Die Flüssigkultur von Puccinia graminis f. sp. tritici, Rasse 32, als Modellsystem für die Interaktion eines obligaten Parasiten mit seinem Wirt:
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
DIE
WEIZEN/WEIZENSCHWARZROST-INTERAKTION
2
1.2
DIE
AXENISCHE
FLUESSIGKULTUR
7
1.3
PROBLEMSTELLUNG
8
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
13
2.1
WIRTSPFLANZEN
13
2.1.1
WEIZENSORTEN
13
2.1.2
PFLANZENANZUCHT
13
2.1.3
ANDERE
WIRTSPFLANZEN
14
2.2
PATHOGENE
15
2.2.1
HERKUNFT
UND
ANZUCHT
DES
WEIZENSCHWARZROSTES
15
2.2.2
ANDERE
ROSTARTEN
15
2.3
INOKULATION
DER
PFLANZEN
17
2.4
RE-INFEKTION
DER
PFLANZEN
MIT
AXENISCHEM
MYZEL
17
2.5
AXENISCHE
KULTUR
18
2.5.1
ANZUCHTMEDIUM
18
2.5.2
INOKULATION
UND
INKUBATION
DER
PETRISCHALEN
20
2.5.2.1
VORBEHANDLUNG
DER
UREDOSPOREN
20
2.5.2.2
INOKULATION
UND
INKUBATION
21
2.5.3
SUBKULTUR
22
2.5.4
APPLIKATION
VON
TESTLOESUNGEN
22
2.5.5
MYZELEMTE,
MYZELLAGERUNG
UND
TROCKENGEWICHTSBESTIMMUNG
23
2.5.6
PH-MESSUNGEN
23
2.5.7
PROTEINBESTIMMUNG
24
2.6
WEIZENZELLKULTUREN
UND
AXENISCHE
FLUESSIGKULTUR
24
2.7
INDUKTION
VON
INFEKTIONSSTRUKTUREN
25
2.7.1
DER
HITZESCHOCK
25
2.7.1.1
OPTIMIERUNG
DER
KONDITIONIERUNGSPERIODE
26
2.7.1.2
HITZESCHOCK-ZEITKURVE
26
2.7.2
POLYSTYROL-REPLICAS
26
2.7.2.1
STRUKTUR
DER
VERWENDETEN
POLYSTYROL-REPLICAS
26
2.7.2.2
HERSTELLUNG
VON
SILIKON-MATRIZEN
UND
POLYSTYROL-REPLICAS
28
2.7.2.3
BIOTEST
MIT
POLYSTYROL-REPLICAS
29
2.1.2.4
ZEITKURVE
FUER
POLYSTYROL-REPLICAS
29
2.7.3
FLUECHTIGE
BLATTSUBSTANZEN
(WIRTSFAKTOREN)
30
2.7.3.1
GEWINNUNG
DER
FLUECHTIGEN
BLATTSUBSTANZEN
30
2.7.3.2
BIOTEST
MIT
FLUECHTIGEN
BLATTSUBSTANZEN
31
2.7.3.3
BIOTEST
MIT
KAEUFLICHEN
BLATTALKOHOLEN
UND
-
ALDEHYDEN
31
2.7.4
DER
EPIKUTIKULARWACHSEXTRAKT
32
2.7.4.1
GEWINNUNG
DES
EPIKUTIKULARWACHSEXTRAKTES
33
2.7.4.2
SAEULENCHROMATOGRAPHISCHE
AUFTRENNUNG
DES
EPIKUTIKULARWACHSEXTRAKTES
33
2.7.4.3
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
34
2.7.4.4
GASCHROMATOGRAPHIE
36
2.7.4.5
BIOTEST
MIT
EPIKUTIKULARWACHSFTAKTIONEN
38
2.8
INDUKTION
VON
INFEKTIONSSTRUKTUREN
IN
VIVO
38
2.8.1
ZEITLICHE
AUFEINANDERFOLGE
DER
IN
VIVO
GEBILDETEN
INFEKTIONSSTRUKTUREN
38
2.9
MIKROSKOPIE
39
2.9.1
KEIM-UND
DIFFERENZIERUNGSRATE
39
2.9.2
FAERBEMETHODEN
40
2.9.2.1
KEMFAERBUNGEN
40
2.9.2.2
MYZELFAERBUNGEN
40
2.10
PHOTOGRAPHIE
42
3.
ERGEBNISSE
43
3.1
DIE
AXENISCHE
FLUESSIGKULTUR
DES
WEIZENSCHWARZROSTES
43
3.1.1
DIE
ENTWICKLUNG
DES
WEIZENSCHWARZROSTES
IN
AXENISCHER
FLUESSIGKULTUR
UNTER
44
OPTIMIERTEN
BEDINGUNGEN
3.1.2
DIE
KEMVERHAELTNISSE
DER
VERSCHIEDENEN
MYZELFORMEN
56
3.1.3
DAS
AXENISCHE
MYZEL
DER
FLUESSIGKULTUR
UND
DIE
WIRTSPFLANZE
59
3.1.3.1
DAS
INFEKTIONSVERMOEGEN
DER
VERSCHIEDENEN
MYZELFORMEN
59
3.1.4
AXENISCHE
KULTUR
UND
WEIZENZELLKULTUREN
67
3.1.5
AXENISCHE
KULTUR
MIT
VERSCHIEDENEN
ANDEREN
ROSTARTEN
74
3.2
DIE
AXENISCHE
FLUESSIGKULTUR
ALS
METHODE
ZUM
BIOTEST
79
3.2.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
POLYAMINSTOFFWECHSEL
79
3.2.1.1
DER
EINFLUSS
DER
POLYAMINE
PUTRESCIN,
SPERMIDIN
UND
SPERMIN
AUF
DIE
81
PILZENTWICKLUNG
IN
AXENISCHEM
FLUESSIGMEDIUM
3.2.1.2
DIE
WIRKUNG
DES
OMITHINDECARBOXYLASE-INHIBITORS
A-DFMO
85
3.2.1.3
DIE
WIRKUNG
DES
ARGININDECARBOXYLASE-INHIBITORS
A-DFMA
89
3.2.1.4
DIE
WIRKUNG
VON
A-DFMO
AUF
DIE
PILZENTWICKLUNG
BEI
GLEICHZEITIGER
93
ZUGABE
DER
POLYAMINE
PUTRESCIN,
SPERMIDIN
UND
SPERMIN
3.3
DIE
INDUKTION
VON
INFEKTIONSSTRUKTUREN
BEIM
WEIZENSCHWARZROST
98
3.3.1
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
BILDUNG
VON
INFEKTIONSSTRUKTUREN
IN
VIVO
98
3.3.2
DER
HITZESCHOCK
104
3.3.2.1
OPTIMIERUNG
DES
KONDITIONIERUNGSZEITPUNKTES
104
3.3.2.2
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
BILDUNG
VON
INFEKTONSSTRUKTUREN
NACH
HITZESCHOCK
106
INDUKTION
3.3.3
DEFINIERT
STRUKTURIERTE
OBERFLAECHEN
("WAFER
REPLICAS")
HO
3.3.3.1
DIE
DIFFERENZIERUNGSRATE
AUF
DEN
VERSCHIEDENEN
OBERFLAECHEN
110
3.3.3.2
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
BILDUNG
VON
INFEKTIONSSTRUKTUREN
AUF
INDUKTIVEN
114
OBERFLAECHEN
(MULTIPLEN
RIPPEN)
3.3.4
FLUECHTIGE
WIRTSFAKTOREN
117
3.3.4.1
SCREENING
NACH
AKTIVEN
FLUECHTIGEN
STANDARDSUBSTANZEN
117
3.3.4.2
FLUECHTIGE
SUBSTANZEN
AUS
WEIZENPFLANZEN
128
3.3.4.2.1
ANALYSE
ISOLIERTER
FLUECHTIGER
BLATTSUBSTANZEN
128
3.3.4.2.2
BIOTEST
MIT
ISOLIERTEN
FLUECHTIGEN
BLATTSUBSTANZEN
131
3.3.5
DER
EPIKUTIKULARWACHSEXTRAKT
132
3.3.5.1
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
DES
EPIKUTIKULARWACHSEXTRAKTES
OHNE
134
KOMBINATION
MIT
FLUECHTIGEN
SUBSTANZEN
3.3.5.2
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
DES
EPIKUTIKULARWACHSEXTRAKTES
IN
KOMBINATION
MIT
136
FLUECHTIGEN
INDUKTOREN
3.3.5.3
ANALYSE
DER
ZUSAMMENSETZUNG
DES
EPIKUTIKULARWACHSEXTRAKTES
140
3.3.5.4
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
EINZELNER
WACHSFRAKTIONEN
IN
KOMBINATION
MIT
151
ZRANS-2-HEXEN
1
-OL
3.3.5.5
CHEMISCHE
ANALYSE
DER
AKTIVEN
WACHSFRAKTION
155
3.3.6
KOMBINATION
VERSCHIEDENER
INDUKTOREN
159
3.3.6.1
KUENSTLICHE
OBERFLAECHEN
IN
KOMBINATION
MIT
FLUECHTIGEN
FAKTOREN
159
3.3.6.2
KUENSTLICHE
OBERFLAECHEN
IN
KOMBINATION
MIT
FLUECHTIGEN
UND
160
NICHT-FLUECHTIGEN
WIRTSFAKTOREN
4.
DISKUSSION
164
4.1
DIE
AXENISCHE
FLUESSIGKULTUR
ALS
MODELL-SYSTEM
FUER
DIE
INTERAKTION
EINES
OBLIGAT
164
BIOTROPHEN
PARASITEN
MIT
SEINEM
WIRT
4.1.1
DIE
ENTWICKLUNG DER
AXENISCHEN
FLUESSIGKULTUR
DES
WEIZENSCHWARZROSTES
-
164
EIN
RUECKBLICK
IN
DIE
GESCHICHTE
4.1.2
DIE
AXENISCHE
FLUESSIGKULTUR
ALS
IN
VIRRO-TESTSYSTEM
-
174
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
POLYAMINSTOFFWECHSEL
DES
WEIZENSCHWARZROSTES
4.1.3
MYZEL
DER
AXENISCHEN
FLUESSIGKULTUR
IM
VERGLEICH
ZUM
PARASITISCHEN
MYZEL
180
IM
BLATT
4.2
INDUKTION
VON
INFEKTIONSSTRUKTUREN
BEIM
WEIZENSCHWARZROST
186
4.2.1
DIE
SITUATION
IN
VIVO
186
4.2.2
DIE
SITUATION
IN
VITRO
191
4.2.3
DIE
DREI-FAKTOREN-HYPOTHESE
-
EIN
THEORETISCHES
MODELL
ZUM
VERSTAENDNIS
DER
201
PRIMAEREN
ERKENNUNGSPROZESSE
DER
WEIZEN/WEIZENSCHWARZROST-INTERAKTION
5.
ZUSAMMENFASSUNG
20S
6.
LITERATURVERZEICHNIS
208
7.
TABELLENANHANG
226 |
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