Stickstoffmonoxid in der Denitrifikation von Pseudomonas: Identifizierung und Charakterisierung neuer Gene
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
C
HEMISCHE
UND
PHYSIKALISCHE
E
IGENSCHAFTEN
VON
S
TICKSTOFFMONOXID
.
1
1.2
NO
BEI
E
UKARYOTEN
.
1
1.3
NO
BEI
P
ROKARYOTEN
.
2
1.3.1
CU-ABHAENGIGE
NITRITREDUKTASEN
.
3
13
2
CYTOCHROM
CD]
.
4
13
3
NO-REDUKTASE
.
.
4
2
PROBLEMSTELLUNG
.
5
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
6
3.1
B
AKTERIENSTAEMME
UND
P
LASMIDE
.
6
3.2
M
OLEKULARBIOLOGISCHE
M
ETHODEN
.
7
3.2
1
ALLGEMEINE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
7
3
2
2
PLASMID-DNA
PRAEPARATION
(ANALYTISCHER
MASSSTAB)
.
7
3.2
3
PLASMID-DNA
PRAEPARATION
(PRAEPARATIVER
MASSSTAB)
.
8
3.2.4
DNA-QUANTIFIZIERUNG
.
8
3.2.5
DOPPELSTRANG-DNA
SEQUENZIERUNG
.
8
3.2.6
PCR-MUTAGENESE
.
.10
3.2
7
AMPLIFIKATION
EINES
DNA-FRAGMENTS
AUS
ZELLEN
.
12
3.2.8
TNPHOA-VERMITTELTE
INSERTIONSMUTAGENESE
.
12
3.3
B
IOCHEMISCHE
M
ETHODEN
.
13
3.3.1
ALLGEMEINE
BIOCHEMISCHE
METHODEN
.
13
3.3.2
REINIGUNG
DES
ANTISERUMS
GEGEN
DIE
CU-ABHAENGIGE
NITRITREDUKTASE
.
13
3.3.3
REINIGUNG
VON
NIRK
AUS
E.
COLI
JM109(DE3/PTNRL)
.
14
3.3
4
TEST
AUF
AKTIVITAET
DER
CU-ABHAENGIGEN
NITRITREDUKTASE
.
15
3
3
5
PERIPLASMA/CYTOPLASMA
FRAKTIONIERUNG
.
15
3
3
6
HERSTELLUNG
VON
NO
.
15
3.4
C
HEMIKALIEN
UND
G
ERAETENACHWEIS
.
15
3.5
V
ERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
A
BKUERZUNGEN
.
17
4
ERGEBNISSE
.
18
4.1
D
IE
C
U
-
ABHAENGIGE
N
ITRITREDUKTASE
(N
IR
K)
VON
P.
AUREOFACIENS
.
18
4
1
1
DIE
NUKLEOTIDSEQUENZ
VON
NIRK.
.
18
4.1
2
EXPRESSION
VON
NIRK
IN
P.
STUTZERI
MK202
.
19
4
13
EXPRESSION
VON
NIRK
IN
E
COLI
.
20
414
DIE
REINIGUNG
VON
NIRK
.
22
4.1.5
PHYSIKALISCHE
UND
CHEMISCHE
CHARAKTERISTIKA
VON
NIRK
.
24
4.2
D
IE
10
K
B
INTERGENE
R
EGION
ZWISCHEN
DEN
NOS
UND
NIR
G
ENCLUSTERN
VON
P.
STUTZERI
.
26
4
2
1
DIE
NUKLEOTIDSEQUENZ
ZWISCHEN
DEN
NIR
UND
NOS
GENEN
.
26
4
2
2
DIE
ANALYSE
DER
NUKLEOTIDSEQUENZ
.
27
4
2
3
ORF1
175
UND
ORF82
SIND
MEMBRANSTAENDIGE
PROTEINE
.
34
4.2.4
ORF393
WEIST
KEINE
SIGNATUREN
AUF.
.
36
4.2.5
DIE
IDENTIFIZIERUNG
DES
STRUKTURGENS
FUER
DIE
UROPORPHYRINOGEN-
III
METHYLTRANSFERASE.
.
36
4.2
6
ORF507
HAT
EINE
BINDESTELLE
FUER
HAEM
C
.
39
4.2.7
ORF286
BESITZT
EIN
DNA-BINDEMOTIV
.
41
4.2.8
DIE
ANALYSE
VON
ORF3
78
.
43
4.2
9
ORF247
HAT
KONSENSUSMOTIVE
FUER
KURZKETTEN-ADH
.
44
4.2.10
ORF396
HAT
EIN
LEUCINZIPPER-MOTTV
.
44
4.2
11
ORF57
HAT
AEHNLICHKEIT
MIT
EINEM
E
COLI-PROTEIN
.
44
4.3
D
IE
NO-R
EDUKTASE
VON
P
STUTZERI
.
45
4
3
1
EIN
TOPOLOGISCHES
MODELL
DER
NO-REDUKTASE
.
45
4.3.2
EIN
EXPRESSIONSSYSTEMS
FIIR
NORCB
.
47
4.3.3
DIE
KONSTRUKTION
TRANSLATIONALER
PHOA-FUSIONEN
IN
NORCB
.
49
4.3.4
DIE
NORB-MUTANTE
HIS-257-ALA
.
56
5
DISKUSSION
.
58
5.1
D
IE
C
U
-
ABHAENGIGE
N
ITRITREDUKTASE
VON
P
AUREOFACIENS
.
58
5.2
D
IE
N
UKLEOTIDSEQUENZ
ZWISCHEN
DEN
NIR
-
UND
DEN
VOAE
-G
ENEN
.
62
5.2.1
DIE
SEQUENZ
.
.
62
5.2.2
ORF175
HAT
AEHNLICHKEIT
MIT
DER
UNTEREINHEIT
111
DER
CYTOCHROMOXIDASEN
VOM
AAJ-TYP
.
63
5
2
3
DIE
UROPORPHYRINOGEN-III
METHYLTRANSFERASE
.
65
5.2
4
ORF507
IST
VERWANDT
MIT
CYTOCHROM
CDJ
.
65
5.2.5
ORF286
IST
EIN
REGULATORISCHES
PROTEIN
.
66
5.2
6
ORF247
UND
DIE
SCAD-PROTEINE
.
68
5.2.7
ORF
57.
68
5.2
8
DIE
IDENTIFIZIERUNG
NEUER
GENE
.
68
5.2.9
DER
DNA-BEREICH
ZWISCHEN
DEM
NIR
UND
DEM
NOS-CLUSTER
.
69
5.3
D
IE
NO-R
EDUKTASE
VON
P
STUTZERI
.
71
5.3.1
ENTWICKLUNG
EINES
TOPOLOGISCHEN
MODELLSFOER
NORCB
.
71
5.3
2
EIN
GENETISCHER
ANSATZ
ZUR
EXPERIMENTELLEN
ANALYSE
DER
MEMBRANTOPOLOGIE
.
72
5.3.3
DIE
MEMBRANTOPOLOGIE
DER
NO-REDUKTASE
.
74
6
ZUSAMMENFASSUNG
.77
7
LITERATUR
.
79 |
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