Die grossen Proteoglycane des kondylären Kiefergelenkknorpels: altersabhängige Veränderungen und knorpeltypische Besonderheiten
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1996
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| Beschreibung: | Leipzig, Univ., Diss., 1996 |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
VERZEICHNIS DER ABKUERZUNGEN 4
1. EINLEITUNG 5
11 KNORPELGEWEBE - EINE EINFUEHRUNG 5
12. DER KONDYLAERE KIEFERGELENKKNORPEL 6
12.1. ZUR BEDEUTUNG DES KONDYLAEREN KIEFERGELENKKNORPELS FUER DAS
UNTERKIEFERWACHSTUM 6
1.2.2. ENTWICKLUNG UND HISTOLOGIE IM VERGLEICH ZUM GELENKKNORPEL VON
ROEHRENKNOCHEN 7
1 2.3. ASPEKTE DER REGULATION DES KONDYLAEREN KNORPELWACHSTUM 10
13. ORGANI SATION DER EXTRAZELLULAEREN KNORPELMATRIX 12
14. DIE PROTEOGLYCANE 13
1.4.1. KLEINE INTERSTITIELLE UND ZELLASSOZIIERTE PROTEOGLYCANE 16
14.2. GROSSE AGGREGIERENDE PROTEOGLYCANE 17
1.4.2.1. STRUKTUR UND VORKOMMEN 17
1.4.2.2. TUMOVER 21
14.2.3. ALTERSABHAENGIGE VERAENDERUNGEN IN HYALINEM KNORPEL 22
2. ZIELSTELLUNG 24
3.
MATERIAL UND METHODEN 26
3.1. CHEMIKALIEN UND MATERIALIEN 26
3.2. SOFTWARE 28
3.3. UNTERSUCHUNGSMATERIAL 29
3.3.1. HERKUNFT DER KNORPELPROBEN 29
3.3.2. KNORPELPRAEPARATION 29
3.4. PRAEPARATIVE METHODEN 30
3.4.1. KNORPELEXTRAKTION 30
3.4.2. REINIGUNG DER GROSSEN PROTEOGLYCANE 3 0
3.4.21. C SCL-DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION 3 0
3.4.2 2. GELFILTRATION AN SEPHACRYL S-500 32
3.4.23. GLYCEROL-DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION 32
3.42.4. ELEKTROELUTION 32
3.4.3. HERSTELLUNG POLYKLONALER ANTIKOERPER 3 3
3.4.3.1. ANTIGENGEWINNUNG 33
3.4.3 2. IMMUNISIERUNG UND GEWINNUNG DER ANTISEREN 34
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.4.3 3. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE ANTIKOERPER-REINIGUNG 34
3.5. PROTEOGLYCAN-PROBENVORBEREITUNG FUER DIE ANALYTIK 35
3.5.1. ENTSALZUNG 35
3.51.1. PD-10-ENTSALZUNGSSAEULEN 3 5
35.1.2. ULTRAFILTRATION 35
3.5.13. MIKRO-DIALYSE 36
3.5.14. PRAEZIPITATION MIT ALCIAN-BLAU 36
3.5.15. ETHANOL-PRAEZIPITATION 37
3.5.2. DEGLYKOSILIERUNG 37
3 5.2.1. ENZYMATISCHE DEGLYKOSILIERUNG 3 7
3.5.2 2. CHEMISCHE DEGLYKOSILIERUNG 38
3.5.3. REDUKTION UND ALKYLIERUNG 3 8
3.5.4. PROTEOLYSE MIT PAPAIN 38
3.6. ANALYTISCHE METHODEN 38
3.6.1. GELFILTRATION AN SUPEROSE 12-HR 38
3.6.2. GELFILTRATION AN SEPHAROSE CL-2B 39
3.6.3. SDS-PAGE 39
3.6.4. AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE 41
3.6.5. WESTERN-BLOT 41
3.6.6. ELISA 42
3.6.7. IMMUNHISTOCHEMIE 43
3.6.8. BESTIMMUNG SULFATIERTER GAG MIT DMMB 43
3.6.9. PG-BESTIMMUNG MIT ALCIAN-BLAU 43
3.6.10. PROTEINBESTIMMUNG 44
3.6.11. AMINOSAEURE- UND HEXOSAMINANALYSEN 44
3.6.12. DISACCHARIDANALYSEN 44
3.6.13. N-TERMINALE SEQUENZIERUNG 45
4. ERGEBNISSE UND DISKUSSION
46
4.1. ALTERSABHAENGIGE VERAENDERUNGEN DER GROSSEN AGGREGIERENDEN PROTEO- 46
GLYCANE AUS DEM KONDYLAEREN KIEFERGELENKKNORPEL
4.1.1 VERTEILUNG VON PROTEOGLYCANEN IN CSCL-DICHTEGRADIENTEN 46
4.1.2. GROESSENVERTEILUNG DER PG-MONOMERE 48
4.1.3. GROESSENVERTEILUNG DER CHONDROITINSULFAT-SEITENKETTEN 50
4.1.4. AMINOSAEURE- UND HEXOSAMINANALYSEN 5 2
4.1.5. CHARAKTERISIERUNG DER COREPROTEINE DURCH SDS-PAGE
UND WESTERN-BLOT 55
4.1.6. CHARAKTERISIERUNG DER COREPROTEINE NACH SEQUENTIELLER
2
DEGLYKOSILIERUNG 57
4.1.7. DISACCHARIDANALYSEN 59
4.2. VERGLEICH DER GROSSEN PG DES CONDYLUS MANDIBULAE MIT DENEN
DES CONDYLUS FEMORIS UND DISCUS ARTICULARIS 62
4.2.1. TRENNUNG UND VERGLEICH DER LADUNGSDICHTEN VON PG
IN DISSOZIATIVEN CSCL-DICHTEGRADIENTEN 62
4.2 2. CHARAKTERISIERUNG DER GLYCOSAMINOGLYCANKETTEN DER PG 65
4.2.3. CHARAKTERISIERUNG DER PG-COREPROTEINE 71
4.3. REINIGUNG DES AGGRECAN UND VERSICAN-AEHNLICHEN PG AUS DEM
KIEFERGELENKKNORPEL DES HAUSSCHWEINS 78
4.3.1. REINIGUNG VON AGGRECAN 78
4.3.2. REINIGUNG DES VERSICAN-AEHNLICHEN PG 80
4.4 PRODUKTION POLYKLONALER ANTIKOERPER GEGEN AGGRECAN UND
"VERSICAN" DES KONDYLAEREN KIEFERGELENKKNORPELS 83
4.4.1. IMMUNISIERUNG, SERENGEWINNUNG UND CHARAKTERISIERUNG
DER ANTISEREN IM WESTERN-BLOT ~~ 83
4.4.2. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE REINIGUNG DER ANTIKOERPER 85
4.4.3. IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS VON AGGRECAN UND
"VERSICAN" IM KONDYLAEREN KIEFERGELENKKNORPEL 87
4.5. N-TERMINALE SEQUENZIERUNG DER AGGRECAN- UND "VERSICAN"-
COREPROTEINE 90
5.
ZUSAMMENFASSENDE DISKUSSION 92
5.1. ALTERSABHAENGIGE VERAENDERUNGEN DER GROSSEN PG AUS DEM
KONDYLAEREN KIEFERGELENKKNORPEL 92
5.2. BESONDERHEITEN DER GROSSEN PG AUS DEM KONDYLAEREN KIEFER
GELENKKNORPEL IM VERGLEICH ZU DENEN DES CONDYLUS FEMORIS
UND DISCUS ARTICULARIS 95
5.3. ISOLIERUNG DES AGGRECAN- UND VERSICAN-AEHNLICHEN PG AUS DEM
KIEFERGELENKKNORPEL DES HAUSSCHWEINS ZUR PRODUKTION POLYKLONALER
ANTIKOERPER UND BESTIMMUNG DER N-TERMINALEN AMINOSAEURE-SEQUENZ 98
LITERATURVERZEICHNIS
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