Die assimilatorische Nitratreduktase in der Symbiose zwischen dem arbuskulären Mykorrhizapilz Glomus und Mais:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Köln, Univ., Diss., 1996 |
| Beschreibung: | 116 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
1
1.1
MYKORRHIZA
1
12
NITRAT-ASSIMILATION
4
1
3
EXPERIMENTELLER
ANSATZ
ZUR
UNTERSUCHUNG
DER
NITRATASSIMILATION
BEI
6
AM-PILZEN
UND
MYKORRHIZIERTEN
PFLANZEN
1.4
DIE
ROLLE
VON
PHYTOHORMONEN
BEI
DER
ARBUSKULAEREN
MYKORRHIZA
7
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
9
2.1
VERSUCHSOBJEKTE
9
2.1.1
ORGANISMEN
9
2.1.2
REINKULTUREN
DER
SAPROPHYTISCHEN
UND
PHYTOPATHOGENEN
PILZE
9
2
1.21
KULTUR
DER
PILZE
AUF
FESTEN
KULTURMEDIEN
9
2.1
2
2
KULTUR
DER
PILZE
IN
FLUESSIGEN
KULTURMEDIEN
10
2.1
3
STERILE
ANZUCHT
VON
MAISKEIMLINGEN
10
2
1.4
KULTUR
VON
ARBUSKULAEREN
MYKORRHIZA-PILZEN
10
2
1.4.1
INOKULUMPRODUKTION
10
2
1.4.2
BEIMPFEN
DER
VERSUCHSPFLANZEN
MIT
ARBUSKULAEREN
MYKORRHIZAPILZEN
10
2.
1
4
3
HALTUNG
UND
DUENGUNG
DER
PFLANZEN
11
2.15
BESTIMMUNG
DES
MYKORRHIZIERUNGSGRADES
12
215.1
FAERBUNG
DER
WURZELN
MIT
LACTOPHENOLBLAU
12
2
15.2
MIKROSKOPISCHE
BONITIERUNG
DER
GEFAERBTEN
WURZELN
12
2
1.6
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
AM-SPOREN
13
2.2
ISOLIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
14
2.2
1
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
14
2
2.1.1
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
NACH
RAEDER
UND
BRODA
14
2.2
1
2
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
MIT
CTAB
NACH
DOYLE
UND
DOYLE
15
2.2.2
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
15
2.2
3
ISOLIERUNG
VON
PLASMIDEN
AUS
TRANSFORMIERTEN
KULTUREN
VON
16
ESCHERICHIA
COLI
2.2.4
ISOLIERUNG
VON
EINZELSTRANG-DNA
DES
BAKTERIOPHAGEN
ML
3
17
2
2.5
ABSCHAETZUNG
DER
REINHEIT
UND
KONZENTRATION
VON
NUKLEINSAEUREN
18
2.3
AMPLIFLZIERUNG
VON
DNA-SEGMENTEN
DURCH
POLYMERASE
CHAIN
19
REACTION
(PCR)
2.3.1
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
19
2.3.1.1
AUSWAHL
GEEIGNETER
SEQUENZBEREICHE
19
2
3.12
SYNTHESE
UND
REINIGUNG
DER
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
19
2.3
2
POLYMERASE
CHAIN
REACTION
(PCR)
20
2.3.2.1
PCR-ANSAETZE
20
2.3.2.2
BEDINGUNGEN
FUER
DIE
PCR
21
2.3
2.3
ANALYSE
DER
PCR-PRODUKTE
21
2.4
KLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
VON
PCR-SEGMENTEN
22
2.4.1
KLONIERUNG
VON
PCR-SEGMENTEN
22
2.4.1
1
ANSAETZE
ZUR
LIGATION
VON
PCR-SEGMENTEN
IN
DEN
PLASMIDVEKTOR
PCRYYII
22
2.4.1.2
HERSTELLUNG
UND
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIENZELLEN
23
2.4.1.3
SELEKTION
DER
ERFOLGREICH
TRANSFORMIERTEN
KLONE
23
2.4.2
UMKLONIERUNG
DER
PCR-SEGMENTE
IN
DEN
BAKTERIOPHAGEN
M13
24
2.4.2.1
AUSSCHNEIDEN
DER
KLONIERTEN
DNA-SEGMENTE
MIT
RESTRIKTIONS
ENDONUKLEASEN
24
2.4.2.2
VERMEHRUNG,
IDENTIFIZIERUNG
UND
ISOLIERUNG
TANSGENER
BAKTERIOPHAGEN
25
2.4.3
SEQUENZIERUNG
VON
ML
3
MPL8/MPL9
-
EINZELSTRANG-DNA
25
2.4.3.1
SEQUENZREAKTION
ZUR
SYNTHESE
VON
35
S-MARKIERTEN
DNA-SEGMENTEN
UNTERSCHIEDLICHER
LAENGE
MIT
TAQ-POLYMERASE
25
2.43.2
AUFTRENNUNG
VON
DNA-SEGMENTEN
DURCH
POLYACRYLAMID-GEL
ELEKTROPHORESE
26
2.5
HERSTELLUNG
MARKIERTER
DNA
UND
RNA-SONDEN
FUER
HYBRIDISIERUNGS
EXPERIMENTE
27
2.5.1
MARKIERUNG
VON
DNA-SONDEN
MIT
DIGOXIGENIN
DURCH
PCR
27
2.5.2
HERSTELLUNG
VON
RNA-SONDEN
DURCH
IN
VZRRO-TRANSKRIPTION
27
2.5.2.1
LINEARISIERUNG
UND
REINIGUNG
DER
ALS
MATRIZE
VERWENDETEN
PLASMIDE
27
2.5
2.2
MARKIERUNG
VON
RNA-SONDEN
MIT
DIGOXIGENIN
DURCH
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
28
2
5.2.3
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
RNA-SONDEN
28
2.5
2.4
KONTROLLE
DER
TRANSKRIPTGROESSE
UND
PARTIELLE
HYDROLYSE
DER
TRANSKRIPTE
28
2.6
HYBRIDISIERUNG
VON
DNA
UND
RNA
MIT
DIG-MARKIERTEN
SONDEN
30
2.6.1
HERSTELLUNG
DER
FILTER
FUER
DIE
HYBRIDISIERUNG
30
2.6.1
1
VERDAUUNG
GENOMISCHER
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
30
2.6.1
2
AUFTRENNUNG
DER
RESTRIKTIONSFRAGMENTE
AUF
AGAROSEGELEN
30
2.6
1.3
TRANSFER
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUF
NYLON-MEMBRAN
30
2.6.1.4
AUFTRENNUNG
VON
RNA
AUF
DENATURIERENDEN
AGAROSEGELEN
31
2.6.1.5
TRANSFER
VON
RNA
AUF
FILTER
31
2.6.2
HYBRIDISIERUNG
DER
FILTER
MIT
MARKIERTEN
DNA
ODER
RNA-SONDEN
31
2.6.2.1
VORHYBRIDISIERUNG
UND
DNA-DNA-HYBRIDISIERUNG
31
2.6.22
WASCHEN
DER
FILTER
UND
DETEKTION
DER
MIT
DIGOXIGENIN
MARKIERTEN
DNA-SONDEN
32
2.6.2.3
VORHYBRIDISIERUNG
UND
RNA-RNA-HYBRIDISIERUNG
32
2.6.2.4
WASCHEN
DER
FILTER
UND
DETEKTION
DER
MIT
DIGOXIGENIN
MARKIERTEN
RNA-SONDEN
33
2.6.2.5
QUANTIFIZIERUNG
VON
HYBRIDISIERUNGSSIGNALEN
33
2
7
IN
ZU-HYBRIDISIERUNGEN
34
2.7
1
FIXIERUNG
UND
EINBETTUNG
DES
PFLANZEN
UND
PILZMATERIALS
34
2.7.1.1
FIXIERUNG
VON
PFLANZEN
UND
PILZMATERIAL
MIT
GLUTARALDEHYD
34
2.7.1.2
EINBETTUNG
IN
KUNSTHARZ
34
2.7
1
3
EINBETTUNG
IN
PARAFFIN
35
2.7.2
BESCHICHTUNG
VON
DECKGLAESERN
UND
OBJEKTTRAEGERN
35
2.7
2
1
BESCHICHTUNG
VON
OBJEKTTRAEGERN
MIT
POLY-L-LYSIN
35
2.7.2.2
SILANISIERUNG
VON
OBJEKTTRAEGERN
35
2.7.2.1
SILIKONISIERUNG
VON
DECKGLAESERN
36
2.7.3
SCHNEIDEN
DES
EINGEBETTETEN
MATERIALS
36
2.7
3
1
PARAFFINSCHNITTE
36
2.7
3.2
SCHNITTE
VON
KUNSTHARZ-PRAEPARATEN
36
2.7.4
7N
ZU-HYBRIDISIERUNG
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
RNA-SONDEN
36
2.7
4
1
VORBEHANDLUNG
DER
SCHNITTE
36
2.7.4.2
HYBRIDISIERUNG
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
RNA-SONDEN
37
2
7.4.3
WASCHEN
DER
SCHNITTE
37
2.7.5
MIKROAUTORADIOGRAPHIE
ZUM
NACHWEIS
DER
RADIOAKTIVEN
SONDEN
37
2
7
5.1
BESCHICHTUNG
DER
OBJEKTTRAEGER
MIT
FOTOEMULSION
37
2.7.52
ENTWICKLUNG
DER
MIKROAUTORADIOGRAMME
UND
HERSTELLUNG
VON
3
8
DAUERPRAEPARATEN
2.7.53
QUANTIFIZIERUNG
DER
ERGEBNISSE
DER
IN
ZU-HYBRIDISIERUNGEN
3
8
2.7
5
4
FOTOGRAPHISCHE
DOKUMENTATION
DER
ERGEBNISSE
38
2.8
BESTIMMUNG
DER
NITRATREDUKTASEAKTIVITAET
IN
BLAETTERN
UND
WURZELN
39
VON
ZEA
RNAYS
2
8.1
HERSTELLUNG
EINES
PROTEIN-ROHEXTRAKTES
AUS
MAIS-BLAETTERN
UND
-
39
WURZELN
2.8.2
MESSUNG
DER
NITRATREDUKTASE-AKTIVITAET
IN
PROTEIN-ROHEXTRAKTEN
39
2.8
3
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTS
DER
ROHEXTRAKTE
40
2.9
BESTIMMUNG
VON
AUXINGEHALT
UND
IBA-SYNTHETASE-AKTIVITAET
BEI
41
PFLANZEN
UND
AM-PILZEN
2.9.1
ISOLIERUNG
UND
QUANTIFIZIERUNG
VON
AUXINEN
41
2.9.1
1
HERSTELLUNG
EINES
ROHEXTRAKTES
AUS
PFLANZEN
UND
AM-SPOREN
41
2.9.1
2
TRENNUNG
UND
QUANTIFIZIERUNG
VON
IAA
UND
IBA
DURCH
HPLC
41
2.9
13
ALKALISCHE
HYDROLYSE
DER
IAA-UND
IBA-KONJUGATE
41
2
9.1.4
ANALYSE
DER
LAA-UND
IBA-GEHALTE
DURCH
GEKOPPELTE
GASCHROMATO
41
GRAPHIE/MASSENSPEKTROSKOPIE
2.9
2
MESSUNG
DER
IBA-SYNTHETASE-AKTIVITAET
IN
VITRO
42
2.9
2
1
EXTRAKTION
DER
IBA-SYNTHETASE
42
2
9.2.2
ANSAETZE
ZUR
BESTIMUNG
DER
IBA-SYNTHETASE-AKTIVITAET
42
3.
ERGEBNISSE
43
3
1
AMPLIFIZIERUNG
VON
DNA-SEGMENTEN
AUS
GENEN
FUER
DIE
ASSIMILA
43
TORISCHE
NITRATREDUKTASE
VERSCHIEDENER
ORGANISMEN
DURCH
PCR
3.1.1
IDENTIFIZIERUNG
KONSERVIERTER
SEQUENZBEREICHE
IN
NITRATREDUKTASE
GENEN
43
3.1.2
EIGNUNG
DER
UNTERSCHIEDLICHEN
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
45
3.1.2.1
PRIMER
FUER
DIE
AMPLIFIZIERUNG
VON
SEGMENTEN
AUS
PILZ-NITRATREDUK
TASE-GENEN
45
3.1.2.2
PRIMER
FUER
DIE
AMPLIFIZIERUNG
EINES
SEGMENTS
AUS
DEM
GEN
FUER
DIE
NADH-ABHAENGIGE
NITRATREDUKTASE
VON
ZEA
MAYS
46
3.1.3
RESULTATE
DER
PCR-EXPERIMENTE
47
3.1.3.1
PCR-EXPERIMENTE
ZUR
GEWINNUNG
VON
GENSONDEN
FUER
DIE
ASSIMILA
TORISCHEN
NITRATREDUKTASEN
AUS
ASCOMYCETEN,
OOMYCETEN
UND
ZYGO
MYCETEN
47
3.1.3.2
AMPLIFIZIERUNG
VON
DNA-SEGMENTEN
AUS
ARBUSKULAEREN
MYKORRHIZA
PILZEN
48
3.1.3.3
PCR-EXPERIMENTE
ZUR
AMPLIFIKATION
EINES
SEGMENTES
AUS
DER
ASSIMILATORISCHEN
NITRATREDUKTASE
VON
ZEA
MAYS
50
3
1.4
ANALYSE
DER
PCR-PRODUKTE
50
3.1.4.1
KLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
VON
PCR-SEGMENTEN
AUS
DEN
NR
GENEN
VON
ASPERGILLUS
NIDULANS,
GLOMUS
DL
3,
PYTHIUM
INTERMEDIUM
UND
ZEA
MAYS
50
3.1.4.2
RESULTATE
DER
HYBRIDISIERUNGEN
ZWISCHEN
KLONIERTEN
PCR-SEGMENTEN
UND
GENOMISCHER
DNA
DER
AUSGANGSORGANISMEN
52
3.1.4.3
KREUZHYBRIDISIERUNGEN
ZWISCHEN
DEN
UNTERSCHIEDLICHEN
NITRATREDUK
TASE-SEGMENTEN
54
3.1.4.4
IDENTIFIZIERUNG
VON
WEITEREN
PCR-AMPLIFIKATEN
AUS
NITRATREDUKTASE
GENEN
DURCH
HYBRIDISIERUNG
MIT
DEN
VORLIEGENDEN
GENSONDEN
55
3.1.4.5
SEQUENZVERGLEICHE
DER
PCR-AMPLIFIKATE
UNTEREINANDER
SOWIE
MIT
BEKANNTEN
NITRATREDUKTASE-SEQUENZEN
ANDERER
ORGANISMEN
58
32
EXPRESSION
DER
GENE
FUER
DIE
ASSIMILATORISCHEN
NITRATREDUKASEN
VON
ZEA
MAYS
UND
GLOMUS
INTRARADICES
63
3
2.1
EINFLUSS
DER
MYKORRHIZIERUNG
AUF
EXPRESSION
UND
AKTIVITAET
DER
MAIS
NITRATREDUKTASE
IM
BLATT
63
3.2.1.1
ERGEBNISSE
DER
NORTHERN-BLOT-ANALYSEN
MIT
RNA
AUS
MAISBLAETTEM
63
3.2.1
2
NITRATREDUKTASE-AKTIVITAT
IN
ROHEXTRAKTEN
AUS
MAISBLAETTEM
64
3.2.1.3
LOKALISIERUNG
DER
MRNA
FUER
DIE
NITRATREDUKTASE
IN
MAISBLAETTEM
DURCH
IN
S/FTR-HYBRIDISIERUNG
65
3.2.2
EXPRESSION
DER
GENE
FUER
DIE
MAIS-NR
UND
DIE
GLOMUS-NR.
IN
MYKORRHIZIERTEN
UND
NICHT-MYKORRHIZIERTEN
MAISWURZELN
67
3.2.2.1
AORT/IERN-BLOT-ANALYSEN
ZUM
NACHWEIS
DER
MAIS-NR-MRNA
UND
DER
GZOMUS-NR-MRNA
IN
MAISWURZELN
67
3.2.2.2
IN
SITA-LOKALISIERUNG
DER
MAIS-NITRATREDUKTASE
AN
WURZELQUERSCHNITTEN
70
3.2.2.3
IN
SRFTR-HYBRIDISIERUNGEN
ZUR
LOKALISIERUNG
DER
GZOMI/S-NITRATREDUK
TASE-MRNA
IN
ARBUSKELN
UND
VESIKELN
VON
GLOMUS
INTRARADICES
71
3.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
MYKORRHIZIERUNG
UND
INDOL-3-BUTTERSAEURE-BILDUNG
BEI
ZEA
MAYS
77
3
3.1
AUXIN-GEHALT
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
MYKORRHIZIERUNG
BEI
ZEA
MAYS
77
3.3.1.1
ENTWICKLUNG
DER
IAA
UND
IBA-KONZENTRATIONEN
BEI
MYKORRHI
77
ZIERTEM
UND
NICHT-MYKORRHIZIERTEM
MAIS
IM
VERLAUF
EINER
VEGETATIONSPERIODE
3
3
12
EINFLUSS
DER
MYKORRHIZIERUNG
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
IBA-SYNTHETASE
79
IN
UNTERSCHIEDLICH
ALTE
MAISPFLANZEN
3.3
2
VERGLEICH
VON
IBA-GEHALT,
IBA-SYNTHETASE-AKTIVITAET
UND
MYKORRHI
80
ZIERBARKEIT
VERSCHIEDENER
MAISVARIETAETEN
3
3.2.1
IAA-UND
IBA-GEHALT
VERSCHIEDENER
MAISSORTEN
80
3.3
2.2
IBA-SYNTHETASE-AKTIVITAET
IN
UNTERSCHIEDLICHEN
MAISSORTEN
82
3
3.2.3
MYKORRHIZIERBARKEIT
VERSCHIEDENER
MAISVARIETAETEN
82
4.
DISKUSSION
84
4.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
DER
SYMBIOSE
84
ZWISCHEN
ARBUSKULAEREN
MYKORRHIZAPILZEN
UND
PFLANZEN
4
2
NACHWEIS
VON
NITRATREDUKTASE-GENEN
IN
VERSCHIEDENEN
ORGANISMEN
85
DURCH
PCR
4.3
EXPRESSION
UND
AKTIVITAET
DER
NITRATREDUKTASEN
VON
ZEA
MAYS
UND
89
GLOMUS
MTRARADICES
4.4
LOKALISIERUNG
DER
NITRATREDUKTASE
VON
ZEA
MAYS
UND
GLOMUS
94
INTRARADICES
4.5
EINFLUSS
DER
MYKORRHIZIERUNG
AUF
DEN
AUXINGEHALT
VON
MAIS
96
4.6
AUSBLICK
AUF
WEITERE
UNTERSUCHUNGEN
98
5.
ZUSAMMENFASSUNG
100
6.
LITERATURVERZEICHNIS
102
7.
ANHANG
113
7.1
ABKURZUNGSVERZEICHNIS
113
7.2
LISTE
DER
BENUTZTEN
GERAETE
115
7.3
BEZUGSQUELLEN
FUER
CHETNIKALIEN,
ENZYME
UND
ANDERES
MATERIAL
116 |
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