Zellbiologische Analysen zur Regulation der Zytokinproduktion in Mastzellen aus murinem Knochenmark:
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
SEITE
1
2.
LITERATURUEBERSICHT
2
2.1.
MASTZELLEN:
GESCHICHTE-VERTEILUNG-VORKOMMEN-FUNKTION
2
2.2.
AKTIVIERUNG
VON
MASTZELLEN
4
2.3.
MASTZELLHETEROGENITAET
6
2.4.
ZYTOKINE
9
2.4.1.
ZYTOKINE,
DIE
PROLIFERATIV
UND/ODER
DIFFERENZIEREND
AUF
MASTZELLEN
WIRKEN
11
2.4.1.1.
INTERLEUKIN
3
(IL-3)
11
2.4.1.2.
INTERLEUKIN
4
(IL-4)
12
2.4.1.3.
INTERLEUKIN
9
(IL-9)
13
2.4.1.4.
INTERLEUKIN
10
(IL-10)
14
2.4.1.5.
KIT
LIGAND
(KL)
14
2
4.2.
ZYTOKINE,
DIE
VON
MASTZELLEN
PRODUZIERT
WERDEN
KOENNEN
16
2.5.
FUNTIONELLE
TH1/TH2-DICHOTOMIE
18
2.6.
GENETISCHE
PRAEDISPOSITION
BESTIMMTER
MAUSSTAEMME
21
2.7.
FRAGESTELLUNG
22
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
24
3.1.
TIERE
UND
TIERHALTUNG
24
3.2.
GEWINNUNG
UND
KULTIVIERUNG
PRIMAERER
VOM
KNOCHENMARK
STAMMENDER
POLYKLONALER
MASTZELLEN
(BONE
MARROW-DERIVED
MAST
CELLS
=
BMMC)
24
3.2.1.
ISOLIERUNG
VON
KNOCHENMARKZELLEN
24
3.2.2.
ZELLZAEHLUNG
25
3.2.3.
SELEKTION
UND
KULTUR
VON
MASTZELLEN
25
3.2.4.
ZYTOZENTRIFUGENPRAEPARATE
26
3.2.4.1.
MAY-GRUENWALD-GIEMSA-FAERBUNG
(PAPPENHEIM-FAERBUNG)
26
3.2.4.2.
TOLUIDINBLAU-FAERBUNG
27
32.4.3.
ALCIANBLAU-SAFRANIN-FAERBUNG
27
3.2.4.4.
KOMBINIERTE
DARSTELLUNG
VON
CHYMASE
UND
TRYPTASE
27
3.3.
GEWINNUNG
VON
MASTZELLKLONEN
29
3.3.1.
LIMITING
DILUTION-ANALYSE
(ENDPUNKTVERDUENNUNG)
29
3.3.2.
KULTURBEDINGUNGEN
30
3.4.
INDUKTIONSEXPERIMENTE
31
3.5.
ZYTOKINDETEKTION
32
3.5.1.
MTT-TEST
32
3.5.2.
INDIKATORZELLINIEN
33
3.5.2.1.
7TD1
(IL-6
BIOASSAY)
33
3.5.2.2
32D
CL.23
(IL-3
BIOASSAY)
34
3.5.2.3.
TS1.C3
(IL-4
UND
IL-9
BIOASSAY)
34
3
5
2.4.
CTLL-2
(IL-2
BIOASSAY)
34
3.5.3.
ELISA
35
3.5.3.1.
IL-2
35
3
5.3.2.
IL-4
UND
IFN-Y
35
3.5.4.
NORTHERN-BLOT
35
3.5.4.1.
RNA-PRAEPARATION
35
35.4.2.
RNA-GELELEKTROPHORESE
35
3.5.4.3.
NORTHERN
BLOTTING
36
3.5.4.4.
HYBRIDISIERUNG
36
3.5.5.
RT-PCR
38
3.5.5.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
38
3.5.5
2.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
MIT
VORAUSGEHENDER
REVERSER
TRANSKRIPTION
38
3.5.5.3.
DNA-GELELEKTROPHORESE
39
3
5.5.4.
SEMIQUANTIFIZIERUNG
39
3.6.
VERWENDETE
SUBSTANZEN
UND
MATERIALIEN
40
3.6.1.
ZYTOKINE
40
3.6.2
CHEMIKALIEN,
LOESUNGEN
UND
ANDERE
MATERIALIEN/GERAETE
41
3.7.
STATISTIK
42
4.
ERGEBNISSE
43
4.1.
ZYTOKINSEKRETION
VON
MURINEN
MASTZELLKLONEN
43
4.1.1.
ETABLIERUNG
VON
MASTZELLKLONEN
AUS
MURINEN
KNOCHENMARKPROGENITOREN
VON
BALB/C-MAEUSEN
43
4.1.2.
INDUZIERBARE
ZYTOKINPRODUKTION
VON
MURINEN
MASTZELLKLONEN
46
4.2.
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
MURINER
POLYKLONALER
BMMC
50
4.2.1.
EINFLUSS
DER
VERSCHIEDENEN
ZYTOKINE
AUF
DIE
ANFAERBBARKEIT
VON
BMMC
MIT
ALCIANBLAU/SAFRANIN
50
4.2.2.
EINFLUSS
DER
VERSCHIEDENEN
ZYTOKINE
AUF
DIE
NACHWEISBARKEIT
DER
NEUTRALEN
MASTZELLPROTEASEN
TRYPTASE
UND
CHYMASE
54
4.3.
ZYTOKINEXPRESSION
VON
MURINEN
POLYKLONALEN
MASTZELLEN
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DEN
ANZUCHTBEDINGUNGEN
57
4
3.1.
INDUZIERBARE
ZYTOKINPRODUKTION
DER
PHAENOTYPISCH
CHARAKTERISIERTEN
BMMC
VOM
MMC
BZW.
CTMC-TYP
57
4.3.2.
INDUZIERBARE
ZYTOKINPRODUKTION
DES
"KLASSISCHEN"
TH1
ZYTOKINS
IFN-Y
IN
MURINEN
KULTURMASTZELLEN
65
4.3.3.
INDUZIERBARE
ZYTOKINPRODUKTION
IN
BMMC
VON
GENETISCH
PRAEDISPONIERTEN
MAUSSTAEMMEN
71
5.
DISKUSSION
74
5.1.
ZYTOKINEXPRESSION
VON
MURINEN
MASTZELLKLONEN
74
5
2.
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
MURINEN
POLYKLONALEN
MASTZELLEN
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DEN
ANZUCHTBEDINGUNGEN
75
5.3.
UNTERSCHIEDLICHE
ZYTOKINEXPRESSION
VON
MURINEN
POLYKLONALEN
MASTZELLEN
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DEN
ANZUCHTBEDINGUNGEN
77
5.3.1.
EXPRESSION
VON
IL-2,
IL-3,
IL-6
UND
IL-9
77
5.3.2.
EXPRESSION
VON
IFN-Y
79
5.3.3.
VERGLEICH
DER
ZYTOKINEXPRESSION
VON
MASTZELLEN
UNTERSCHIEDLICHER
MAUSSTAEMME
82
5
4.
ABSCHLUSSBETRACHTUNG
83
6.
ZUSAMMENFASSUNG
84
7.
SUMMARY
86
8.
LITERATURVERZEICHNIS
88 |
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