In-vitro-Kultivierung von primären humanen Hepatozyten und immunologische Charakterisierung anhand der Expression und Modulation der humanen Leukozyten Antigene (HLA) -A, -B, -C, -DR und des interzellulären Adhäsionsmoleküls (ICAM) -1:
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1995
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-I
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
UND
FRAGESTELLUNG
.
1
1.1
KULTIVIERUNG
VON
HEPATOZYTEN
.
1
1.2
IMMUNOLOGIE
DER
LEBER
.
4
2.
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.
7
2.1
LEBERGEWEBE
.
7
2.2
ISOLATIONSMETHODEN
.
7
2.2.1
ISOLATIONSMETHODE
A
(DISPERSION
IM
MAGNETRUEHRER)
.
7
2.2.2
ISOLATIONSMETHODE
B
(DISPERSION
IM
SCHUETTELBAD)
.
8
2.2.3
ISOLATIONSMETHODE
C
(2-SCHRITT-PERFIISION)
.
9
2.2.4
COLLAGENASEN
.
11
2.3
SEPARATIONSMETHODEN
.
11
2.3.1
METHODE
A
(DREIMALIGE
DIFFERENTIALZENTRIFIIGATION
BEI
28XG)
.
12
2.3.2
METHODE
B
(ZENTRIFUGATION
IN
PERCOLL)
.
12
2.4
ZELLVITALITAET
UND
ZELLAUSBEUTE
.
13
2.5
KULTURMETHODEN
.
14
2.5.1
KULTURMEDIEN
UND
ZUSAETZE
.
14
2.5.2
KULTURGEFAESSE
.
15
2.5.3
COLLAGENBESCHICHTUNG
.
15
2.5.4
MEDIUMWECHSEL
.
15
2.5.5
KULTIVIERUNG
VON
LEBERGEWEBSSTUECKEN
.
16
2.6
HUMANE
HEPATOZYTENZELLINIE
HEPG2
.
16
2.6.1
KRYOKONSERVIERUNG
UND
REKULTIVIERUNG
VON
HEPG2
ZELLEN
UND
HZ
.
18
2.7
HUMANE
NABELSCHNUR
ENDOTHELZELLEN
.
19
2.8
STIMULATION
MIT
ZYTOKINEN
.
20
2.8.1
ZEITKINETIK
.
21
2.8.2
KONZENTRATIONSKINETIK
.
21
2.9
FAERBUNGEN
.
22
2.9.7
IMMUNPEROXIDASEFAERBUNG
.
22
2.9.2
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
.
24
2.9.3
FLUOROMETRIE
UND
AUSWERTUNG
.
26
3.
ERGEBNISSE
.
29
3.1
ZELLAUSBCUTE
UND
VITALITAET
.
29
3.2
ZEITSPANNE
ZWISCHEN
ENTNAHME
UND
VERARBEITUNG
.
31
3.3
COLLAGENASEN
.
32
3.4
ISOLATIONSMETHODCN
.
32
3.4.1
ISOLATIONSMETHODEN
A
(DISPERSION
IM
MAGNETRUEHRER)
UND
B
(DISPERSION
IM
SCHIITTELBAD)
.
32
3.4.2
ISOLATIONSMETHODE
C
(2-SCHRITT-PERFUSION)
.
33
3.5
SEPARATIONSMETHODEN
.
35
3.5.7
METHODE
A
(3
-FACHE
DIFFERENTIALZENTRIFUGATION
BEI
28XG)
.
35
3.5.2
METHODE
B
(PERCOLL
ZENTRIFUGATION)
.
37
3.6
KULTURMETHODEN
.
39
3.6.7
AUSSAAT
UND
ADHAESION
.
39
3.6.2
MEDIUMWECHSEL
.
40
3.6.3
KULTURMEDIEN
UND
ZUSAETZE
.
40
-N
3.6.4
KULTURPLALTEN
.
41
3.7
KULTIVIERUNG
VON
LEBERGEWEBSSTUECKEN
.
42
3.8
IMMUNZYTOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZELLEN
.
42
3.10
EXPRESSION
UND
MODULATION
VON
HLA-A,
-B,
-C,
-DR
UND
ICAM
1
AUF
HEPATOZYTEN
.
47
3.10.1
ZEIL
UND
KONZENTRATIONSKINELIK
.
47
3.10.2
IMMUNPEROXIDASE
FAERBUNGEN
.
50
3.10.3
FLUOROMETRISCHE
MESSUNGEN
AUF
HZ
.
52
3.10.4
FLUORONIELRISCHE
KONTROLLMESSUNG
AUF
ENDOTHELZELLEN
.
53
3.11
KRYOKONSERVIERUNG
VON
HZ
.
56
4.
DISKUSSION
.
57
4.1
PATHOLOGIE
DES
GEWEBES
.
57
4.2
ZUSTAND
DES
RESEKTATS
.
58
4.3
ZEITSPANNE
ZWISCHEN
ENTNAHME
UND
VERARBEITUNG
.
58
4.4
ISOLATIONSMETHODEN
.
60
4.5
COLLAGENASEN
.
61
4.6
SEPARATIONSMETHODEN
.
62
4.7
IMMUNZYTOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZELLKULTUREN
.
64
4.8
KULTURMETHODEN
.
66
4.8.1
KULTURDAUER
.
66
4.8.2
MEDIUMWECHSEL
.
66
4.8.3
ADHAESIONSSUBSTRATE
UND
ALTERNATIVE
KULLUNNODELLE
.
67
4.8.4
SYNTHESELEISTUNG
DER
HZ
IN
VITRO
.
69
4.8.5
KULTURMEDIEN
.
70
4.8.6
MEDIUMZUSAELZE
.
72
4.9
EXPRESSION
XON
HLA-A,
-B,
-C,
-DR
UND
ICAM-1
AUF
HZ
.
79
4.9.
1
ERGEBNISSE
FRUEHERER
STUDIEN
.
74
4.9.2
VERGLEICH
DER
EINGESETZTEN
MESSMETHODEN
.
75
4.9.3
EXPRESSION
VON
HIA-A,
-B.
-C
.
76
4.9.4
EXPRESSION
VON
H1A-DR
.
78
4.9.5
EXPRESSION
VON
ICAM-1
.
79
4.9.6
IMMUNOGENITAET
VON
HZ
.
81
4.9.7
SCHLUSSBEMERKUNG
.
84
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
86
6.
LITERATUR
.
88
7.
ANHANG
.
111
7.1
DANKSAGUNG
.
1
1
1
7.2
WISSENSCHAFTLICHE
PUBLIKATIONEN
.
112
7.3
LEBENSLAUF
.
114
7.4
EHRCNWORTHCHC
ERKLAERUNG
.
116 |
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