Untersuchungen zum RNA-Editing in den Mitochondrien höherer Pflanzen: Aufklärung der biochemischen Reaktion und Etablierung eines in vitro Systems
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
RNA-EDITING
-
DAS
PHAENOMEN
.
1
1.2.
RNA-EDITING
BEI
VIREN
.
3
1.3.
RNA-EDITING
BEI
SAEUGETIEREN
.
4
1.3.1.
APOLIPOPROTEIN
B
(APOB)
EDITING
.
4
1.3.2.
EDITING
DER
GLUR-B
MRNA
.
7
1.4.
RNA-EDITING
BEI
TRYPANOSOMEN
.
8
1.5.
DAS
RNA-EDITING
BEI
PHYSARUM
POLYCEPHALUM
.
9
1.6.
RNA-EDITING
BEI
PFLANZEN
.
10
1.7.
DAS
ZIEL
DER
DOKTORARBEIT
.
14
2.
MATERIAL
.
15
2.1.
CHEMIKALIEN
UND
MATERIALIEN
.
15
2.1.1.
CHEMIKALIEN
UND
RADIOCHEMIKALIEN
.
15
2.1.2.
FILMMATERIALIEN
.
17
2.1.3.
ENZYME
UND
KITS
.
17
2.2.
VERSUCHSPFLANZEN
UND
ORGANISMEN
.
19
2.2.1.
VERSUCHSPFLANZEN
.
19
2.2.2.
BAKTERIENSTAEMME
.
19
2.3.
NUKLEINSAEUREN
UND
PRIMER
.
19
2.3.1.
OLIGONUKLEOTIDE
.
19
2.3.2.
DNAS,
RNAS
UND
LAENGENSTANDARDS
.
20
2.4.
GERAETE
.
20
2.5.
COMPUTERANALYSEN
.
20
3.
METHODEN
.
21
3.1.
STANDARDMETHODEN
.
21
3.1.1.
STANDARDVERFAHREN
FUER
NUKLEINSAEUREN
.
21
3.1.1.1.
PLASMIDISOLIERUNG
.
21
3.1.1.2.
ISOLIERUNG
VON
GESAMTER
UND
MITOCHONDRIALER
RNA
.
21
3.1.1.3.
SUBKLONIERUNG
VON
DNA
FRAGMENTEN
.
22
3.1.1.4.
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
.
22
3.1.1.5.
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
22
3.1.1.6.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
23
3.1.1.7.
MARKIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
.
23
3.1.1.8.
TRANSFER
VON
NUKLEINSAEUREN
.
23
3.1.1.9.
HYBRIDISIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
24
3.1.1.10.
DNA-SEQUENZIERUNG
.
25
3.1.1.11.
"
POLYMERASE-CHAIN
"
-REAKTION
(PCR)
.
25
3.1.1.12.
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
.
26
3.1.2.
AUFTRENNUNG
VON
MONO-NUKLEOTIDEN
MITTELS
TLC
.
26
3.1.3.
"
PRIMER-EXTENSION
"
ANALYSE
.
28
3.2.
STANDARDMETHODEN
DER
PROTEIN-ANALYSE
.
28
3.2.1.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
28
3.2.2.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
PROTEINEN
.
28
3.3.
ISOLIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
.
29
3.4.
IN
ORGANE/ZO
TRANSKRIPTIONS-Z
RNA-EDITING-SYSTEM
.
30
3.5.
IN
VITRO
RNA-EDITING-SYSTEM
.
30
3.6.
"HYBRID-SELECTION
"
VON
MITOCHONDRIALEN
TRANSKRIPTEN
.
31
4.
ERGEBNISSE
.
32
4.1.
ENTWICKLUNG
VON
RNA-EDITING-TESTSYSTEMEN
.
32
4.1.1.
DER
PCR-HYBRIDISIERUNGSTEST
.
32
4.1.2. DER
PRIMER-EXTENSIONTEST
.
32
4.1.3.
DER
"
MOBILITY-SHIFT
"
-TEST
.
34
4.2.
DIE
ENTWICKLUNG
EINES
IN
VITRO
EDITING-SYSTEMS
.
34
4.2.1.
DAS
INTAKTE
SYSTEM
.
34
4.2.2.
DAS
IN
VITRO
SYSTEM
.
39
4.3.
DIE
BIOCHEMIE
DES
RNA-EDITING
.
43
4.4.
LOKALISIERUNG
DER
RNA-EDITING-AKTIVITAET
.
49
4.5.
OPTIMIERUNG
DES
IN
VITRO
SYSTEMS
.
50
4.6.
DIE
EDITING-AKTIVITAET
IST
ZN
2+
-ABHAENGIG
.
53
4.7.
DIE
EDITING-AKTIVITAET
IST
NUKLEASE-SENSITIV
.
55
4.8.
SUCHE
NACH
SPEZIFITAETSFAKTOREN
.
55
5.
DISKUSSION
.
61
5.1.
AUSWAHL
DER
VERSUCHSPFLANZEN
.
61
5.2.
ETABLIERUNG
DES
IN
VITRO
RNA-EDITING-SYSTEMS
.
62
5.3.
LOKALISIERUNG
UND
SEQUENZ-SPEZIFITAET
DES
RNA-EDITING
.
63
5.4.
DER
REAKTIONSMECHANISMUS
DES
RNA-EDITING
.
65
5.5.
ERKENNUNGSMOTIVE
FUER
RNA-EDITING-STELLEN
.
66
5.6.
DIE
OPTIMIERUNG
DES
IN
VITRO
RNA-EDITING-SYSTEMS
.
67
5.7.
DER
URSPRUNG
DES
RNA-EDITING
BEI
PFLANZEN
.
68
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
69
7.
LITERATUR
.
70 |
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