Aktivierung Klasse I Mhc und Klasse II Mhc restringierter T-Lymphozyten der Maus und der Ratte durch Klasse II Mhc präsentierte Superantigene:
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1.1. T-LYMPHOZYTEN UND IHRE FUNKTIONEN 1
12
DM VON MHC KODIERTEN MOLE- 2
KUELEN MIT DEM T-ZELLANTIGENREZEPTOR UND
DESSEN KOREZEPTOREN
1.2.1. DIE KLASSE I UND II MHC MOLEKUELE 3
1.2.2. DER T-ZELLANTIGENREZEPTOR 4
1.2.3. DIE CD4 UND CD8 KOREZEPTOREN 6
1.2.4. DIE GENERIERUNG DES T-ZELLREPERTOIRES 7
1.3. SUPERANTIGENE - 8
1.3.1. BAKTERIELLE SUPERANTIGENE 9
1.3.1.1. MOLEKULARE EIGENSCHAFTEN 10
1.3.1.2. PATHOPHYSIOLOGIE 10
1.3.2. VIRALE SUPERANTIGENE 11
1.3.2.1. DAS MOUSE MAMMARY TUMOR VIRUS UND SEIN SUPER- 12
ANTIGEN
1.3.2.2. MTV-SAG UND KRANKHEIT 13
1.3.3. DIE PRAESENTATION VON SUPERANTIGENEN 14
1.3.4. DIE INTERAKTION VON SUPERANTIGENEN UND T- 15
ZELLANTIGENREZEPTOR
1.3.5. SUPERANTIGENE ALS MODELLSUBSTANZEN 16
2.
MATERIAL UND METHODEN 18
2.1. TIERE 18
2.2. TOXINE UND MITOGENE 18
2.3. ZELLINIEN 18
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.4. ANALYSE DER EXPRESSION VON OBERFLAECHEN- 19
ANTIGENEN
2.5. ZELLZYKLUSANALYSE 20
2.6. ZELLPRAEPARATIONEN AUS PRIMAEREN LYMPHO- 20
ZYTEN
2.6.1. MAUSZELLEN 21
\
2.6.2. RATTENZELLEN 21
2.7. ZELLKULTUR UND HERSTELLUNG VON ZELLINIEN 21
2-8. INDUKTION DER IFNY PRODUKTION UND IFNY BE- 23
STIMMUNG
2.9. ZYTOLYSE TEST 23
2.10. MARKIERUNG LOESLICHER PROTEIN MIT BIOTIN 23
UND 125I
2.11. 125J MARKIERUNG VON ZELLOBERFLAECHENPRO- 24
TEINEN UND HERSTELLUNG VON ZELLEXTRAKTEN
2.12. AFFINITAETSREINIGUNG VON SE BINDENDEN 24
MOLEKUELEN UND ZELLOBERFLAECHENANTIGENEN
2.13. AFFINITAETSMARKIERUNG SEA BINDENDER ZELL- 25
OBERFLAECHENPROTEINE
2.14. SDS-POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE (SDS- 25
PAGE)
2.15. ISOLIERUNG VON NUKLEINSAEUREN 25
2.16. NACHWEIS VON KLASSE II MHC, IL-2 UND IFNY 26
MRNA DURCH NORTHERN BLOT ANALYSE
2.17. POLYMERASE KETTEN REAKTION (PCR) 26
2.18. KLONIERUNG VON PCR PRODUKTEN 26
2.19. DNA SEQUENZIERUNG 26
2.20. TYPISIERUNG DER TCRB-CL ALLELE 27
2.21. RNASE PROTEKTIONSTEST 27
3.
RESULTATE 28
3.1. DIE BINDUNG BAKTERIELLER SUPERANTIGENE AN 28
HUMANE KLASSSE II MHC MOLEKUELE
3.1.1. SEA UND SEB BINDEN AN HUMANE KLASSE II MHC, 28
NICHT JEDOCH AN KLASSE I MOLEKUELE
3.1.2. SE HABEN BINDUNGSPRAEFERENZEN FUER BESTIMMTE 29
KLASSE II MHC ISOTYPEN
3.1.3. EIN REKOMBINANTES C-TERMINALES FRAGMENT VON 30
SEA BINDET AN KLASSE II MHC
3.2. UNTERSUCHUNGEN ZUR CD8+ T-ZELLANTWORT 33
DER MAUS AUF SUPERANTIGENE
3.2.1. DIE
IN VITRO
AHTWORT VON CI)8+ T-ZELLEN AUF 33
KLASSE II MHC PRAESENTIERTE BAKTERIELLE
SUPERANTIGENE
3.2.1.1. SEB STIMULIERT CD4+ UND CD8+ T-ZELLEN TCRB-V SPEZIFISCH 33
3.2.1.2. DIE SEB SPEZIFISCHE ZYTOLYSE KLASSE II MHC POSITIVER ZIEL- 34
ZELLEN DURCH SEB STIMULIERTE CD8+ ZELLEN
3.2.1.3. DIE SE UND MAS ABHAENGIGE LYSE KLASSE II MHC POSITIVER 35
ZIELZELLEN DURCH KLASSE I MHC RESTRINGIERTE CTL KLONE
3.2.1.4. DIE SEB ABHAENGIGE LYSE IST VON DER EXPRESSION VON KLASSE 36
II MHC, NICHT ABER VON KLASSE I MHC MOLEKUELEN AUF DEN
ZIELZELLEN ABHAENGIG
3.2.1.5. CD3 UND LFA-1, ABER NICHT CD8 SPEZIFISCHE MAK INHIBIE- 37
REN DIE CD SPEZIFISCHE ZYTOTOXIZITAET
3.2.2. DIE SE ABHAENGIGE LYSE VON KLASSE II MHC NEGATI- 38
VEN ZIELZELLEN DURCH ZYTOLYTISCHE T-
LYMPHOZYTEN
3.2.2.1. NACHWEIS EINER SE SPEZIFISCHEN KLASSE II MHC UNABHAENGI- 38
GEN ZYTOLYSE
3.2.2.2. KLASSE II MHC POSITIVE UND KLASSE II MHC NEGATIVE ZIEL- 40
ZELLEN UNTERSCHEIDEN SICH IN DER RELATIVEN EFFIZIENZ DER
PRAESENTATION VERSCHIEDENER SE
40
3.2.23.
3.2.3.
3.23.1.
3.23.2.
3.23.3.
3.2.4.
3.2.4.1.
3.2.4.2.
3.2.43.
3.3.
3.3.1.
33.1.1.
33.1.2.
33.1.3.
33.1.4.
3.3.2.
DIE SEB UND SEC1 ABHAENGIGE LYSE KLASSE H MHC POSITIVER
UND KLASSE MHC II NEGATIVER ZIELZELLN WIRD VORWIEGEND
DURCH TCRB-V8 ZELLEN VERMITTELT
DIE
IN VITRO
ANTWORT VON CD8+ ZELLEN AUF VIRALE
SUPERANTIGENE
DISSOZIATION VON IFNY PRODUKTION UND ZYTOLYSE IN MLSL
A
AKTIVIERTEN CD8+ ZELLEN
MLSL
A UND SEB INDUZIEREN TCRB-V SPEZIFISCHE IFNY PRO
DUKTION, ABER NUR SEB INDUZIERT ZYTOLYSE
DIE DISSOZIATION VON IFNY PRODUKTION UND ZYTOLYSE IN
DER CD8+ T-ZELLANTWORT AUF MLSLA KANN NICHT DURCH NIED
RIGE SEB KONZENTRATIONEN SIMULIERT WERDEN
DIE
IN VIVO
ANTWORT VON CD4+ UND CD8+ ZELLEN
AUF BAKTERIELLE SUPERANTIGEIVE
SEB INDUZIERT PROLIFERATION VON CD4+ UND CD8+ ZELLEN
IN
VIVO
INDUKTION VON LYMPHOKIN MRNA
DIE ZYTOLYTISCHE AKTIVITAET
IN VIVO
INDUZIERTER ZELLEN
DIE SUPERANTIGENANTWORT UND DAS T-ZELL-
REPERTOIRE DER RATTE
DIE RATTEN T-ZELLANTWORT AUF VIRALE UND BAKTE
RIELLE SUPERANTIGENE
TCRB-V8.2 (R78+) RATTEN T-ZELLEN ERKENNEN DURCH
MFENSCH - UND MAUS KLASSE II MHC MOLEKUELE PRAESENTIERTES
MTV-7 SAG
TCRB-V16 ZELLEN ERKENNEN EIN NICHT IDENTIFIZIERTES SUPER
ANTIGEN AUF MAUS B-ZELLEN
DR1 TRANSFIZIERTE ZELLEN REKONSTITUIEREN DIE RATTEN T-
ZELLANTWORT AUF SEB
VERGLEICH DER CD4 - UND CD8 T-ZELLANTWORT AUF BAKTERIELLE
UND VIRALE SUPERANTIGENE
GENETISCHE GRUNDLAGEN DER STAMM SPEZIFISCHEN
UNTERSCHIEDE DER RATTEN TCRB-V8 ANTWORT AUF
SUPERANTIGENE
42
42
42
44
45
45
46
47
48
49
49
52
53
54
56
3.3.2.1.
3.3.2.2.
3.3.23.
3.3.2A.
3.3.23.
3.3.3.
3.3.4.
4.
4.1.
4.2.
4.3.
5.
6
.
7.
8
.
STAMMSPEZIFISCHE UNTERSCHIEDE IN DER ANTWORT VON TCRB-
V8.2/8.4 (R78+) ZELLEN AUF SEB UND MTV-7 SAG
IDENTIFIZIERUNG EINES NEUEN TCRB-V8 GENES (TCRB-8.4) IN
R78+ ZELLEN SAG REAKTIVER STAEMME
TCRB-V8.2 GENE IN DA UND LEW
DIE EXPRESSION VON TCRB-V8.2 UND TCRB-V8.4 IN R78+ ZEL
LEN VON LEW, DA UND (LEW X DA)FI
UNTERSCHIEDLICHE BENUTZUNG VON TCRB-V8.2DA UND TCRB-
V8.4 DURCH SUPERANTIGENREAKTIVE T-ZELLEN
DIE MOEGLICHE BEDEUTUNG DER CDR2 UND CDR4 BEI
DER BEVORZUGTEN SELEKTION DES TCRB-V8.4 IN CD4+
ZELLEN
TCRA-V8: DIE BEVORZUGTE BENUTZUNG EINES V
SEGMENTS IN EINER ANTIGENSPEZIFISCHEN
IMMUNANTWOTT
DISKUSSION
DIE KLASSE II MHC BINDUNG DER SUPER
ANTIGENE
DIE CD8+ T-ZELLANTWORT AUF SUPER ANTI
GENE
TCR-V SEGMENTE DER RATTE: IHRE BEDEU
TUNG FUER DIE T-ZELL-ANTWORT AUF SUPER-
ANTIGENE UND DIE AUSBILDUNG DES T-
ZPLLREPERTOIRES
ZUSAMMENFASSUNG
ITTER ATUR
ABKUERZUNGEN
DANKSAGUNG |
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