Molekularbiologische Untersuchungen zur Physiologie des Phloems im Großen Wegerich Plantago major L. (Plantaginaceae):
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1996
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adam_text | MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR PHYSIOLOGIE DES PHIOEMS IM
GROSSEN WEGERICH PLANTAGO MAJOR L. {PLANTAGINACEAE) DISSERTATION ZUR
ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER NATURWISSENSCHAFTEN (DR. RER. NAT.) DER
NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET III - BIOLOGIE UND VORKLINISCHE MEDIZIN
- DER UNIVERSITAET REGENSBURG VORGELEGT VON MANFRED GAHRTZ AUS HAMBURG
1996 MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR PHYSIOLOGIE DES PHIOEMS IM
GROSSEN WEGERICH PLANTAGO MAJOR L. (PLANTAGINACEAE) DISSERTATION ZUR
ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER NATURWISSENSCHAFTEN (DR. RER. NAT.) DER
NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET III - BIOLOGIE UND VORKLINISCHE MEDIZIN
- DER UNIVERSITAET REGENSBURG VORGELEGT VON MANFRED GAHRTZ AUS HAMBURG
1996 INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1 1.1 DER
FOTOASSIMILATTRANSPORT IN HOEHEREN PFLANZEN 1 1.1.1 DIE LOKALISATION DES
TRANSPORTS 1 1.1.2 DIE IDENTIFIKATION DER TRANSPORTIERTEN KOHLENHYDRATE
2 1.1.3 DER MECHANISMUS DES TRANSPORTS 3 1.2 PROTEINE DES PHIOEMS 8 1.3
ZUM INHALT DIESER ARBEIT 9 2 ERGEBNISSE 11 2.1 ERSTELLEN EINER CDNA-BANK
AUS LEITBUENDELN VON P. MAJOR. 11 2.2 PMSUCI UND PMSUC2, ZWEI
SACCHAROSE/H*-SYMPORTER 14 2.2.1 KLONIEREN DER PMSUCI UND PMSUC2-CDNAS
14 2.2.1.1 KLONIEREN VON PMSUC2-CDNAS 14 2.2.1.2 KLONIEREN VON
PMSUC1-CDNAS . 14 2.2.2 SEQUENZIEREN VON PMSUCI UND PMSUC2 15 2.2.2.1
DIE SEQUENZ VON PMSUCI 15 2.2.2.2 DIE SEQUENZ VON PMSUC2 17 2.2.2.3
AMINOSAEURESEQUENZANALYSE VON PMSUCI UND PMSUC2 20 2.2.3 HETEROLOGE
EXPRESSION UND CHARAKTERISIERUNG IN S. CEREVISIAE 25 2.2.3.1 EXPRESSION
VON PMSUCI UND PMSUC2 IN S. CEREVISIAE 25 2.2.3.2 SUBSTRATSPEZIFITAET 27
2.2.3.3 EINFLUSS VON HEMMSTOFFEN 28 2.2.3.4 PH-ABHAENGIGKEIT 28 2.2.3.5
KINETISCHE PARAMETER DES SACCHAROSE- UND MALTOSETRANSPORTS.... 29
2.2.3.6 SACCHAROSEAKKUMULATION IN EINEM INVERTASELOSEN HEFESTAMM.... 30
2.2.4 EXPRESSION VON PMSUCI UND PMSUC2 IN PLANTA 33 2.2.4.1
ORGANSPEZIFISCHE EXPRESSION 33 2.2.4.2 EXPRESSION WAEHREND DER
BLUETENENTWICKLUNG 35 2.2.4.3 EXPRESSION VON PMSUCI I N DEN SAMENANLAGEN
37 2.3 DIFFERENTIELLES DURCHSUCHEN DER LEITBUENDELSPEZIFISCHEN CDNA-BANK
39 2.3.1 DIFFERENTIELLES HYBRIDISIEREN DERCDNA-BANK 39 2.3.2
CHARAKTERISIEREN DER DIFFERENTIELLEN CDNA-KLONE DURCH PARTIELLES
SEQUENZIEREN UND NORTHERNBLOT-ANALYSEN 39 2.3.2.1 LEITBUENDELSPEZIFISCHE
CDNAS 39 2.3.2.2 MESOPHYLLSPEZIFISCHE CDNAS 54 INHALTSVERZEICHNIS 3
DISKUSSION 58 3.1 SACCHAROSETRANSPORTER IN P. MAJOR. 58 3.2
LEITBUENDELSPEZIFISCHE CDNAS 63 4 MATERIAL UND METHODEN 68 4.1 ORGANISMEN
UND VEKTOREN 68 4.1.1 PFLANZEN 68 4.1.2 BAKTERIENSTAEMME 68 4.1.3
HEFESTAEMME 68 4.1.4 VEKTOREN 68 4.2 CHEMIKALIEN UND ENZYME 68 4.3 GERAETE
69 4.4 ANZUCHTBEDINGUNGEN 69 4.4.1 ANZUCHT VON P. MAJOR. 69 4.4.2
ANZUCHT VON E. COLI. 69 4.4.3 ANZUCHT VON S. CEREVISIAE .* 70 4.5
PFLANZENMETHODEN 70 4.5.1 GEWINNUNG VON PFLANZENMATERIAL 70 4.5.2
ISOLATION VON GESAMT-RNA 70 4.5.3 ANREICHERUNG VON POLY(A)*-RNA : 70
4.5.4 TRANSPORTMESSUNGEN AN ISOLIERTEN LEITBUENDELN 71 4.6 ERSTELLEN UND
DURCHSUCHEN EINER CDNA-BANK 71 4.6.1 SYNTHESE EINER CDNA-BANK AUS
POLY(A)*-RNA IN 5IGT10 71 4.6.2 DURCHSUCHEN DER CDNA-BANK 71 4.6.2.1
DIFFERENTIELLES DURCHSUCHEN 71 4.6.2.2 HOMOLOGES DURCHSUCHEN 72 4.6.2.3
HETEROLOGES DURCHSUCHEN 72 4.6.3 ISOLATION DER CDNAS AUS DEN GEFUNDENEN
X-KLONEN 72 4.7 KLONIERUNGSTECHNIKEN . 73 4.8 SEQUENZANALYSEN 73 4.8.1
SEQUENZIEREN VON DNA 73 4.8.2 DATENVERARBEITUNG VON NUKLEOTID- UND
AMINOSAEURESEQUENZEN 73 4.9 AMPLIFIKATION VON CDNA-FRAGMENTEN MITTELS
RT-PCR 73 4.10 HETEROLOGE EXPRESSION IN HEFE UND TRANSPORTMESSUNGEN AN
HEFEN 74 4.10.1 TRANSFORMATION VON S. CEREVISIAE 74 4.10.2
TRANSPORTMESSUNGEN AN TRANSGENEN HEFEN 74 4.11 EXPRESSIONSANALYSEN 74
4.11.1 NORTHERNBLOT-ANALYSE 74 4.11.2 RNASE PROTECTION ANALYSE 75 IV
INHALTSVERZEICHNIS 4.11.2.1 IN VITRO TRANSKRIPTION 75 4.11.2.2 RNASE
PROTECTION ASSAY 75 4.11.3 IN SITU HYBRIDISIERUNG 76 4.11.3.1 EINBETTEN
UND SCHNEIDEN VON PFLANZENGEWEBE 76 4.11.3.2 IN VITRO TRANSKRIPTION 76
4.11.3.3 HYBRIDISIERUNG 77 5 ZUSAMMENFASSUNG 78 6 LITERATURVERZEICHNIS
80 ANHANG: DOKUMENTATION PARTIELLER SEQUENZEN DER DIFFERENTIELLEN
CDNA-KLONE 92 V
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