Thioredoxine in Zellsuspensionskulturen der Sojabohne (Glycine max) und der Karotte (Daucus carota):
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1996
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INHAL
TSVERZEICHN
IS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
BESONDERHEITEN
PFLANZLICHER
ZELLKULTUREN
UND
IHRE
VERWENDUNG
IN
DER
BIOCHEMISCHEN
FORSCHUNG
1
1.2.
THIOREDOXINE
-
VORKOMMEN
UND
ALLGEMEINE
EIGENSCHAFTEN
3
1.3.
STRUKTUR
DER
THIOREDOXINE
6
1.4.
THIOREDOXIN-REDUKTION
IM
ORGANISMUS
10
1.5.
FUNKTIONEN
DER
THIOREDOXINE
11
1.5.1.
ALLGEMEINE
FUNKTIONSWEISEN
11
1.5.2.
THIOREDOXINE
IM
STOFFWECHSEL
HOEHERER
PFLANZEN
16
1.6.
ZIELSETZUNG
DIESER
ARBEIT
23
2.
EXPERIMENTELLER
TEIL
25
2.1.
CHEMIKALIEN,
REAGENTIEN,
GERAETE
UND
ALLGEMEINE
METHODEN
25
2.2.
PFLANZENZELLMATERIAL
UND
KULTURBEDINGUNGEN
27
2.2.1.
ZELLKULTUREN
DER
SOJABOHNE
GLYCINE
MAX
27
2.2.1.1.
ANZUCHT
VON
SOJACALLUSGEWEBE
27
2.2.1.2.
ANLEGEN
EINER
HETEROTROPHEN
SOJASUSPENSIONSKULTUR
28
2.2.1.3.
ANLEGEN
EINER
PHOTOMIXOTROPEN
SOJASUSPENSIONSKULTUR
28
2.2.2.
ZELLSUSPENSIONSKULTUREN
DER
KAROTTE
DANCIIS
CAROTA
29
2.2.3.
NAEHRMEDIEN
29
2.2.4.
CHARAKTERISIERUNG
DES
WACHSTUMS
DER
ZELLSUSPENSIONEN
32
2.2.4.1.
BESTIMMUNG
VON
FRISCH- UND
TROCKENGEWICHT
32
2.2.4.2.
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTS
DER
ZELLEN
IM
WACHSTUMSVERLAUF
33
2.2.4.3.
BESTIMMUNG
DES
CHLOROPHYLLGEHALTS
33
2.3.
ELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
34
2.3.1.
SDS-POLYACRYIAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
34
2.3.2.
FAERBEMETHODEN
36
2
4.
ENZYMATISCHE
BESTIMMUNGSMETHODEN
36
2.4.1.
DETEKTION
VON
THIOREDOXIN
IM
NADP-MDH-STANDARDASSAY
36
2.4.2.
REDUKTION
VON
DTNB
ZUR
BESTIMMUNG
DER
THIOREDOXINREDUKTASE
38
2.4.3.
REDUKTION
VON
INSULIN
DURCH
DAS
THIOREDOXIN-SYSTEM
38
2.4.4.
NACHWEIS
DER
RIBONUCLEOTIDREDUKTASE
39
2.4.5.
ORGANELLEN-MARKERENZYME
41
2.4.5.1.
CYTOCHROM
C-OXIDASE
41
2.4.5.2.
FUMARASE
42
2.4.5.3.
BESTIMMUNG
DER
INTAKTHEIT
VON
CHLOROPLASTEN
43
2.4.5.4.
KATALASE
44
2.4.5.5.
SAURE
PHOSPHATASE
45
2.4.5.6.
ENZYMATISCHE
IDENTIFIZIERUNG
VON
PLASTIDEN
(PROPLASTIDEN
UND
46
LEUKOPLASTEN
HETEROTROPHER
GEWEBE)
INHALTSVERZEICHNIS
2.5.
PRAEPARATIVER
TEIL
50
2.5.1.
ISOLATION
UND
REINIGUNG
VON
THIOREDOXINEN
AUS
ZELLKULTUREN
VON
GLYCINE
MAX
UND
DAUCUS
CAROTA
50
2.5.11.
AUFSCHLUSS
UND
FAELLUNGEN
50
2.5.1.2.
CHROMATOGRAPHISCHE
REINIGUNG
51
2.5.2.
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG:
MITOCHONDRIEN,
PLASTIDEN
UND
CYTOSOLISCHE
FRAKTION
AUS
PFLANZLICHEN
ZELLSUSPENSIONEN
53
2.5.3.
PRAEPARATION
VON
CHLOROPLASTEN
AUS
PHOTOMIXOTROPHEN
SOJA
SUSPENSIONSKULTUREN
55
2.5.4.
THIOREDOXINE
IN
SUBZELLULAEREN
FRAKTIONEN
HETEROTROPHER
UND
PHOTOMIXOTROPHER
ZELLSUSPENSIONSKULTUREN
56
2.5.4.1.
PRAEPARATION
VON
THIOREDOXIN
DER
CYTOSOLISCHEN
FRAKTION
56
2.5.4.2.
PRAEPARATION
VON
THIOREDOXINEN
DER
MITOCHONDRIALEN
UND
PLASTIDAEREN
FRAKTION
58
2.5.5.
PRAEPARATION
VON
THIOREDOXINREDUKTASE
AUS
SOJASUSPENSIONS
KULTUREN
58
2.5.6.
VERSUCH
ZUR
PRAEPARATION
DER
RIBONUCLEOTIDREDUKTASE
AUS
SOJA
SUSPENSIONSKULTUREN
59
2.5.7.
ISOLIERUNG
DER
NADP-MALATDEHYDROGENASE
AUS
SPINAT
60
2.6.
ELISA
(ENZYME
LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY)
61
3.
ERGEBNISSE
63
3.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZELLSUSPENSIONEN
VON
GLYCINE
MAX
UND
DMICIIS
CAROTA
63
3.1.1.
HETEROTROPHE
UND
PHOTOMIXOTROPHE
ZELLSUSPENSIONEN
VON
GLYCINE
MAX
63
3.1.2.
PHOTOMIXOTROPHE
UND
HETEROTROPHE
ZELLSUSPENSIONEN
VON
DAUCUS
CAROTA
66
3.2.
THIOREDOXINE
IN
SUSPENSIONSKULTUREN
VON
GLYCINE
MAX
69
3.2.1.
PRAEPARATION
VON
THIOREDOXINEN
AUS
DEM
GESAMTZELLEXTRAKT
HETEROTROPHER
SOJAZELLEN
69
3.2.2.
VERGLEICH
DES
THIOREDOXINPROFILS
HETEROTROPHER
UND
PHOTO
MIXOTROPHER
SOJAZELLEN
78
3.2.3.
PRAEPARATION
VON
THIOREDOXINEN
DER
MITOCHONDRIALEN,
PLASTIDAEREN
UND
CYTOSOLISCHEN
FRAKTION
HETEROTROPHER
SOJAZELLEN
79
3.2.3.
1.
NACHWEIS
UND
ISOLATION
VON
THIOREDOXIN
AUS
MITOCHONDRIEN
82
3.2.3.2.
NACHWEIS
UND
ISOLATION
VON
THIOREDOXINEN
AUS
PLASTIDEN
84
3.2.3.3.
NACHWEIS
UND
ISOLATION
VON
THIOREDOXINEN
DER
CYTOSOLISCHEN
FRAKTION
86
3.2.4.
NACHWEIS
UND
ISOLATION
VON
THIOREDOXIN
AUS
DEN
CHLOROPLASTEN
PHOTOMIXOTROPHER
SB-PH-ZELLEN
89
3.3
NACHWEIS
UND
ISOLATION
VON
THIOREDOXINREDUKTASE
AUS
HETERO
TROPHEN
SOJAZELLEN
92
3.4.
VERSUCH
ZUM
NACHWEIS
VON
RIBONUCLEOTIDREDUKTASE-AKTIVITAET
IN
SB-H-ZELLEN
95
3.5.
IMMUNOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
THIOREDOXIN-SYSTEMS
AUS
SOJAZELLSUSPENSIONSKULTUREN
96
INHALTSVERZEICHNIS
3.6.
THIOREDOXINE
IN
SUSPENSIONSKULTUREN
VON
DAUCUS
CAROTA
3.6.1.
PRAEPARATION
DER
THIOREDOXINE
AUS
DEM
GESAMTZELLEXTRAKT
PHOTO
MIXOTROPHER
UND
HETEROTROPHER
KAROTTENZELLSUSPENSIONEN
3.6.2.
PRAEPARATION
VON
THIOREDOXINEN
DER
MITOCHONDRIALEN,
PLASTIDAEREN
UND
CYTOSOLISCHEN
FRAKTION
PHOTOMIXOTROPHER
KAROTTENZELLEN
3.6.2.1.
NACHWEIS
UND ISOLATION
VON
THIOREDOXIN
AUS
MITOCHONDRIEN
3.6.2.2.
NACHWEIS
UND
ISOLATION
VON
THIOREDOXIN
AUS
PLASTIDEN
3.6.2.3.
NACHWEIS
UND
ISOLATION
VON
THIOREDOXIN
DER
CYTOSOLISCHEN
FRAKTION
3.6.2.4.
IMMUNOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
THIOREDOXINE
AUS
ZELL
SUSPENSIONEN
VON
DAUCUS
CAROTA
4.
DISKUSSION
4.1.
ANZAHL
UND
VORKOMMEN
DER
THIOREDOXINE
IN
SUSPENSIONSKULTUREN
VON
GLYCINE
MAX
4.2.
THIOREDOXINE
IN
HETEROTROPHEN
UND
PHOTOMIXOTROPHEN
SUSPEN
SIONSKULTUREN
4.3.
THIOREDOXIN-UMSETZENDE
ENZYME
AUS
HETEROTROPHEN
SOJAZELLEN
4.4.
IMMUNOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
THIOREDOXINE
AUS
SOJA
ZELLKULTUREN
4.5.
DAS
THIOREDOXINPROFIL
PHOTOMIXOTROPHER
UND
HETEROTROPHER
ZELL
SUSPENSIONEN
VON
DAUCUS
CAROTA
5.
ZUSAMMENFASSUNG
6.
LITERATURVERZEICHNIS
98
98
103
105
106
108
110
111
111
115
117
118
120
122
123
LISTE
DER
ABKUERZUNGEN
133 |
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