Entwicklung eines immunluminometrischen Assays zur Bestimmung von Thyreoglobulin im Serum:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1995
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4
1 ABKUERZUNGEN / ERLAEUTERUNGEN_6
2 EINLEITUNG UND FRAGESTELLUNG_7
2.1 ENTWICKLUNG EINES IMMUNLUMINOMETRISCHEN TESTS (ILMA) ZUR BESTIMMUNG
VON HTG.7
2.2 HUMAN- THYREOGLOBULIN (HTG) - DIAGNOSTISCHE BEDEUTUNG.9
2.3. PROBLEMATIK DER BESTIMMUNG VON HTG IN SERUMPROBEN.13
2.4 FRAGESTELLUNG:.18
3 MATERIAL UND METHODIK_19
3.1 METHODEN ZUR REINIGUNG UND KONZENTRIERUNG VON ANTIKOERPERN.19
3.1.1 AMMONIUMSULFATFAELLUNG ZUR GEWINNUNG VON IGG- FRAKTIONEN
.
19
3.1.2 MEMBRANZENTRIFUGATION
.
20
3.1.3 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.:.
20
3.2 HERSTELLUNG EINER TG- SAEULE.21
3.3 ARBEITSPROTOKOLL ZUR EINENGUNG VON TG.22
3.4 ARBEITSPROTOKOLL ZUR EINENGUNG VON POLYKLONALEN ANTI- HTG-
FRAKTIONEN.22
3.5 REINIGUNG OBER PROTEIN- A- BZW PROTEIN- G- SEPHAROSE- 4- SAEULEN.23
3.5.1 PROTEIN- A- REINIGUNG.
.
24
3.5.2 PROTEIN- G- REINIGUNG
.
25
3.6 HERSTELLUNG DER IGG- STANDARDS FUER DIE UV- SPEKTROPHOTOMETRISCHE
PROTEINBESTIMMUNG.25
3.7 HERSTELLUNG DES NULLMEDIUMS.26
3.8 HERSTELLUNG VON TG- STANDARDS.26
3.9 HERSTELLUNG DER FESTPHASEN.-.27
3.10 UV- SPEKTROPHOTOMETRISCHE PROTEINBESTIMMUNG.27
3.11 ACRIDINIUMESTERMARKIERUNG.28
3.12 AUFBAU EINES ELMA.28
3.12.1 SEQUENTIELLER ANSATZ:
.
28
3.12.2 CHEMOLUMINESZENZ.
.
29
3.12.3 ANSATZ IM AEQUILIBRIUM
.
29
3.12.4 ANSATZ MIT VORINKUBATION
.
30
3.13 HERSTELLUNG VON ANTISERENVERDUENNUNGEN.30
3.14 PRINZIP UND AUFBAU DES RIA.31
3.15 TG- RIA MIT WIEDERFINDEVERSUCH.32
3.16 MAK / TAK - ELISA.32
3.17 SDS- POLYACRYLAMIDGEL- ELEKTROPHORESE.33
3.18 HERSTELLUNG VON PUFFERN.34
3.18.1 BICARBONATPUFFER PH
=
9,5
.
34
3.18.2 PHOSPHATPUFFER PH = 7.4; 1/15 M
.
34
3.18.3 PHOSPHATPUFFER MIT PROTEIN
+
EDTA + NATRIUMAZID (PPPNE)
.
35
3.18.4 GLYCIN - HCL PUFFER
.I.
35
3.18.5 MAGNESIUMCHLORIDPUFFER; 3,5 M
.
35
3.19 MATERIAL.35
3.19.1 CHEMIKALIEN
.
35
3.19.2 EINMALARTIKEL
.
37
3.19.3 GERAETE
.
38
3.19.4 PROTEINE/ANTIKOERPER
.
39
3.19.5 MONOKLONALE ANTIKOERPER:
.
39
3.19.6 POLYKLONALE ANIKOERPER:
.
39
3.20 BEZUGSQUELLEN.40
4 VERSUCHSREIHEN UND ERGEBNISSE-43
4.1. VERGLEICH UND AUSTESTUNG DER ANTISEREN.43
4.1.1 VERGLEICH UND A USTESTUNG VERSCHIEDENER ANTISEREN VOM KANINCHEN
.
43
4.1.2 UNTERSUCHUNG DES MONOKLONALEN MAUSANTISERUMS AUF
FUNKTIONSTUECHTIGKEIT.
.
44
4.2 KONZENTRIERUNG DER ANTIKOERPER.45
4.2.1 WAHL DER TRENNSAEULEN
.
45
4.2.2 AMMONIUMSULFATFAELLUNG MIT ANSCHLIESSENDER DIALYSE
.
46
4.2.3 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE AUFTRENNUNG UEBER EINE SELBST
HERGESTELLTE TG - SAEULE
.
46
4.2.4 AUSWAHL DES BESTEN ELUTIONSMITTELS
.
47
4.2.5 REINHEITSUEBERPRUEFUNG MITTELS SDS- GELELEKTROPHORESE
.
48
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/947949054
5
4.3 FESTLEGUNG DER BELEGUNGSDICHTE.49
4.4 ERMITTLUNG DER IGG- KOPPLUNGSMENGE.50
4.5 STABILITAETSUNTERSUCHUNGEN.51
4.6. AUSTESTUNG VERSCHIEDENER ANTIKOERPERKOMBINATIONEN.52
4.6.1 HTG- STANDARDKURVEN MIT MONOKLONALEN ANTIKOERPERN ALS
DETEKTIONSSYSTEM
.52
4.6.2 HTG- STANDARDKURVEN MIT POLYKLONALEN ANTIKOERPERN ALS
DETEKTIONSSYSTEM.54
4.7 VERSUCH DER AUFKONZENTRIERUNG BEREITS MARKIERTER ANTIKOERPER.55
5 QUALITAETSKONTROLLE_57
5.1 VERGLEICH DER TESTSYSTEME YY KUGEL" UND YY ROEHRCHEN".57
5.1.1 VERGLEICH DER VARIATIONSKOEFFIZIENTEN.58
5.2 REDUKTION DER UNSPEZIFISCHEN BINDUNG.\.58
5.2.1 ZUSAETZE.59
5.2.2 ZUSAMMENSETZUNG DES NULLMEDIUMS.
.59
5.2.3 ABSAETTIGUNG DER FESTPHASE
.60
5.3 UNTERSUCHUNG DER REAKTIONSKINETIKEN.60
5.3.1 UNTERSUCHUNG DER REAKTIONSKINETIK - ERSTE PHASE.60
5.3.2 UNTERSUCHUNG DER REAKTIONSKINETIKEN - ZWEITE PHASE.63
5.4 VERHALTEN DER STANDARDKURVEN BEI 37 C UND UNTERSCHIEDLICHEN
INKUBATIONSZEITEN.67
5.5 VERGLEICH DERMEBPLAETZE.68
5.6 TESTOPTIMIERUNG.69
5.6.1 EFFEKT DER ACRIDINIUMMARKIERTEN ANTIKOERPERMENGE AUF DIE STEIGUNG
DER STANDARDKURVE
.69
5.6.2 VARIABLE PROBENMENGE.71
5.6.3 OPTIMIERUNG DES PROBENVOLUMENS.72
5.6.4 OPTIMIERUNG DER IMMUNGLOBULINKONZENTRATION FIIR DIE
ACRIDINIUMESTERKOPPLUNG.72
5.6.5 OPTIMIERUNG DES PUFFERZUSATZES.73
5.6 6 TESTANSATZ IM AEQUILIBRIUM.74
5.6.7 KINETIK NACH TESTOPTIMIERUNG.75
5.7. UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES DES TRACERALTERS AUF DIE
BINDUNGSEIGENSCHAFTEN.76
5.8 UNTERSUCHUNG ZUR MEBGENAUIGKEIT UND EMPFINDLICHKEIT.77
5.8.1 BESTIMMUNG DER INTRAASSAYVARIANZ:
.77
5.8.2 TESTEMPFINDLICHKEIT.78
5.8.3 BESTIMMUNG DER INTERASSAYVARIANZ
.78
5.9 HALTBARKEITSUNTERSUCHUNGEN.79
5.10 LINEARITAET.80
5.11 WIEDERFINDBARKEIT.83
5.12 KORRELATION DER IM IRMA UND ILMA GEMESSENEN WERTE.85
5.13 ERSTELLUNG DES NORMBEREICHS .86
5.14 FESTLEGUNG DER VERDUENNUNOSGRENZEN.86
5.15 PRUEFUNG AUF YYHIGH DOSE HOOK" - VERHALTEN:.87
5.16 RECOVERY - VERGLEICH.89
5.16.1 KORRELATION DER MESSWERTE VON TAK- POSITIVEN PROBEN IM "ILMA " UND
"IRMA "
.89
5.16.2 RECOVERY - VERGLEICH.90
5.16.3 RECOVERY VON VERDUENNUNGEN TAK- POSITIVER PROBEN.92
6 DISKUSSION_ 95
6.1 ILMA - EINE ALTERNATIVE ZU RADIOAKTIVEN MARKIERUNGSSUBSTANZEN.95
6.2 AUSWAHL DER ANTIKOERPER:.96
6.3 MINIMIERUNG DES PROBENVOLUMENS:.98
6.4 OPTIMALE KOPPLUNGSMENGE:.98
6.5 ANTIKOERPERREINIGUNG:.99
6.6 FESTLEGUNG DER INKUBATIONSDAUER / INKUBATIONSTEMPERATUR.99
6.7 FESTE PHASE.100
6.8 FESTLEGUNG DER STANDARDKONZENTRATIONEN.101
6.9 RECOVERY - VERGLEICH DES MONOKLONALEN IRMA- SYSTEMS VERSUS
POLYKLONALEM ILMA- SYSTEM . 101
7 ZUSAMMENFASSUNG-103
8 LITERATURVERZEICHNIS-105
8.1 TABELLARISCHER ANHANG.113
9 LEBENSLAUF.116 |
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