Zwei Aspekte zur Struktur und Funktion von Arthropodenhämocyaninen: die Rolle bei der Anpassung an unterschiedliche Temperaturen beim Sumpfkrebs Astacus leptodactylus und das Bindungsverhalten gegenüber Ecdysteroiden beim Hämocyanin der Vogelspinne Eurypelma californicum
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
6
2.1.
CHEMIKALIEN
.
6
2.2.
PUFFER
.
7
2.3.
DIALYSEN
.
7
2.4.
TIERE
UND
HAELTERUNG
.
7
2.5.
PRAEPARATION
DER
HAEMOCYANINE
.
8
2.6.
SAEULENGELCHROMATOGRAPHIE
.
8
2.7.
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
9
2.8.
ZWEIDIMENSIONALE
IMMUNGELELEKTROPHORESE
.
9
2.9.
ABSORPTIONSSPEKTROSKOPIE
.
10
2.10.
DIFFERENZSPEKTROSKOPIE
.
10
2.11.
FLUORESZENZSPEKTROSKOPIE
.
11
2.12.
SAUERSTOFFBINDUNGSKURVEN
.
11
2.13.
PCO2
UND
PH-WERT
IN
DER
HAEMOLYMPHE
.
14
2.14.
SAUERSTOFFVERBRAUCHSMESSUNGEN
.
15
2.15.
LAKTATBESTIMMUNG
.
17
3.
ERGEBNISSE
.
19
3.1.
AKKLIMIERUNG
VON
ASTACUS
LEPTODACTYLUS
AN
UNTERSCHIEDLICHE
TEMPERATUREN
.
19
3.1.1.
REINIGUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
HAEMOCYANINE
AUS
TIEREN,
DIE
AN
UNTERSCHIEDLICHE
TEMPERATUREN
AKKLIMIERT
WURDEN
.
19
3.1.2.
ELEKTROPHORETISCHE
CHARAKTERISIERUNG
.
22
3.1.3.
IMMUNGELELEKTROPHORESE
.
23
3.1.4.
ANDERE
HAEMOLYMPHPROTEINE
.
24
3.1.5.
EINFLUSS
DER
AKKLIMATIONSTEMPERATUR
AUF
DEN
AGGREGATIONSZUSTAND
DES
HAEMOCYANINS
.
25
3.1.6.
SAUERSTOFFBINDUNGSKURVEN
VON
GEREINIGTEM
HAEMOCYANIN
.
28
3.1.7.
SAUERSTOFFBINDUNGSKURVEN
VON
UNVERDUENNTER
HAEMOLYMPHE
.
33
3.1.8.
SAUERSTOFFBINDUNGSKURVEN
UNTER
PHYSIOLOGISCHEN
BEDINGUNGEN
.
35
3.1.9.
BEZIEHUNG
ZWISCHEN
PH-WERT
UND
CCH-PARTIALDRUCK
IN
DER
HAEMOLYMPHE
VON
ASTACUS
LEPTODACTYLUS
.
38
3.1.10.
SAUERSTOFFVERBRAUCHSMESSUNGEN
.
39
3.1.11.
LAKTATBESTIMMUNG
.
42
3.2.
BINDUNG
VON
ECDYSTEROIDEN
DURCH
ARTHROPODENHAEMOCYANINE
.
43
3.2.1.
NACHWEIS
DER
BINDUNG
DURCH
FLUORESZENZQUENCHUNG
.
43
3.2.2.
BINDUNG
VON
ECDYSON
DURCH
TRIS
.
47
4.
DISKUSSION
4.1.
AKKLIMATION
VON
ASTACUS
LEPTODACTYLUS
AN
UNTERSCHIEDLICHE
TEMPERATUREN
.
50
4.1.1.
EINFLUSS
DER
AKKLIMATION
AN
UNTERSCHIEDLICHE
TEMPERATUREN
AUF
DEN
AGGREGATIONSZUSTAND
DES
HAEMOCYANINS
.
50
4.1.2.
SAUERSTOFFBINDUNGSEIGENSCHAFTEN
DER
VERSCHIEDENEN
TYPEN
VON
GEREINIGTEM
HAEMOCYANIN
.
53
4.1.3.
SAUERSTOFFBINDUNG
IN
DER
HAEMOLYMPHE
VON
WARM
BZW.
KALTAKKLIMIERTEN
TIEREN
.
54
4.1.4.
PHYSIOLOGISCHE
BEDEUTUNG
DER
SAUERSTOFFBINDUNGSEIGENSCHAFTEN
DER
HAEMOLYMPHE
VON
KALT
UND
WARMAKKLIMIERTEN
TIEREN
.
57
4.1.5.
SAUERSTOFFTRANSPORT
IN
DER
KAELTE
UND
IN
DER
WAERME
.
61
4.1.6.
CO
2
-PARTIALDRUCK
IN
DER
HAEMOLYMPHE
.
67
4.1.7.
LAKTATGEHALT
IN
DER
HAEMOLYMPHE
.
68
4.2.
BINDUNG
VON
ECDYSTEROIDEN
DURCH
ARTHROPODENHAEMOCYANINE
.
70
4.2.1.
ZUR
BINDUNG
VON
ECDYSON
.
70
4.2.2.
BINDUNG
VON
ECDYSON
AN
TRIS
.
73
4.2.3.
HYPOTHETISCHE
ECDYSTEROID-BINDUNGSSTELLE
VON
HAEMOCYANINEN
.
75
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
81
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
83 |
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