Phosphorylierung von Proteinen des Photosyntheseapparates und ihre Bedeutung für den Protein-Turnover:
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
1996
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Beschreibung: | Bochum, Univ., Diss., 1996 |
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I
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I
EINLEITUNG
1
II
MATERIAL
UND
METHODEN
7
II.
1
CHEMIKALIEN
7
N.2
GERAETE
7
II.
3
PFLANZENMATERIAL
UND
ANZUCHTBEDINGUNGEN
8
II.4
PRAEPARATION
INTAKTER
CHLOROPLASTEN
VON
SPINACIA
OLERACEA
8
II.
5
BESTIMMUNG
VON
INTAKTHEIT
UND
COZ-ABHAENGIGER
OZ-ENTWICKLUNG
DER
CHLOROPLASTENPRAEPARATION
9
II.6
BESTIMMUNG
DES
CHLOROPHYLLGEHALTES
9
II.
7
CHLOROPHYLL-FLUORESZENZMESSMETHODEN
10
II.7.1
PULS-SAETTIGUNGSMESSMETHODE
IN
DER
SAUERSTOFFELEKTRODE
10
II.7.2
CHLOROPHYLL-FLUORESZENZABNAHME
NACH
EINMALIGER
LADUNGSTRENNUNG
AM
PHOTOSYSTEM
II
11
II.
7.3
PULS-SAETTIGUNGSMESSMETHODE
IN
DER
BLATTHALTERUNG
11
II.8
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
PS
II-PROTEINE
IN
INTAKTEN
CHLOROPLASTEN
VON
SPINACIA
OLERACEA
12
II.8.
1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
PS
II-PHOSPHOPROTEINE
MIT
[
32
P]-ORTHOPHASPHAT
12
II.8
2
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
PS
II-PROTEINE
MIT
[
14
C]
-LEUCIN
12
II.9
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
PS
II-PHOSPHOPROTEINE
IN
GANZEN
PFLANZEN
VON
PISUM
SATIVUM
OHNE
WURZELSYSTEM
UND
RANKEN
MITTELS
[
32
P]
-ORTHOPHOSPHAT
12
II.
10
SUBFRAKTIONIERUNG
DER
THYLAKOIDMEMBRAN
IN
MARGINS,
STRORNA
UND
GRANATHYLAKIODE
13
II
INHALTSVERZEICHNIS
II.
11
ISOLIERUNG
VON
PROTEINEN
DER
THYLAKOIDMEMBRAN
14
II.
11.1
PRAEPARATION
DER
THYLAKOIDMEMBRANPROTEINE
AUS
INTAKTEN
CHLOROPLASTEN
14
II.
11.2
PRAEPARATION
DER
THYLAKOIDMEMBRANPROTEINE
AUS
BLATTMATERIAL
15
11.12
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
UND
FIXIERUNG
VON
PROTEINEN
15
II.
12.1
SDS-GELELEKTROPHORESE
15
II.12.2
LIDS-GELELEKTROPHORESE
16
II.
12.3
2-DIMENSIONALE
GELELEKTROPHORESE
IM
NATIVEN/DENATURIERENDEN
SYSTEM
17
N.
12.4
FIXIERUNG
DER
AUFTRENNUNGSMUSTER
DURCH
WESTEM-BLOTTING
ODER
GELTROCKNUNG
17
11.13
PROTEINNACHWEIS
DURCH
POLYKLONALE
ANTIKOERPER
18
11.14
AUSWERTUNG
DER
RADIOAKTIVEN
MARKIERUNG
VON
PS
II-PROTEINEN
19
II.
14.1
AUTORADIOGRAPHIE
UND
LASERDENSITOMETRISCHE
AUSWERTUNG
VON
FIXIERTEN
GELEN
UND
WESTEM-BLOTS
19
II.
14.2
PHOSPHOIMAGING
VON
FIXIERTEN
GELEN
UND
WESTEM-BLOTS
19
II.
15
QUANTITATIVE
AUSWERTUNG
DES
INUNUNONACHWEISES
VON
PS
II-PROTEINEN
19
11.16
PRUEFUNG
DER
VALIDITAET
DES
WESTEM-BLOT-VERFAHRENS
DURCH
DEN
VERGLEICH
VON
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
PROTEINMUSTEM
AUF
GEL
UND
WESTEM-BLOT
19
III
ERGEBNISSE
21
III.
1
CHARAKTERISIERUNG
DES
PHOTOSYNTHETISCHEN
ELEKTRONENTRANSPORTES
IN
INTAKTEN
CHLOROPLASTEN
VON
SPINACIA
OLERACEA
UNTER
VERSCHIEDENEN
LICHTINTENSITAETEN
21
III.
1.1
GRUNDLAGEN
ZUR
MESSUNG
DER
CHLOROPHYLL-FLUORESZENZ
22
III.
1.2
CHARAKTERISIERUNG
DES
PHOTOSYNTHETISCHEN
ELEKTRONENTRANSPORTES
UNTER
VERSCHIEDENEN
LICHTINTENSITAETEN
ANHAND
DER
PULS-SAETTIGUNGS
MESSMETHODE
24
IN.
1.3
EINFLUSS
ANSTEIGENDER
LICHTINTENSITAETEN
AUF
DIE
AKTIVITAET
VON
PS
II
IN
INTAKTEN
CHLOROPLASTEN
26
III.
2
REGULATION
DER
PHOSPHORYLIERUNG
VON
THYLAKOIDPROTEINEN
IN
INTAKTEN
CHLOROPLASTEN
VON
SPINACIA
OLERACEA
29
III.2.
1
THYLAKOIDPROTEINPHOSPHORYLIERUNG
UNTER
VERSCHIEDENEN
LICHTBEDINGUNGEN
29
INHALTSVERZEICHNIS
IN
M.2.2
INITIELLER
VERLAUF
DER
THYLAKOIDPROTEINPHOSPHORYLIERUNG
UNTER
VERSCHIEDENEN
LICHTINTENSITAETEN
FUER
DAS
DL-PROTEIN
UND
LHC
II
33
IN.2.3
WIEDERHERSTELLUNG
DER
STARKLICHT-INDUZIERTEN
ABNAHME
DER
LHC
II
PHOSPHORYLIERUNG
UNTER
SCHWACHLICHT
35
M.2.4
UNTERSUCHUNG
DER
THYLAKOIDPHOSPHOPROTEIN-PHOSPHATASE
AKTIVITAET
IN
INTAKTEN
CHLOROPLASTEN
IN
DER
DUNKELHEIT
37
HI.2.5
PHOSPHATGRUPPENUMSATZ
DER
THYLAKOIDMEMBRANPROTEINE
IN
INTAKTEN
CHLOROPLASTEN
MIT
ZUNEHMENDER
BELICHTUNGSDAUER
39
NI.2.6
EINFLUSS
VON
ANTIMYCIN
A,
NH4CI
UND
GRAMICIDIN
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
PROTEINKINASEN
UND
-PHOSPHATASEN
UNTER
STARKLICHTBEDINGUGNEN
42
III.2.7
EINFLUSS
VON
OXALACETAT,
DTT
UND
D,L-GLYCERINALDEHYD
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
DER
THYLAKOIDPROTEINE
47
III.3
BEDEUTUNG
DER
PROTEINPHOSPHORYLIERUNG
FIIR
DEN
TUMOVER
DES
D
1
-PROTEINS
IN
INTAKTEN
CHLOROPLASTEN
VON
SPINACIA
OLERACEA
51
M.3.
1
SYNTHESE
UND
AKKUMULATION
DES
[
14
C]
MARKIERTEN
DL-PROTEINS
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
LICHTINTENSITAET
51
III.3
.2
AKKUMULATION
DES
[
14
C]
MARKIERTEN
D
1
-PROTEINS
IN
DEN
PHOSPHORYLIERTEN
UND
NICHT-PHOSPHORYLIERTEN
POOLS
DES
PROTEINS
54
III.3.3
PULSE-CHASE-MARKIERUNG
INTAKTER
CHLOROPLASTEN
UND
ANALYSE
DER
MARKIERUNGSMUSTER
DURCH
LIDS-GELELEKTROPHORESE
58
III.4
STRUKTURELLE
VERTEILUNG
DER
PS
II-PROTEINE
IN
HINSICHT
AUF
PHOSPHORY
LIERUNG,
PROTEINGEHALT
UND
UMSATZAKTIVITAET
61
IN.4.
1
STRUKTURELLE
VERTEILUNG
DER
PS
II-PROTEINE
IN
HINSICHT
AUF
PHOSPHORYLIERUNG
UND
PROTEINGEHALT
61
III.4.2
VERTEILUNG
DES
NEUSYNTHETISIERTEN
DL-PROTEINS
IN
DER
THYLAKOID
MEMBRAN
70
III.
5
UNTERSUCHUNG
DER
[
I4
C]
UND
[
32
P]
MARKIERUNG
DER
THYLAKOIDMEMBRAN
PROTEINE
IN
INTAKTEN
CHLOROPLASTEN
MIT
HILFE
VON
ZWEI-DIMENSIONALER
GELELEKTROPHORESE
73
III.5.1
UNTERSUCHUNG
DER
[
14
C]
UND
[
32
P]
MARKIERUNGSMUSTER
DER
PROTEIN
KOMPLEXE
DER
THYLAKOIDMEMBRAN
NACH
NATIVER
GELELEKTROPHORESE
(1.
DIMENSION)
73
III.
5.2
UNTERSUCHUNG
DER
[
32
P]
MARKIERUNGSMUSTER
DER
PROTEINKOMPLEXE
AUS
DER
NATIVEN
GELELEKTROPHORESE
NACH
DENATURIERENDER
SDS
GELELEKTROPHORESE
(2.
DIMENSION)
75
III.
5.3
UNTERSUCHUNG
DER
[
14
C]
MARKIERUNGSMUSTER
DER
PROTEINKOMPLEXE
AUS
DER
NATIVEN
GELELEKTROPHORESE
NACH
DENATURIERENDER
SDS
GELELEKTROPHORESE
(2.
DIMENSION)
80
INHALTSVERZEICHNIS
IV
III.6
REGULATION
DER
PHOSPHORYLIERUNG
VON
THYLAKOIDPROTEINEN
IN
VIVO
IN
PISUM
SATIVUM
84
III.6.
1
PULSE-CHASE-MARKIERUNG
DER
THYLAKOIDPROTEINE
MITTELS
[
32
P]
ORTHOPHOSPHAT
84
IV
DISKUSSION
90
V
ZUSAMMENFASSUNG
101
VI
LITERATURVERZEICHNIS
103
DANKSAGUNG |
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