Untersuchungen zur Rolle potentieller Signalmoleküle bei der Aktivierung lokaler Pathogen-Abwehrreaktionen der Kartoffel:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
ZUSAMMENFASSUNG
1
2.
EINLEITUNG
3
2.1
DIE
PFLANZLICHE
PATHOGENABWEHR
4
2.2
ERKENNUNG
DES
PATHOGENS
UND
SIGNALTRANSDUKTION
7
2.3
GENETISCHE
GRUNDLAGEN
DER
KULTIVAR/RASSE-SPEZIFISCHEN
RESISTENZ
10
2.4
DAS
PATHOSYSTEM
KARTOFFEIL
PHYTOPHTHORA
INFESTANS
13
2.6
DIE
PATHOGEN-ABWEHRREAKTION
DER
KARTOFFEL
14
2.7
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
18
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
20
3.1
MATERIAL
20
3.1.1
CHEMIKALIEN,
ENZYME,
RADIOISOTOPE
20
3.1.2
MEDIEN,
LOESUNGEN
UND
PUFFER
21
3.1.2.1
MEDIEN
UND
PLATTEN
21
3.1.2.2
LOESUNGEN
UND
PUFFER
22
3.1.3
BAKTERIENSTAEMME
26
3.1.4
PLASMIDE
26
3.1.5
ANTIKOERPER
UND
PHYTOHORMON-AP-KONJUGATE
FUER
DIE
IMMUNOLOGISCHE
BESTIMMUNG
VON
PHYTOHORMON-KONZENTRATIONEN
26
3.1.6
TRANSGENE
KARTOFFELLINIEN
27
3.2
METHODEN
28
3.2.1
ANZUCHT
DER
KARTOFFELPFLANZEN
28
3.2.2
ANZUCHT
VON
PHYTOPHTHORA
INFESTANS
UND
GEWINNUNG
VON
ZOOSPOREN
28
3.2.3
INOKULATION
VON
KARTOFFELBLAETTEM
MIT
PHYTOPHTHORA
INFESTANS
ZOOSPOREN
29
3.2.4
INOKULATION
VON
BLATTSCHEIBEN
MIT
PHYTOPHTHORA
INFESTANS
ZOOSPOREN
29
3.2.4.1
QUANTIFIZIERUNG
DES
INFEKTIONSVERLAUFES
(BONITUR)
30
3.2.5
BEHANDLUNG
VON
KARTOFFELBLAETTEM
MIT
POTENTIELLEN
SIGNALMOLEKUELEN
30
3.2.5.1
EINSTELLVERSUCHE
MIT
ABGESCHNITTENEN
BLAETTERN
'
30
3.2.5.2
JASMONATBEHANDLUNG
30
3.2.6
BEHANDLUNG
VON
BLATTSCHEIBEN
MIT
POTENTIELLEN
SIGNALMOLEKUELEN
32
3.2.7
BEHANDLUNG
VON
KARTOFFEL-ZELLSUSPENSIONSKULTUREN
MIT
POTENTIELLEN
SIGNALMOLEKUELEN
UND
PILZ-KULTURFILTRAT-ELICITOR
32
3.2.8
ISOLIERUNG
VON
DNA
33
3.2.8.1
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
33
3.2.8.2
SCHNELLPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
33
3.2.8.3
EXTRAKTION
VON
GESAMT-DNA
AUS
KARTOFFELBLAETTEM
33
3.2.8.4
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
34
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.9
PHOTOMETRISCHE
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
34
3.2.10
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
34
3.2.11
ENZYMATISCHE
MODIFIKATION
VON
DNA
34
3.2.12
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
BAKTERIEN-ZELLEN
34
3.2.13
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN-ZELLEN
33
3.2.14
PRAEPARATION
VON
GESAMT-RNA
AUS
BLAETTERN
UND
ZELLKULTUREN
35
3.2.15
RNA-FILTERHYBRIDISIERUNG
35
3.2.15.1
TRANSFER
UND
FIXIERUNG
VON
RNA
AUF
NYLONMEMBRANEN
36
3.2.15.2
NICHT
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
P/PF-F-ANTISENSE-RNA-SONDEN
36
3.2.15.3
PRAEHYBRIDISIERUNGS-,
HYBRIDISIERUNGS
UND
WASCHSCHRITTE
37
3.2.15.4
CHEMILUMINESZENZ-NACHWEIS
37
3.2.16
EXTRAKTION
VON
PHYTOHORMONEN
AUS
KARTOFFELBLAETTEM
38
3.2.16.1
GEWINNUNG
DER
FRAKTION
FUER
DIE
CYTOKININ-BESTUNMUNG
38
3.2.16.2
GEWINNUNG
DER
FRAKTION
FUER
DIE
ABA-BESTIMMUNG
39
3.2.16.3
BEHANDLUNG
DER
FRAKTION
FUER
DIE
IAA-BESTIMMUNG
39
3.2.16.4
BESTIMMUNG
DER
WIEDERFINDUNGSRATE
40
3.2.17
PHYTOHORMON-ELISA-TESTS
40
3.2.17.1
VORBEHANDLUNG
DER
MIKROTITERPLATTEN
40
3.2.17.2
DURCHFUEHRUNG
DER
EUSA-TEATA
41
3.2.17.3
AUSWERTUNG
DER
ELISA-TESTS
42
3.2.18
FLUORIMETRISCHE
BESTIMMUNG
VON
GUS-ENZYMAKTIVITAET
43
3.2.18.1
PROTEINEXTRAKTION
43
3.2.18.2
MESSUNG
VON
GUS-ENZYMAKTIVITAET
44
3.2.19
HISTOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
GUS-ENZYMAKTIVITAET
IN
WURZELN
44
3.2.20
DNASE-I-FOOTPRINT-EXPERIMENTE
45
3.2.20.1
EXTRAKTION
VON
KERNPROTEINEN
45
3.2.20.2
RADIOAKTIVE
ENDMARKIERUNG
EINES
PRPL-1
-PROMOTORFRAGMENTES
45
3.2.20.3
DNASE-I-ABBAUREAKTION
47
3.2.20.4
DNA-SEQUENZIERUNG
47
4.
ERGEBNISSE
48
4.1
STIMULIERUNG
VON
PATHOGEN-ABWEHRREAKTIONEN
DURCH
POTENTIELLE
SIGNALMOLEKUELE
48
4.2
MESSUNG
DER
KONZENTRATIONEN
POTENTIELLER
SIGNALMOLEKUELE
IN
KARTOFFELBLAETTEM
51
4.2.1
MESSUNG
VON
PHYTOHORMONKONZENTRATIONEN
IN
NICHT-INFIZIERTEN
KARTOFFELBLAETTEM
52
4.2.2
MESSUNG
VON
PHYTOHORMONKONZENTRATIONEN
IN
INFIZIERTEN
KARTOFFELBLAETTEM
54
INHALTSVERZEICHNIS
4.3
DETAILLIERTE
UNTERSUCHUNG
DER
WIRKUNG
VON
AUXINEN
AUF
DIE
AKKUMULATION
VON
PRPL-MRNA
61
4.4
INFEKTIONSVERLAUF
IN
TRANSGENEN
KARTOFFELPFLANZEN
MIT
VERAENDERTEM
IAA-METABOLISMUS
66
4.5
SUCHE
NACH
CUE-AKTIVEN
ELEMENTEN
FUER
DIE
STIMULIERBARKEIT
DER
PRP/-7-EXPRESSION
DURCH
POTENTIELLE
SIGNALMOLEKUELE
69
4.5.1
UNTERSUCHUNG
DES
PRP
1-1
-PROMOTORS
IN
VIVO
70
4.5.1.1
REAKTION
DES
PRPL
-T-PROMOTORS
AUF
DIE
BEHANDLUNG
MIT
POTENTIELLEN
SIGNALMOLEKFILEN
70
4.5.1.2
FEINKARTIERUNG
VON
CTR-REGULATORISCHEN
ELEMENTEN
INNERHALB
DES
PRPL-L-PMMOTON
77
4.5.2
UNTERSUCHUNG
DES
PRPL
-1
-PROMOTORS
IN
VITRO
82
4.5.2.1
DNASE-I-FOOTPRINT-EXPERI
MENTE
82
5.
DISKUSSION
94
5.1
GIBBERELLIN
GA
3
UND
JASMONATE
96
5.2
ABSCISINSAEURE
UND
CYTOKININE
97
5.3
AUXINE
100
5.4
SALIZYLAT
105
5.5
ANDERE
POTENTIELLE
SIGNALMOLEKUELE
107
5.6
CHARAKTERISTIKA
VON
PROTEIN-BINDUNGSSTELLEN
IM
PROMOTOR
DES
PRPL-L-GENS
109
5.6.1
"FOOTPRINT"
A
110
5.6.2
"FOOTPRINT"
B
111
5.7
AUSBLICK
115
6.
LITERATUR
117
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
134
ANHANG
137 |
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