Isolierung, Charakterisierung und Immobilisierung einer Aminosäure-Racemase von Pseudomonas taetrolens ATCC 4683:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN.
8
2.1
MIKROORGANISMUS
.
8
2.2
CHEMIKALIEN
.
8
2.3
REAGENZIEN
UND
PUFFER
.
9
2.4
ZENTRIFUGE
UND
INKUBATIONSBLOCK
.
10
2.5
NAEHRMEDIEN
.
11
2.6
KULTURFUHRUNG
.
12
2.6.1
STAMMHALTUNG
.
12
2.6.2
SCHUETTELKULTUREN
.
12
2.6.3
ANZUCHT
IM
BIOREAKTOR
.
13
2.7
BESTIMMUNG
DER
AMINOSAEURE-RACEMASE-AKTIVITAET
.
15
2.7.1
AKTIVITAETSTEST
MIT
ENZYMLOESUNGEN
.
16
2.7.2
AKTIVITAETSTEST
MIT
IMMOBILISIERTEM
ENZYM
.
17
2.7.2.1
LAGERSTABIIITAET
DES
IMMOBILISIERTEN
ENZYMS
.
17
2.7.2.2
WIEDERVERWENDBARKEIT
DES
IMMOBILISIERTEN
ENZYMS
.
17
2.7.2.3
PH
UND
TEMPERATUROPTIMUM
DER
AN
FRACTOGEL
EMD
TMAE
GEBUNDENEN
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
18
2.8
ANALYTIK
.
18
2.8.1
BESTIMMUNG
VON
WACHSTUMSPARAMETEM
.
18
2.8.1.1
BESTIMMUNG
DER
OPTISCHEN
DICHTE
.
18
2.8.1.2
BESTIMMUNG
DER
BIOFEUCHT
(BFM)
UND
BIOTROCKENMASSE
(BTM)
.
19
2.8.1.3
COLORIMETRISCHE
AMMONIUMBESTIMMUNG
.
19
2.8.1.4
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
DER
C-QUELLE
IM
MEDIUM
.
19
2.8.1.6
BERECHNUNG
DER
MAXIMALEN
SPEZIFISCHEN
WACHSTUMSRATE,
PYYU,
.
21
2.8.1.7
BERECHNUNG
DES
ERTRAGSKOEFFIZIENTEN,
Y
X
.
21
2.8.2
PROTEINBESTIMMUNG
.
22
2.8.3
VISKOSITAETSMESSUNG
.
22
2.8.4
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
(DC)
.
22
2.8.5
DENSITOMETER
.
23
2.8.6
HOCHDRUCKFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE
(HPLC)
.
23
2.9
METHODEN
ZUR
ANREICHERUNG
UND
ISOLIERUNG
DER
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
24
2.9.1
ZELLAUFSCHLUSSMETHODEN
.
24
2
9.11
AUFSCHLUSS
MITTELS
ULTRASCHALL
.
25
2.9.1.2
AUFSCHLUSS
MITTELS
SCHWINGARMMUEHLE
MM
2
.
25
2.9.1.3
AUFSCHLUSS
MITTELS
RUHRWERKSKUGELMUEHLE
.
25
2.9.1.4
AUFSCHLUSS
MITTELS
FRENCH
PRESS
.
26
2.9.1.5
LYSOZYMAUFSCHLUSS
.
26
2.9.2
HITZEBEHANDLUNG
.
27
2.9.3
FAELLUNGEN
.
27
2.9.3.1
ISOPROPANOLFAELLUNG
.
27
2.9.3.2
PROTAMINSULFATFAELLUNG
.
28
2.9.3.3
FRAKTIONIERTE
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
.
28
2.9.4
DIALYSE
.
29
2.9.5
FILTRATION
.
29
2.9.5.1
MIKROFILTRATION
.
29
2.9.5.2
ULTRAFILTRATION
.
30
2.9.6
SAEULENCHROMATOGRAPHISCHE
PROTEINAUFREINIGUNG
.
30
2.9.6.1
FAST
PROTEIN
LIQUID
CHROMATOGRAPHY
(FPLC)
.
31
2.9.6.2
KONVENTIONELLE
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
.
31
2.9.7
LYOPHILISATION
.
32
2.10
ELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
ZUR
ENZYMCHARAKTERISIERUNG
.
32
2.10.1
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
(IEF)
.
33
2.10.2
SDS-GELELEKTROPHORESE
.
34
2.11
IMMOBILISIERUNG
DES
ENZYMS
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
35
3
ERGEBNISSE
.
37
3.1
KULTIVIERUNG
VON
PSEUDOMONAS
TAETROLENS
ATCC
4683
.
37
3.1.1
SCHUETTELKOLBENVERSUCHE
.
37
3.1.2
BATCH-KULTIVIERUNGEN
IM
50-LITER-BIOREAKTOR
.
39
3
2
AUFREINIGUNG
DER
AMINOSAURE-RACEMASE
.
45
3.2.1
VERSUCHE
ZUR
SCHLEIMABTRENNUNG
.
45
3.2.2
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
DESINTEGRATION
VON
P.
TAETROLENS
ATCC
4683
.
46
3.2.2.1
ULTRASCHALLAUFSCHLUSS
.
46
3.2.2.2
AUFSCHLUSS
MITTELS
SCHWINGARMMUHLE
MM
2
.
48
3.2.2.3
AUFSCHLUSS
MITTELS
DYNO
MILL
.
49
3
2.2.4
AUFSCHLUSS
MITTELS
FRENCH-PRESS
.
50
3.2.2.5
LYSOZYMAUFSCHLUSS
.
52
3.2.2
6
ZUSAMMENFASSUNG
DER
AUFSCHLUSSERGEBNISSE
.
53
3.2.3
HITZEBEHANDLUNG
.
54
3.2.4
FAELLUNGEN
.
55
3.2.4.1
ISOPROPANOL-FAELLUNG
.
55
3.2.4.2
PROTAMINSULFATFAELLUNG
.
56
3.2.4.4
FRAKTIONIERTE
AMMONIUMSULFATFALLUNG
.
57
3.2.5
ULTRAFILTRATION
.
59
3.2.6
SAEULENCHROMATOGRAPHISCHE
REINIGUNG
.
59
3.2.6.1
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
MIT
FRACTOGEL
EMD
TMAE-650(M)
.
59
3.2.6.2
HYDROPHOBE
INTERAKTIONSCHROMATOGRAPHIE
MIT
HILOAD
PHENYL
SEPHAROSE.
61
3.2.6.3
GELAUSSCHLUSSCHROMATOGRAPHIE
MIT
SUPEROSE
12
HR
10/30
.
63
3.2.6.4
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
MIT
MONO
Q
HR
5/5
.
64
3.2.7
ZUSAMMENFASSUNG
DER
AUFREINIGUNG
.
66
3.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
69
3.3.1
BESTIMMUNG
DES
ISOELEKTRISCHEN
PUNKTES
(PL)
.
69
3.3.2
BESTIMMUNG
DER
MOLMASSE
.
71
3.3.3
BESTIMMUNG
DER
UNTEREINHEITEN
.
72
3.3.4
PH-OPTIMUM
DER
ENZYMATISCHEN
REAKTION
.
74
3.3.5
TEMPERATUROPTIMUM
DER
ENZYMATISCHEN
REAKTION
.
75
3.3.6
STABILITAET
DER
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
75
3.3.6.1
PH-STABILITAET
.
75
3.3.6.2
TEMPERATURSTABILITAET
.
77
3.3.6.3
LAGERSTABILITAET
DER
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
79
3.3.6.4
LYOPHILISATION
.
80
3.3.7
EINFLUSS
VON
EFFEKTOREN
.
82
3.3.7.1
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
INHIBITOREN
UND
ADDITIVE
.
82
3.3.7
2
EINFLUSS
VON
VERSCHIEDENEN
COFAKTOREN
.
85
3.3.8
CHIRALTRENNUNG
ENANTIOMERER
AMINOSAEUREN
MITTELS
HPLC
.
88
3.3.9
QUALITATIVE
SUBSTRATSPEZIFITAET
DER
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
91
3.3.10
ENZYMKINETIK
.
93
3.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
IMMOBILISIERUNG
DER
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
101
3.4.1
IMMOBILISIERUNG
DES
ENZYMS
MITTELS
VERSCHIEDENER
TRAEGERMATERIALIEN
.
101
3.4.2
LAGERSTABILITAET
DER
IMMOBILISIERTEN
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
103
3.4.3
WIEDERVERWENDBARKEIT
DER
IMMOBILISIERTEN
AMINOSAEURE-RACEMASE
.
105
3.4.4
PH
UND
TEMPERATUROPTIMUM
DER
AN
FRACTOGEL
EMD-TMAE
GEBUNDENEN
AMI
NOSAEURE-RACEMASE
.
107
4
DISKUSSION
.
110
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
135
6
ABKUERZUNGEN
.
137
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
139 |
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| spelling | Likjono, Hanien Verfasser aut Isolierung, Charakterisierung und Immobilisierung einer Aminosäure-Racemase von Pseudomonas taetrolens ATCC 4683 von Hanien Likjono 1996 III, 146 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Braunschweig, Techn. Univ., Diss., 1996 Immobilisierung (DE-588)4123417-0 gnd rswk-swf Trägersubstanz (DE-588)4131813-4 gnd rswk-swf Pseudomonas taetrolens (DE-588)4353100-3 gnd rswk-swf Isolierung Chemie (DE-588)4122223-4 gnd rswk-swf Aminosäureracemase (DE-588)4416827-5 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Pseudomonas taetrolens (DE-588)4353100-3 s Aminosäureracemase (DE-588)4416827-5 s Isolierung Chemie (DE-588)4122223-4 s DE-604 Immobilisierung (DE-588)4123417-0 s Trägersubstanz (DE-588)4131813-4 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007280036&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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