RNA-Editing der mitochondrialen Aspartyl-tRNA von Beuteltieren:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Utz, Wiss.
1996
|
| Schriftenreihe: | Biologie
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 1997 |
| Beschreibung: | 127 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALT
ABKUERZUNGEN
.
1
FRAGESTELLUNG
UND
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
EIN
"FALSCHES"
ANTICODON
UND
SEINE
FUNKTION
.
3
EINFUEHRUNG
I.
DER
GENBESTAND
VON
TIERMITOCHONDRIEN
IST
KONSERVIERT
.
5
II.
MITOCHONDRIALE
GENE
VON
VERTEBRATEN
EVOLVIEREN
SCHNELLER
ALS
GENE
IM
KEM
.
8
III.
MITOCHONDRIALE
TRNAS
WERDEN
AUS
POLYCISTRONISCHEN
PRIMAERTRANSKRIPTEN
EXZISIERT
.
11
IV.
DAS
MITOCHONDRIALE
TRANSLATIONSSYSTEM
IST
MINIMALISTISCH
UND
BESITZT
EINEN
EIGENEN
CODE
.
12
1.
MITOCHONDRIALE
TRNAS
SIND
STRUKTURELL
NUR
WENIG
KONSERVIERT
.
12
2.
DIE
BELADUNG
EINER
TRNA
MIT
DER
ZUGEHOERIGEN
AMINOSAEURE
HAENGT
VON
IDENTITAETSELEMENTEN
AB
.
15
3.
MITOCHONDRIALE
RIBOSOMEN
UND
TRANSLATIONSFAKTOREN
ENTSPRECHEN
VERMUTLICH
JENEN
BEI
PROKARYONTEN
.
18
4.
DER
GENETISCHE
CODE
IN
TIERMITOCHONDRIEN
WEICHT
VOM
UNIVERSELLEN
CODE
AB
.
22
V.
RNA-EDITING
VERAENDERT
DIE
SEQUENZ
MITOCHONDRIALER
UND
CYTOPLASMATISCHER
TRANSKRIPTE
.
24
1.
RNA-EDITING
STELLT
FUNKTIONELLE
RNAS
HER
ODER
VERAENDERT
DEREN
FUNKTION
.
25
2.
DIE
UNTERSCHIEDLICHEN
MECHANISMEN
VON
RNA-EDITING
WEISEN
AUF
EINEN
UNABHAENGIGEN
EVOLUTIONAEREN
URSPRUNG
HIN
.
27
MATERIAL
UND
METHODEN
I.
MATERIAL
.
29
1.
FEINCHEMIKALIEN
.
29
2.
PUFFER
.
29
3.
ENZYME
.
29
4.
NUKLEOTIDE
.
29
5.
RADIOCHEMIKALIEN
.
29
6.
OLIGONUKLEOTIDE
.
30
7.
VEKTOREN
.
30
8.
MEDIEN
.
30
9.
SEREN
UND
MEDIEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
.
30
10.
BAKTERIENSTAEMME
.
31
11.
GEWEBE
.
31
II.
METHODEN
.
32
1.
SYNTHESE
VON
DNA
.
32
A)
OLIGONUKLEOTIDE
.
32
B)
PCR-MUTAGENESE
ZUR
KONSTRUKTION
VON
MATRIZEN
FUER
DIE
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
.
32
C)
ELEKTROTRANSFORMATION
VON
E.
COLI.
.
33
2.
ISOLATION
VON
DNA
.
33
A)
PRAEPARATIVE
REINIGUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
.
33
B)
REINIGUNG
VON
82
P-MARKIERTEN
OLIGONUKLEOTIDEN
.
84
C)
REINIGUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
FUER
DIE
KLONIERUNG
BZW.
DIREKTE
SEQUENZIERUNG
.
34
D)
REINIGUNG
VON
PLASMID-DNA.
34
3.
ANALYSE
VON
DNA
.
34
A)
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
.
34
B)
GELELEKTROPHORETISCHE
ANALYSE
.
34
C)
RESTRIKTIONSANALYSE.
35
D)
DNA-SEQUENZIERUNG
.
35
E)
5'
MARKIERUNG
MIT
[Y
32
P]-ATP
.
35
F)
KOLONIE-HYBRIDISIERUNG
.
35
4.
SYNTHESE
VON
RNA
.
35
A)
IN
VITRO-T
RANSKRIPTION
MIT
T7-RNA-POLYMERASE
.
35
5.
ISOLATION
VON
RNA
.
36
A)
GTC-METHODE.
36
B)
ISOLATION
VON
TOTALER
KLEINER
RNA
UNTER
NICHT-DEACYLIERENDEN
BEDINGUNGEN
.
37
C)
ISOLATION
SPEZIFISCHER
MITOCHONDRIALER
TRNAS
AUS
GEWEBE
.
37
6.
ANALYSE
VON
RNA
.
37
A)
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DURCH
UV-SPEKTROSKOPIE
.
37
B)
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
BEI
KLEINEN
MENGEN
.
37
C)
GELELEKTROPHORETISCHE
ANALYSE
.
38
D)
QUANTITATIVE
ANALYSEN
.
38
E)
UV-SHADOWING
.
38
F)
RT-MINISEQUENZIERUNG
.
38
G)
PRIMER-EXTENSION
IN
GEGENWART
EINES
DDNTPS
.
39
H)
RT-PCR
ANSATZ
ZUR
DETEKTION
EINES
3
'
CCA
TERMINUS
.
39
I)
PCP-ENDMARKIERUNG
VON
RNA
.
40
7.
ISOLATION
VON
PROTEINEN
.
40
A)
PRAEPARATION
VON
MITOCHONDRIALEN
PROTEINEXTRAKTEN
.
40
B)
REINIGUNG
VON
T7-RNA-POLYMERASE
.
40
C)
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.
41
8.
ANALYSE
VON
PROTEIN-RNA-INTERAKTIONEN
.
41
A)
IN
VFTRO-AMINOACYLIERUNG.
41
B)
ANALYSE
DER
IN
VFVO-AMINOACYLIERUNG
DURCH
DEN
OXOCIRC-TEST.
42
C)
IN
VRTRO-EDITING-REAKTION
.
44
ERGEBNISSE
I.
DIE
TRNA
AS
P
WIRD
IN
ALLEN
STADIEN
DER
BEUTELTIER-ENTWICKLUNG
ZU
50%
EDITIERT
.
45
II.
SOWOHL
GENOMISCHE
ALS
AUCH
EDITIERTE
TRNA
AS
P
WERDEN
IN
VIVO
PROZESSIERT
.
48
III.
DIE
TRNA
AS
P
MIT
DEM
EDITIERTEN
ANTICODON
GUC
WIRD
MIT
ASPARTAT
BELADEN
.
52
IV.
DIE
TRNA
AS
P
MIT
DEM
NICHT-EDITIERTEN
ANTICODON
GCC
WIRD
MIT
GLYCIN
BELADEN
.
59
V.
DIE
IN
VIVO
SYNTHETISIERTE
TRNA
AS
P
LAESST
SICH
IN
VITRO
MIT
GLYCIN
BELADEN
.
82
VI.
ZWEI
TRNAS
MIT
GLYCIN-IDENTITAET
IN
BEUTELTIER-MITOCHONDRIEN
-
WELCHE
WIRD
IN
VIVO
BELADEN?
.
66
VII.
EIN
IN
VIFRO-SYSTEM
ZUR
EDITIERUNG
VON
TRNA
AS
P
IN
BEUTELTIEREN.
76
DISKUSSION
I.
IDENTITAETSWECHSEL
DURCH
EDITING
-
WIE
KLEIN
IST
KLEIN?
.
82
1.
TRANSFER-RNAS
KOENNEN
DURCH
AUSTAUSCH
WENIGER
NUKLEOTIDE
EINE
ANDERE
IDENTITAET
ANNEHMEN
.
82
2.
DAS
C- U
EDITING
IM
ANTICODON
DER
TRNA*
8
?
FUEHRT
ZU
EINEM
WEITGEHENDEN
IDENTITAETSWECHSEL
.
83
3.
EINE
EINZIGE
FUNKTIONELLE
GRUPPE
ALS
IDENTITAETSSTIFTER
-
WIE
FUNKTIONIERT
DAS?.
87
4.
DIE
BEDEUTUNG
ANDERER
IDENTITAETSELEMENTE
FUER
DIE
BESTIMMUNG
DER
ASPARTAT
BZW.
GLYCIN-IDENTITAET.
89
II.
ZWEI
TRNAS
FUER
DIE
INKORPORATION
VON
GLYCIN
-
LUXUS
ODER
NOTWENDIGKEIT?
.
92
1.
DIE
TEILNAHME
DER
TRNA
-AS
P"(GCC)
AN
DER
TRANSLATION
.
92
2.
EIN
U
AN
POSITION
32
BESCHRAENKT
DIE
ERKENNUNG
VON
GLYCIN-CODONS.
.
93
3.
SZENARIO:
DIE
DECODIERUNG
VON
GLYCIN
UND
ASPARTAT-CODONS
.
99
III.
KORRIGIERENDES
UND
TRANSMUTIERENDES
EDITING
-
ZWEI
FUNKTIONELLE
KONZEPTE
.
101
1.
EINE
TRNA
-
ZWEI
FUNKTIONEN:
EIN
VERGLEICH
MIT
ANDEREN
SYSTEMEN.
.
101
2.
RNA-EDITING
KORRIGIERT
NICHT-FUNKTIONELLE
TRANSKRIPTE
.
102
3.
ZWEI
GENPRODUKTE
AUS
EINEM
GEN
DURCH
TRANSMUTIERENDES
RNA
EDITING
.
104
IV.
DIE
EVOLUTIONAERE
FIXIERUNG
VON
EDITING
IN
BEUTELTIEREN
.
105
1.
DIE
ENTSTEHUNG
VON
RNA-EDITING
IST
RAETSELHAFT.
105
2.
WIE
ES
BEI
BEUTELTIEREN
DAZU
KAM.
106
3.
DIE
ENTSTEHUNG
DES
EDITING-APPARATES
.
109
4.
ANTICODON-EDITING
-
EIN
WEG
ZUR
AENDERUNG
DES
GENETISCHEN
CODES?.
.
111
LITERATUR
.
114 |
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