Regulation samenspezifischer Gene der Ackerbohne Vicia faba: Analyse von cis-Elementen sowie Isolierung und Charakterisierung von Transkriptionsfaktoren
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
DIE
REGULATION
DER
TRANSKRIPTION
IN
EUKARYOTEN
.
1
11.1.
INTERAKTION
VON
CIS-ELEMENTEN
UND
TRANSFAKTOREN
BILDEN
DIE
GRUNDLAGE
DER
REGULATION
DER
TRANSKRIPTION
.
1
1.1.2.
DIE
MODULARE
STRUKTUR
VON
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
.
4
1
2
DIE
REGULATION
DER
GENEXPRESSION
IN
HOEHEREN
PFLANZEN
.
7
1
2
1
EXPRESSIONSPROGRAMME
WAEHREND
DER
SPAETEN
EMBRYOGENESE
.
7
1.2.2.
DIE
REGULATION
DER
TRANSKRIPTION
DER
SAMENSPEICHERPROTEINGENE
.
10
1.3.
ZIELSTELLUNG
DER
ARBEIT
.
18
2.
MATERIAL
.
20
2
1
BAKTERIEN
.
20
2.2.
PFLANZEN
.
20
2.3
GERAETE,
CHEMIKALIEN,
ENZYME
UND
ANTIKOERPER
.
21
2.4.
OLIGONUKLEOTIDE
.
23
2
5.
PLASMIDE
UND
VEKTOREN
.
25
2
6.
MEDIEN
.
25
2.7.
VERWENDETE
AUSWERTEPROGRAMME
.
26
3.
METHODEN
.
27
3.1
KLONIERUNG,
SEQUENZIERUNG
UND
PCR
.
27
3.2.
IN
V/TRO-MUTAGENESE
VON
DNA
.
27
3.3
TRANSIENTE
EXPRESSION
MITTELS
PARTIKELKANONE
UND
ANSCHLIESSENDE
QUANTIFIZIERUNG
DER
REPORTERENZYMAKTIVITAET
.
27
3
4
HERSTELLUNG
VON
PFLANZLICHEN
PROTEINEXTRAKTEN
.
29
3.5
BESTIMMUNG
DER
GLUCURONIDASE-AKTIVITAET
IN
TABAKSAMEN
.
30
3
6.
TRANSFORMATION
VON
AGROBAKTERIUM
TUMEFACIENS
.
30
3.7.
PFLANZENTRANSFORMATION
.
30
3.8
ANZUCHT
DER
PFLANZEN
.
30
3
9
DNA-ANALYSE
(SOUTHERN-BLOT,
PCR)
.
31
3.10
PRAEPARATION
VON
KERNPROTEINEN
.
31
3
11.
PRAEPARATION
UND
MARKIERUNG
DER
DNA-FRAGMENTE
FUER
DIE
EXO
LLL-FOOTPNNT-ANALYSE
.
32
3.12.
EXONUKLEASE
11
\-FOOTPRINTING
.
32
3
13.
RNA-PRAEPARATION
UND-ANALYSE
(NORTHERN-BLOT)
.
33
3
14
ANFERTIGUNG
EINER
XZAP
EXPRESS-EXPRESSIONSGENBANK
.
34
INHALTSVERZEICHNIS
3
15
PRAEPARATION
UND
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DOPPELSTRAENGIGEN
DNA
FRAGMENTEN
FUER
DAS
SOUTHWESTERN-SCREENING
.
34
3.16.
DURCHMUSTERUNG
EINER
EXPRESSIONSGENBANK
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
DNA-FRAGMENTEN
(SOUTHWESTERN-SCREENING)
.
35
3
17
IN
V/VO-EXCISION
VON
PLASMID-DNA
.
36
3
18
VERVOLLSTAENDIGUNG
VON
CDNA-FRAGMENTEN
(5-RACE)
.
36
3.19
EXPRESSION
DES
CDNA-KLONS
I-2
IN
E
COLI
.
36
3.20.
PROTEIN-ANALYSE
(WESTERN-BLOT)
.
37
3.21.
GELRETARDIERUNGSTEST
(EMSA)
.
37
3.22
METHODEN
DER
DNA-SEQUENZAUSWERTUNG
.
38
4.
ERGEBNISSE
.
39
4.1.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
FUNKTION
DES
C/S-ELEMENTES
CATGCATG
IN
DER
5
'
-FLANKIERENDEN
REGION
DES
LEGUMIN
B4
-
UND
DES
USP
GENS
.
39
4.1
1.
HERSTELLUNG
VERSCHIEDENER
MUTATIONEN
DES
CATGCATG-ELEMENTS
IM
LEGUMIN
B4
-UND
IM
USP-PROMOTOR
MITTELS
IN
V/TRO-MUTAGENESE
UND
KONSTRUKTION
DER
PROMOTOR-GUS-KASSETTEN
.
39
4.1.2.
ANALYSE
DES
EINFLUSSES
DER
CATGCATG-MUTATIONEN
IM
LEGUMIN
B4
-UND
IM
USP
PROMOTOR
AUF
DIE
GUS-EXPRESSION
IM
HOMOLOGEN
TRANSIENTEN
SYSTEM
MITTELS
PARTIKELKANONE
.
40
4.1.3.
GENKONSTRUKTIONEN
ZUR
ANALYSE
DES
EINFLUSSES
DES
CATGCATG-MUTATIONEN
IM
LEGUMIN
B4
-UND
IM
USP-PROMOTOR
AUF
DIE
GUS-EXPRESSION
IN
TRANS-
GENEN
PFLANZEN
.
42
4
1
4.
ERZEUGUNG
STABIL
TRANSFORMIERTER
TABAKPFLANZEN
DURCH
AGROBAKTERIUM
TUMEFACIENS
VERMITTELTEN
GENTRANSFER
.
43
4
1
5
ANALYSE
DES
EINFLUSSES
DER
MUTATIONEN
DES
CATGCATG-MOTIVS
IM
LEGUMIN
B4
-UND
IM
USP-PROMOTOR
AUF
DIE
GUS-EXPRESSION
IN
STABIL
TRANS
FORMIERTEN
TABAKPFLANZEN
.
43
4
1.6.
ANALYSE
DES
EINFLUSSES
DER
MUTATIONEN
DES
CATGCATG-MOTIVS
IM
LEGUMIN
B4
-UND
IM
USP-PROMOTOR
AUF
DIE
ENTWICKLUNGSABHAENGIGE
GUS
EXPRESSION
IN
STABIL
TRANSFORMIERTEN
TABAKPFLANZEN
.
44
4.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZU
POTENTIELL
AN
DER
REGULATION
DES
LEGUMIN
B4
-
UND
USP-GENS
BETEILIGTEN
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
MITTELS
DNA-FOOTPR/NT-ANALYSE
.
48
4.2
1
EXO
LLL-FOOTPRINT-ANALYSEN
MIT
DNA-FRAGMENTEN
DES
LEGUMIN
B4-PROMOTORS
UND
KERNPROTEINEXTRAKTEN
AUS
KOTYLEDONEN
VON
VICIA
FABA
.
50
4.2.2.
EXO
LLL-FOOTPRINT-ANALYSEN
MIT
DNA-FRAGMENTEN
DES
USP-PROMOTORS
UND
KERNPROTEINEXTRAKTEN
AUS
KOTYLEDONEN
VON
VICIA
FABA
.
51
INHALTSVERZEICHNIS
4.2
3.
VERGLEICHENDE
EXO
LLL-FOOFPRINL-ANALYSEN
MIT
DEM
LEGUMIN-BOX
ENTHALTENDEN
DNA-FRAGMENT
DES
LEGUMIN
B4-PROMOTORS
UND
KERNPROTEINEXTRAKTEN
AUS
BLAETTERN
UND
KOTYLEDONEN
VON
VICIA
FABA
.
51
4
3.
ISOLIERUNG
VON
POTENTIELL
AN
DER
REGULATION
DES
LEGUMIN
B4
-
UND
USP
GENS
BETEILIGTEN
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
MITTELS
SOUTHWESTEM-SCREENING
.
55
4.3.1
ERSTELLEN
EINER
EXPRESSIONSGENBANK
AUS
VICIA
FEBA-KOTYLEDONEN
MITTLEREN
REIFESTADIUMS
UND
DEREN
CHARAKTERISIERUNG
.
55
4.3.2
DURCHMUSTERUNG
DER
EXPRESSIONSGENBANK
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
DOPPELSTRAENGIGEN
DNA-FRAGMENTEN
DES
LEGUMIN
B4
-
UND
DES
USP
PROMOTORS
(SOUTHWESTEM-SCREENING)
.
56
4.3.3
ISOLIERUNG
DER
IN
DEN
ISOLIERTEN
XZAP-PHAGEN
INTEGRIERTEN
PBK-CMV
PLASMIDE
MITTELS
IN
V/VO-EXCISION
UND
SEQUENZANALYSE
DER
CDNAS
.
59
4.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
ISOLIERTEN
CDNAS
.
59
4.4
1
COMPUTERGESTUETZTE
CHARAKTERISIERUNG
DER
ISOLIERTEN
CDNA-FRAGMENTE
.
59
4.4.2.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
GEWEBESPEZIFISCHEN
UND
ENTWICKLUNGSABHAENGIGEN
EXPRESSION
DER
KORRESPONDIERENDEN
GENE
DER
IM
SOUTHWESTEM-SCREENING
ISOLIERTEN
CDNAS
MITTELS
NORTHEM-BLOT-ANALYSE
.
65
4.4.3 EXPRESSION
DES
POTENTIELLEN
TRANSKNPTIONSFAKTORS
BZIP/L-2
IM
BAKTERIELLEN
SYSTEM
.
67
4
4.4
GELRETARDIERUNGSTEST
MIT
DEM
FUSIONSPROTEIN
TRX/L-2
.
69
5.
DISKUSSION
.
73
5.1.
DAS
CIS-ELEMENT
CATGCATG
.
73
5
2.
POTENTIELL
AN
DER
REGULATION
DES
LEB4
UND
DES
USP-GENS
BETEILIGTE
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
.
78
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
90
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
91
ANHANG |
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| author | Wohlfarth, Thomas |
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| title_full_unstemmed | Regulation samenspezifischer Gene der Ackerbohne Vicia faba Analyse von cis-Elementen sowie Isolierung und Charakterisierung von Transkriptionsfaktoren von Thomas Wohlfarth |
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