Isolation und Charakterisierung von pflanzlichen Genen für Enzyme des Speicherlipidbiosyntheseweges als Bausteine für die Ölpflanzenzüchtung:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1993
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| Beschreibung: | Giessen, Univ., Habil.-Schr., 1993 |
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SEITE
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
GENTECHNIK
IN
DER
PFLANZENZUECHTUNG
1
1.2.
ZUCHTZIELE
ZUR
VERBESSERUNG
DER
INHALTSSTOFFE
VON
OELPFLANZEN
DURCH
GENTECHNIK
3
1.3.
BIOCHEMISCHE
GRUNDLAGEN
DER
SPEICHERLIPIDSYNTHESE
3
1.3.1.
BIOCHEMISCHE
GRUNDLAGEN
DER
BIOSYNTHESE
VON
FETTSAEUREN
5
1.3.1.1.
ACETYL-COA
CARBOXYLASE
(ACCASE)
5
1.3.1.2.
FETTSAEURESYNTHASE
(FAS)
7
1.3.1.3.
ACYL4ACP]
THIOESTERASE
(TE)
12
1.3.2.
BIOCHEMISCHE
GRUNDLAGEN
DER
BIOSYNTHESE
VON
GLYCERIN-3-PHOSPHAT
12
1.4.
METHODEN
ZUR
ISOLATION
VON
GENEN
14
1.5.
ZIELSETZUNG
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
17
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
18
2.1.
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
18
2.2.
REINIGUNGS-,
ANALYSE
UND
SYNTHESEKITS
18
2.3.
LABORMATERIALIEN
18
2.4.
PFLANZENMATERIAL
19
2.5.
PLASMID
UND
VEKTORSYSTEME
20
2.6.
BAKTERIENSTAEMME
22
2.7.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ARBEITEN
23
2.7.1.
CDNA
UND
GENOMISCHE
DNA-BANKEN
23
2.7.2.
HERSTELLUNG
VON
SPEZIFISCHEN
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
23
2.7.2.1.
ABLEITUNG
VON
DEGENERIERTEN
OLIGONUKLEOTIDEN
23
2.7.2.2.
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
26
2.7.2.3.
KLONIERUNG
DER
AMPLIFIKATIONSPRODUKTE
27
2.8.
DNA
SEQUENZIERUNG
27
2.9.
FUNKTIONELLE
KOMPLEMENTATION
28
2.1
0.TRANSFORMATION
VON
RAPS
28
2.11.
FETTSAEUREANALYTIK
28
2.12.
BESTIMMUNG
VON
ENZYMAKTIVITAETEN
29
SEITE
3.
ERGEBNISSE
30
3.1.
SYNTHESE
VON
SPEZIFISCHEN
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
MITTELS
PCR
30
3.2.
ISOLATION
VON
CDNAS/GENEN
DER
DE
NOVO
FETTSAEUREBIOSYNTHESE
31
3.2.1.
ACETYL-COA
CARBOXYLASE
(ACCASE)
AUS
B.NAPUS
31
3.2.1.1.
SYNTHESE
EINER
SPEZIFISCHEN
HYBRIDISIERUNGSSONDE
FUER
ACCASE
31
3.2.1.2.
ISOLATION
UND
CHARKTERISIERUNG
EINES
GENOMISCHEN
KLONS
FUER
ACCASE
31
3.2.2.
ACYL
CARRIER
PROTEIN
(ACP)
AUS
B.
NAPUS
UND
C.
LANCEOLATA
39
3.2.2.1.
SYNTHESE
VON
SPEZIFISCHEN
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
FUER
ACP
39
3.2.2.2.
ISOLATION
UND
CHARKTERISIERUNG
VON
GENOMISCHEN
KLONEN
FUER
ACP
AUS
RAPS
39
3.2.2.3.
ISOLATION
UND
CHARKTERISIERUNG
VON
ACP-CDNAS
AUS
C.
LANCEOLATA
39
3.2.3.
SS-KETOACYL-[ACP]
SYNTHASE
I
(KAS
I)
AUS
B.
NAPUS
UND
C.
LANCEOLATA
43
3.2.3.1.
SYNTHESE
VON
SPEZIFISCHEN
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
FUER
KAS
I
43
3.2.3.2.
FUNKTION
UND
SPEZIFITAET
DER
KAS
I
KLONE
AUS
C.
LANCEOLATA
44
3.2.4.
SS-KETOACYL-[ACP]
REDUKTASE
(KR)
AUS
C.
LANCEOLATA
46
3.2.4.1.
SYNTHESE
EINER
SPEZIFISCHEN
HYBRIDISIERUNGSSONDE
FUER
KR
46
3.2.4.2.
ISOLATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
KR-CDNAS
UND
-GENEN
AUS
C.
LANCEOLATA
47
3.2.5.
ENOYL-[ACP]
REDUKTASE
(ER)
AUS
C.
LANCEOLATA
49
3.2.5.1.
SYNTHESE
EINER
SPEZIFISCHEN
HYBRIDISIERUNGSSONDE
FUER
ER
49
3.2.5.2.
ISOLATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
ER-CDNAS
UND
-GENEN
AUS
C.
LANCEOLATA
49
3.2.6.
ACYL
[ACP]-THIOESTERASE
(TE)
AUS
C.
LANCEOLATA
52
3.2.6.1.
SYNTHESE
EINER
SPEZIFISCHEN
HYBRIDISIERUNGSSONDE
FUER
TE
52
3.2.6.2.
ISOLATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
TE-CDNAS
UND
-GENEN
AUS
C.
LANCEOLATA
52
3.3.
ISOLATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
CDNAS
FUER
DIE
GPDH
AUS
C.
LANCEOLATA
55
3.4.
BEISPIELE
ZUR
ANWENDUNG
DER
ISOLIERTEN
CDNAS
UND
GENE
IN
TRANSGENEN
PFLANZEN
58
3.4.1.
BESTIMMUNG
DER
SPEZIFITAET
VON
ACP-PROMOTOR
AUS
RAPS
58
3.4.2.
"SENSE
"
-
UND
"
ANTISENSE
'
'
-EXPRESSION
DER
BNACP
CDNA
IN
RAPS
59
4.
DISKUSSION
61
4.1.
GENTECHNISCHE
BAUSTEINE
FUER
DIE
PFLANZENZUECHTUNG
61
4.1.1.
TRANSFORMATION
61
4.1.2.
REGULATORISCHE
ELEMENTE
62
4.1.3.
CDNAS
UND
STRUKTURGENE
63
4.1.3.1.
WEGE
ZUR
ISOLATION
VON
CDNAS
UND
STRUKTURGENEN
63
4.1.3.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
ISOLIERTEN
CDNAS
UND
STRUKTURGENE
64
4.2.
ANWENDUNGSMOEGLICHKEITEN
DER
CDNAS
UND
GENE
70
SEITE
5.
ZUSAMMENFASSUNG
75
6.
SUMMARY
76
7.
SCHLUSSWORT
UND
AUSBLICK
77
7.
LITERATUR
78
ANHANG
A:
SEQUENZDATEN
UND
RESTRIKTIONSKARTEN
88
A-1
:
SEQUENZEN
DER
PCR-PRODUKTE
88
A-2:
SEQUENZEN
DER
CDNAS
97
A-3:
RESTRIKTIONSKARTEN
DER
GENOMISCHEN
KLONE
103
A-4:
SEQUENZEN
DER
GENOMISCHEN
KLONE
110 |
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