERUNG
CHIMAERCR
SK2-PROMOTOR
GUS-FUSIONEN
IN
TRANSGENEN
66
KARTOFFELN
3.4.2.1
HISTOCHEMISCBE
ANALYSE
CHIMAERER
SK2-PROMOTOR
GUS-FUSIONEN
IN
67
TRANSGENEN
KARTOFFELN
3.4.2.2
QUANTITATIVE
ANALYSE
DER
SK2-PROMOTOR
GUS-EXPRESSION
IN
71
KARTOFFELBLUETEN
3.4.2.2.1
ENTWICKLUNGSSPEZIFISCH
REGULIERTE
EXPRESSION
DER
SK2
GUS-FUSIONEN
72
3.4.2.2.2
QUANTITATIVE
ANALYSE
DER
GEWEBESPEZIFISCHEN
EXPRESSION
CHIMAERCR
SK2
73
GUS-FUSIONEN
IN
TRANSGENEN
KARTOFFELN
3.5
MANIPULATION
DES
SL-PHAENOTYPS
IN
SOLANUM
TUBEROSUM
74
3.5.1
KONSTRUKTION
VON
'SENSE'
UND
'ANTISENSE'
EXPRESSIONS-PLASMIDEN
74
3.5.2
EXPRESSION
DER
S2-RNASE
IN
INKOMPATIBLEN
KARTOFFELLINIEN
76
3.5.3
ANALYSE
DES
POLLCNSCHLAUCHWACHSTUMS
IN
TRANSGENEN
SK2QS2
PFLANZEN
79
MITTELS
HUORESZCNZ-MIKROSKOPIE
3.6
ETABLIERUNG
EINES
GENETISCHEN
SCLEKTIONSSYSTCMS
IN
HEFE
ZUR
ISOLIERUNG
82
STEMPELSPEZIFISCHER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
3.6.1
PRINZIP
DES
'
ONC-HYBRID-SYSTCMS'
83
3.6.2
ANWENDUNG
DES
'ONE-HYBRID-SYSTEMS'
ZUR
ISOLIERUNG
REGULATORISCHER
84
FAKTOREN
DER
S-GCNEXPRCSSION
3.6.3
KONSTRUKTION
VON
REPORTERPLASMIDEN
UND
EXPRESSIONSBIBLIOTBCKCN
FUER
DAS
85
'ONC-HYBRID-SYSTCM*
3.6.4
DURCHFUEHRUNG
DER
'
ONE-HYBRID-SCREENS
'
87
3.6.5
ETABLIERUNG
MODIFIZIERTER
SCREENING
VERFAHREN
FUER
DAS
'
ONE-HYBRID-SYSTEM'
88
4.
DISKUSSION
92
4.1
GCNOMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
S2-RNASE
LOCUS
IN
SOLANUM
TUBEROSUM
92
4.2
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
EXPRESSION
CHIMAERER
S2-RNA.SE
REPORTERGEN
94
KONSTRUKTE
IN
POLLEN
TRANSGENER
TABAK-PFLANZEN
4.3
DIE
EXPRESSION
EINES
GCNOMISCHCN
KLONS
DER
S2-RNASE
IN
TRANSGENEN
95
TABAK-PFLANZEN
4.4
EXPRCSSIONSANALYSC
CHIMAERER
S2-RNASE
GUS-FUSIONEN
IN
TRANSGENEN
97
TABAK-PFLANZEN
4.4.1
IDENTIFIZIERUNG
REGULATORISCHER
ELEMENTE
DES
S2-PROMOTORS
97
4.4.2
QUANTITATIVE
ANALYSE
CHIMAERER
S2-RNASE
GUS-FUSIONEN
IN
TRANSGENEN
101
TABAK-PFLANZEN
4.4.3
ENTWICKLUNGSSPEZIFISCH
REGULIERTE
EXPRESSION
CHIMAERER
S2
GUS-FUSIONEN
IN
102
TRANSGENEN
TABAK-PFLANZEN
4.4.4
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
CHIMAERER
S2
GUS-FUSIONEN
102
4.5
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
SK2-PROMOTORS
102
4.6
MANIPULATION
DES
SL-PHAENOTYPS
104
4.7
EVIDENZ
FUER
DISTALE
KONTROLLELCMCNTE
AM
S-I^OCUS
106
4.8
ETABLIERUNG
EINE
GENETISCHEN
SELEKTIONSSYTEMS
IN
HEFE
ZUR
ISOLIERUNG
109
STEMPELSPEZIFISCHER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
5.
ZUSAMMENFASSUNG
111
6.
LITERATURVERZEICHNIS
112
7.
ANHANG
127
7.1
NUKLEOTIDSEQUENZ
DES
KARTOFFEL
S2-PROMOTORS
127
7.2
KONSERVIERTE
SEQUENZ-MOTIVE
DER
SL
UND
S2-PROMOTOREN
VON
SOLANUM
128
TUBEROSUM
7.3
SPEZIFISCHE
CAT-AKTIVITAET
IN
STEMPEL
UND
POLLEN
TRANSGENER
TABAK-
129
PFLANZEN
7.4
ENTWICKLUNGSSPEZIFISCHE
GUS-EXPRESSION
IM
STEMPEL
TRANSGENER
S2-GUS
129
TABAK-PFLANZEN
7.5
SPEZIFISCHE
GUS-AKTIVITAET
IN
POLLEN
UND
STEMPEL
S2-GUS
TRANSGENER
130
TABAK-PFLANZEN
7.6
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
CHIMAERER
S2-GUS
FUSIONEN
IN
TRANSGENEN
131
TABAK-PFLANZEN
7.7
TRANSIENTE
GUS-EXPRESSION
CHIMAERER
S2-GUS
KONSTRUKTE
IN
TABAK
POLLEN
132
7.8
SEQUENZ
DES
SK2
PROMOTORS
133
7.9
QUANTITATIVE
ANALYSE
TRANSGENER
SK2-GUS
PFLANZEN
134
7.9.1
SPEZIFISCHE
GUS-AKTIVITAETEN
IN
STEMPELN
TRANSGENER
SK2-GUS
PFLANZEN
134
7,9.2
ENTWICKLUNGSSPEZIFISCHE
EXPRESSION
IN
STEMPELN
TRANSGENER
SK2-GUS
134
PFLANZEN
7.9.3
GEWEBESPEZIFISCHE
EXPRESSION
IN
STEMPELN
TRANSGENER
SK2-GUS
PFLANZEN
135
7.10
SEQUENZEN
DER
VERWENDETEN
PRIMER
135 |
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