Untersuchungen in vitro zum Metabolismus von Midazolam und Flumazenil an Lebermikrosomen des Menschen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1996
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| adam_text | UNTERSUCHUNGEN IN VITRO ZUM METABOLISMUS VON MIDAZOLAM UND FIUMAZENIL AN
LEBERMIKROSOMEN DES MENSCHEN DEN NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAETEN DER
FRIEDRICH-ALEXANDER-UNIVERSITAET ERIANGEN-NUERNBERG ZUR ERLANGUNG DES
DOKTORGRADES VORGELEGT VON BRITTA KLEINGEIST AUS WUERZBURG
INHALTSVERZEICHNIS 1 1 2 7 9 9 10 13 13 14 15 17 17 METER K M UND V MAX
FUER 17 DIE UMSETZUNG VON MIDAZOLAM ZU 1 -0H- UND 4-OH-MIDAZOLAM 3.1.2.
CHEMISCHE INHIBIERUNG DER BILDUNGSAKTIVITAET VON 1 -0H-UND 4- 20
OH-MIDAZOLAM DURCH VERSCHIEDENE SPEZIFISCHE CYTOCHROM P450 INHIBITOREN
3.1.3. NACHWEIS DER BILDUNG VON 1 -OH- UND 4-OH-MIDAZOLAM AN 24
MIKROSOMEN MIT HETEROLOG EXPRIMIERTEN CYTOCHROM P450- ENZYMEN 1. 1.1.
1.2. 1.3. 1.4. 1.4.1. 1.4.2. 1.5. 1.5.1. 1.5.2. 2. 3. 3.1. 3.1.1.
EINLEITUNG FREMDSTOFFMETABOLISMUS DAS CYTOCHROM P450-ENZYMSYSTEM
ESTERASEN MIDAZOLAM WIRKMECHANISMUS METABOLISMUS VON MIDAZOLAM
FIUMAZENIL WIRKMECHANISMUS METABOLISMUS VON FIUMAZENIL FRAGESTELLUNG
ERGEBNISSE METABOLISMUS VON MIDAZOLAM BESTIMMUNA DER ENZVMKINETISCHEN
3.1.4. IMMUNOQUANTIFIZIERUNG VON CYTOCHROM P450 3A IN HUMANEN 29
LEBERMIKROSOMEN UND KORRELATION MIT DER BILDUNGSAKTIVITAET VON 1 -OH-
UND 4-OH MIDAZOLAM 3.1.5. KORRELATION DER BILDUNGSAKTIVITAET VON
1 -OH-MIDAZOLAM UND 4- 34 OH-MIDAZOLAM MIT DER AKTIVITAET VERSCHIEDENER
MARKERAKTIVITAETEN FUER EINZELNE CYTOCHROM P450-ENZYME 3.2. METABOLISMUS
VON FIUMAZENIL 39 3.2.1. BESTIMMUNG DER ENTSTEHENDEN METABOLITE AM
HUMANEN 39 MIKROSOMALEN ENZYMSYSTEM 3.2.1.1. GC-MS ANALYSE DES
GEBILDETEN METABOLITEN MIT EINER 44 RETENTIONSZEIT VON 3,4MIN 3.2.2.
BETEILIGTE ZELLORGANELLEN AM METABOLISMUS VON FIUMAZENIL 48 3.2.3.
DETERGENTIENVERSUCH 50 3.2.4. BESTIMMUNG DER ENZYMKINETISCHEN PARAMETER
KM UND V MA X FUER 53 DIE BILDUNGSAKTIVITAET VON FLUMAZENILSAEURE UND VOM
METHYLESTER VON FIUMAZENIL 3.2.4.1. MENSCHLICHE LEBERMIKROSOMEN 53
3.2.4.2. GEREINIGTE KANINCHEN- UND SCHWEINELEBERESTERASE 60 3.2.4.3.
RATTENNIEREN- UND RATTENLUNGENMIKROSOMEN 64 3.2.5. KORRELATION DER
BILDUNGSAKTIVITAET VON SALICYLSAEURE AUS ACETYL- 69 SALICYLSAEURE MIT DER
BILDUNGSAKTIVITAET VON FLUMAZENILSAEURE UND DEM METHYLESTER VON FIUMAZENIL
3.2.6. INHIBIERUNG DES METABOLISMUS VON FIUMAZENIL MIT SPEZIFISCHEN 73
CHEMISCHEN INHIBITOREN FUER CYTOCHROM P450 UND CARBOXYL- ESTERASEN
3.2.6.1. N-BENZIMIDAZOL (NBI) - INHIBIERUNG ,73 3.2.6.2.
PMSF-INHIBIERUNG 75 3.2.7. HITZEBEHANDLUNG VON HUMANMIKROSOMEN,
KANINCHEN- UND 76 SCHWEINELEBERESTERASE - EINFLUSS AUF DEN METABOLISMUS
VON FIUMAZENIL 3.2.8. METABOLISIERUNG VON FLUMAZENILSAEURE UND
N-DEMETHYLIERTEM 78 FIUMAZENIL 3.3. AUFREINIGUNG DER
FLUMAZENIL-CARBOXYLESTERASE AUS 79 HUMANLEBERMIKROSOMEN 4. DISKUSSION 88
4.1. METABOLISMUS VON MIDAZOLAM 88 4.2. METABOLISMUS VON FIUMAZENIL 92
4.3. GEREINIGTE CARBOXYLESTERASE AUS HUMANLEBERMIKROSOMEN 96 5.
ZUSAMMENFASSUNG 99 6. MATERIAL UND METHODEN 102 6.1. CHEMIKALIEN 102
6.2. HETEROLOG EXPRIMIERTE CYTOCHROM P450-ENZYME 104 6.3. VERWENDETE
ANTIKOERPER 105 6.4. GERAETE 105 6.5. ORGANMATERIAL 109 6.6.
MIKROSOMENPRAEPARATION 109 6.6.1. MENSCHLICHE LEBER 109 6.6.2. NIERE UND
LUNGE DER RATTE 111 6.7. BESTIMMUNG DES PROTEINGEHALTS 112 6.8.
BESTIMMUNG DES CYTOCHROM P450 GEHALTS 113 6.9. TESTSYSTEME ZUR
BESTIMMUNG DER MARKERAKTIVITAETEN EINZELNER 114 CYTOCHROM P450-ENZYME
6.9.1. BESTIMMUNG DER CYTOCHROM P450 1A2 AKTIVITAET: O-DEMETHY- 114
LIERUNG VON METHOXIRESORUFIN ZU RESORUFIN 6.9.2. BESTIMMUNG DER
CYTOCHROM P450 2A6 AKTIVITAET: OXIDATION VON 117 COUMARIN ZU
7-HYDROXICOUMARIN 6.9.3. BESTIMMUNG DER CYTOCHROM P450 2C9 AKTIVITAET:
OXIDATION VON 118 (S)-(+)-WARFARIN ZU 7-HYDROXIWARFARIN 6.9.4.
BESTIMMUNG DER CYTOCHROM P450 2C19 AKTIVITAET: OXIDATION VON 121
(S)-(+)-MEPHENYTOIN ZU 4-HYDROXIMEPHENYTOIN 6.9.5. BESTIMMUNG DER
CYTOCHROM P450 2D6 AKTIVITAET: 0- 124 DEMETHYLIERUNG VON DEXTROMETHORPHAN
ZU DEXTRORPHAN 6.9.6. BESTIMMUNG DER CYTOCHROM P450 2E1 AKTIVITAET:
OXIDATION VON 127 CHLORZOXAZON ZU 6-HYDROXICHLORZOXAZON 6.9.7.
BESTIMMUNG DER CYTOCHROM P450 3A AKTIVITAET: OXIDATION VON 130
DENITRO-NIFEDIPIN ZUM DENITRO-PYRIDINDERIVAT 6.10. TESTSYSTEM ZUR
BESTIMMUNG DER METABOLITE 1 -OH-UND 4-OH- 133 MIDAZOLAM AM MENSCHLICHEN
MIKROSOMALEN ENZYMSYSTEM 6.11. TESTSYSTEM ZUR BESTIMMUNG DER METABOLITE
FLUMAZENILSAEURE, 136 FLUMAZENILMETHYLESTER UND N-DEMETHYLIERTES
FIUMAZENIL 6.12. GC-MS-ANALYSEN 137 6.13. INHIBIERUNG DER CYTOCHROM
P450-ENZYM- UND ESTERASEAKTIVITAET 139 6.13.1. CHEMISCHE HEMMUNG DER
BILDUNGSAKTIVITAET VON 1 -OH- 139 MIDAZOLAM UND 4-OH-MIDAZOLAM DURCH
CYTOCHROM P450 SPEZIFISCHE INHIBITOREN 6.13.2. CHEMISCHE INHIBIERUNG DER
ESTERASEAKTIVITAET MIT PMSF UND NBI 141 6.14. BESTIMMUNG DER UMSATZRATE
DES MIDAZOLAMMETABOLISMUS AN 142 HETEROLOG EXPRIMIERTEN CYTOCHROM
P450-ENZYMEN 6.15. QUALITATIVER UND QUANTITATIVER NACHWEIS VON
SPEZIFISCHEN 144 CYTOCHROM P450-ENZYMEN UND ESTERASEN MIT ELEKTRO-
PHORETISCHEN METHODEN 6.15.1. SDS-PAGE-ELEKTROPHORESE 144 6.15.2.
SILBERFAERBUNG 145 6.15.3. IMMUNOQUANTIFIZIERUNG VON CYTOCHROM P450 3A
(WESTERN-BLOT) 146 6.16. AUFREINIGUNG EINER CARBOXYLESTERASE AUS 148
HUMANLEBERMIKROSOMEN 6.17. ZUECHTUNG VON V79-ZELLEN
(HAMSTERFIBROBLASTEN), TRANSFIZIERT MIT 150 CYTOCHROM P450 1A2 UND 1A1
7. LITERATURVERZEICHNIS 152 DANKSAGUNG LEBENSLAUF
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