Isolierung und Identifizierung einer mittelrepetitiven Sequenz bei Podospora anserina:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1994
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| Beschreibung: | Heidelberg, Univ., Diss., 1996 (Nicht für den Austausch) |
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I. EINFUEHRUNG
A. EINLEITUNG
B. ALTERN UND GENOMISCHE INSTABILITAET
1 CHROMOSOMALE UMORGANISATIONEN
2. MIKRONUKLEI UND VERLUST REPETITIVER SEQUENZEN
3. VERLUST DER RDNA
4. VERKUERZUNG DER TELOMERE
A. VERKUERZUNG DER TELOMAERE WAEHREND DES ALTERNS
B. DAS ZWEIPHASEN-MODELL DER ZELLULAEREN SENESZENZ
C. DER POSITIONSEFFEKT DER TELOMERE
5. DAS MOBILE INTRON MODELL VON
PODOSPORA ANSERINA
C. ALTERSRELEVANTE GENE
1. DER AP-1 KOMPLEX
2. DAS MODELLSYSTEM HEFE _
A. DAS RAS-GEH-SYSTEM DER HEFE
B. RAS ALS LEBENSERHALTUNGSGEN
D. PROBLEMSTELLUNG
II. MATERIAL UND METHODEN
A. MATERIAL
1. STAEMME
2. PLASMIDE
3. GERAETE
4. MATERIALIEN
5. CHEMIKALIEN
6. ENZYME
A. RESTRIKTIONSENDONUCLEASEN
B. DNA-MODIFIZIERENDE ENZYME UND PROTEASEN
7. NUKLEOTIDE, OLIGONUKLEOTIDE UND NUKLEINSAEUREN
8. PUFFER
9. MEDIEN
A. P.
ANSERINA
IC.
LUNATA
B. E.
COLI
10. GENBANK
B. METHODEN
1. KULTURBEDINGUNGEN
A.
P. ANSERINA
B.
C. LUNATA
C. E.
COLI
D. PHAGEN
SEITE
1
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2
4
5
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25
25
25
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2. DNA-ISOLIERUNG 25
A.
P. ANSERINA 25
B.
C. LUNATA 27
C. E.
COLI 27
D. PHAGEN 28
3. RNA-ISOLIERUNG AUS
P. ANSERINA 28
4. RESTRIKTIONEN 29
5. GELELEKTROPHORESEN 29
A. CHEF-PULSFELDGELELEKTROPHORESEN 29
B. DNA-GELELEKTROPHORESEN 29
C. RNA-GELELEKTROPHORESEN 30
6. SOUTHERN-BLOT 30
7. PLAQUE- UND KOLONIEFILTERBINDUNG 30
A. PLAQUEFILTERBINDUNG 30
B. KOLONIEFILTERBINDUNG 30
8. DNA-DNA HYBRIDISIERUNGEN 31
A. HOMOLOGE HYBRIDISIERUNGEN 31
B. SOUTHERN-HYBRIDISIERUNGEN MIT 5'-ENDMARKIERTEN OLIGONUKLEOTIDEN 31
C. HETEROLOGE HYBRIDISIERUNGEN 31
D. HYBRIDISIERUNGEN DER COSMID-GENBANKEN 31
E. REHYBRIDISIERUNG VON BEREITS VERWENDETEN FILTERN 31
9. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA-SONDEN 31
A. RADIOAKTIVE MARKIERUNG MITTELS 'OLIGO PRIMED LABELING' 31
B. 5'-ENDMARKIERUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN 32
10. HYBRIDISIERUNGEN MIT RNA 32
A. NORTHERN-BLOTS 32
B. DNA-RNA-HYBRIDISIERUNGEN 32
C. RNA-RNA-HYBRIDISIERUNGEN 32
11. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON RNA-SONDEN DURCH IN-VITRO-TRANSKRIPTION
32
10. KLONIERUNG 33
A. LIGATION 33
B. TRANSFORMATION VON
E. COLI-ZELLEN 33
C. BLAU-WEISS-SELEKTION 33
13. ERSTELLUNG VON CDNA-BANKEN 33
A. PHARMACIA 'CDNA-SYNTHESE KIT' 34
B. ERSTELLUNG EINER
P. ANSERINA CDNA-BANK IN UNI-ZAP XR VEKTOR 34
14. POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 36
15. DNA-SEQUENZIERUNG 36
16. OLIGONUKLEOTIDSYNTHESE 36
17. SICHERHEITSBESTIMMUNGEN 36
18. ANHANG 37
III. ERGEBNISSE 38
A. RAS-AEHNLICHE SEQUENZEN BEI
PODOSPORA ANSERINA 38
1. HYBRIDISIERUNG GENOMISCHER DNA VON PODOSPORA ANSERINA MIT RAS
SPEZIFISCHEN SONDEN 38
2. KONSTRUKTION UND CHARAKTERISIERUNG VON CDNA-BANKEN
43
A. ERSTELLUNG VON CDNA-BANKEN
44
B. UEBERPRUEFUNG DER GENBANKEN
47
3. ISOLIERUNG RAS-AEHNLICHER GENE 50
A. HYBRIDISIERUNG EINER GEHOMISCHEN GENBANK 50
B. HYBRIDISIERUNG VON CDNA-GENBANKEN 51
B. REPETITIVE SEQUENZEN BEI
PODOSPORA ANSERINA 53
1. IDENTIFIZIERUNG EINER MITTELREPETITIVEN SEQUENZ
53
A. HYBRIDISIERUNG GENOMISCHER DNA MIT FRAGMENTEN VON PMRAS3-2 53
B. SEQUENZIERUNG DER REPETITIVEN SEQUENZ AM 5'-ENDE DES
MRAS3-GENS 53
C. HYBRIDISIERUNG GENOMISCHER DNA VON
PODOSPORA ANSERINA MIT
FRAGMENTEN VON PPASGT-1
55
D. DER POLY(GT)-CLUSTER VON PASGT-1 58
2
. VORKOMMEN UND CHARAKTERISIERUNG DER REPETITIVEN SEQUENZ 60
A. KONSERVIERUNG DER REPETITIVEN SEQUENZ IN VERSCHIEDENEN SPECIES
VON
PODOSPORA ANSERINA 60
B. VERTEILUNG DER REPETITIVEN SEQUENZ IM GENOM VON
PODOSPORA ANSERINA
62
C. HYBRIDISIERUNG EINER LAMBDA- UND EINER COSMID-GENBANK VON
PODOSPORA ANSERINA
63
D. LAGE DER POLY(GT)-CLUSTER AUF DEN CHROMOSOMEN 64
IV. DISKUSSION
66
A. QUALITAET DER CDNA-GENBANKEN 66
B. IDENTIFIZIERUNG RAS-AEHNLICHER GENE BEI
PODOSPORA ANSERINA 70
1. SOUTHEM-ANALYSEN 70
2. ISOLIERUNGSVERSUCH DER RAS-AEHNLICHEN GENE 71
C. IDENTIFIZIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG EINER MITTELREPETITIVEN
SEQUENZ BEI PODOSPORA ANSERINA 73
1. HAEUFIGKEIT UND LOKALISATION VON POLY(GT)
N-SEQUENZEN BEI PILZEN 73
2. POLY(GT)
N UND DIE BILDUNG VON Z-DNA 78
3. POLY(GT)
N UND TRANSKRIPTIONSKONTROLLE 78
4. POLY(GT)
N UND REKOMBINATION 80
5. POLY(GT)
N UND LAENGENPOLYMORPHISMEN 81
V. ZUSAMMENFASSUNG 82
VI. LITERATUR
84 |
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