Molekularbiologische und embryologische Charakterisierung von Pax9, einem Paired Box enthaltenden Entwicklungskontrollgen der Maus:
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| Veröffentlicht: |
1995
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1.
ZUSAMMENFASSUNG
1
2.
EINLEITUNG
UND
ZIELSETZUNG
.
.3
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
_
.
_
17
3.1.
MATERIALIEN
.
17
3.1.1.
MAUSSTAEMME
.
17
3.1.2.
HUEHNEREMBRYONEN
.
18
3.1.3.
BAKTERIENSTAEMME
.
18
3.1.4.
ZELL-LINIEN
.
18
3.1.5.
VEKTOREN
UND
KONSTRUKTE
.
19
3.1.6.
DNA-BANKEN
.
19
3.1.7.
PRIMER
.
20
3.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ARBEITSMETHODEN
.
21
3.2.1
DNA-PRAEPARATIONEN
.
21
3.2.1.1.
PLASMID
DNA
.
21
3.2.1.2.
X-PHAGEN
DNA
.
21
3.2.1.3.
GENOMISCHE
MAUS
DNA
.
22
3.2.2.
GENOTYPISIERUNGEN
.
22
3.2.3.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
23
3.2.4.
SOUTHERN
BLOTS
.
23
3.2.5.
ISOLIERUNG
VON
POLY(A)+
RNA
AUS
MAUSEMBRYONEN
UND
GEWEBEN
.
23
3.2.6.
NORTHERN
BLOTS
.
24
3.2.7.
RNASE
PROTECTION
ASSAYS
.
24
3.2.8.
HERSTELLUNG
EINER
CDNA-BANK
AUS
TAG
12.5-EMBRYO-KARKUS-RNA
.
25
3.2.9.
ISOLIERUNG
VON
CDNA-KLONEN
DES
PAX9-GENS
DER
MAUS
UND
DES
HUHNS
.
25
3.2.10.
HERSTELLUNG
VON
EXONUKLEASELH-DELETIONS
KLONEN
.
26
3.2.11.
SEQUENZIERUNG
VON
DOPPELSTRAENGIGER
PLASMID-DNA
.
26
3.2.12.
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHEN
PAX9-KLONEN
.
27
3.2.13.
HERSTELLUNG
DES
TARGETING-KONSTRUKTS
(PPAX9-KO3)
FUER
DAS
PAX9-GEN
.
27
3.2.14.
HERSTELLUNG
EINES
KONSTRUKTS
ZUR
OPTIMIERUNG
DES
PCR
SCREENINGS
FUER
DIE
IDENTIFIZIERUNG
VON
ES-ZELLKLONEN
MIT
EINEM
INAKTIVIERTEN
POX9-GEN
UND
OPTIMIERUNG
DER
PCR
.
28
3.2.15.
EXPRESSION
DER
PAX9
UND
PAXL-PROTEINE
IN
COS-7
ZELLEN
UND
WESTERN
BLOTTING
.
30
3.2.16.
GELRETARDIERUNGSEXPERIMENTE
.
31
3.3.
ES-ZELL-TECHNIK
.
31
3.3.1.
MATERIALIEN
UND
MEDIEN
.
31
3.3.2.
ANZUCHT
VON
FEEDERZELLEN
.
32
3.3.3.
KULTUR
VON
ES-ZELLEN
DER
LINIE
E14.1
.
33
3.3.4.
ELEKTROPORATION
.
33
3.3.5.
POSITIV-NEGATIV-SELEKTION
MIT
G418
UND
GANCYCLOVIR
.
34
3.3.6.
ISOLIERUNG
DER
UEBERLEBENDEN
KOLONIEN
UND
SCREENING
.
34
3.4.
HISTOLOGISCHE
METHODEN
UND
IN
SFTU-HYBRIDISIERUNGEN
.
36
3.4.1.
EINBETTUNG
VON
MAUSGEWEBEN
UND
EMBRYONEN
IN
PARAFFIN
.
36
3.4.2.
TESPA-BESCHICHTUNG
VON
OBJEKTTRAEGERN
.
36
3.4.3.
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
AN
PARAFFINSCHNITTEN
.
37
3.4.3.I.
IN
SITU-HYBRIDISIERUNGSSONDEN
.
37
3.4.3.2.
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
UNTER
VERWENDUNG
VON
35S-MARKIERTEN
RNA-SONDEN
.
38
3.4.3.3.
NICHTRADIOAKTIVE
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
UNTER
VERWENDUNG
VON
DIGOXIGENIN
ODER
FLUORESCEIN
MARKIERTEN
RNA-SONDEN
.
40
3.4.3.4.
ZWEI-FARBEN
IN
SITU-HYBRIDISIERUNGEN
MIT
ZWEI
VERSCHIEDENEN
SONDEN
.
42
3.4.4.
WHOLE
MOUNT
IN
SITU-HYBRIDISIERUNGEN
.
42
3.4.5.
HAEMATOXILIN-EOSIN-FAERBUNG
.
43
4.
ERGEBNISSE.YY.YY.44
4.1.
ISOLIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
VON
CDNA-KLONEN
DES
POX9-GENS
DER
MAUS
.
44
4.2.
ISOLIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
VON
CDNA-KLONEN
DES
POX9-GENS
DES
HUHNS
.48
4.3.
VERGLEICH
DER
PROTEINSEQUENZEN
VON
PAX9
UND
CHPAX9
MIT
DER
DES
MENSCHLICHEN
PAX9-PROTEINS
UND
DES
PAXL-PROTEINS
AUS
MAUS
UND
WACHTEL
.
50
4.4.
NACHWEIS
DER
DNA-BINDUNG
VON
PAX9
UND
VERGLEICH
MIT
PAXL
.
54
4.5.
DIE
EXPRESSION
VON
PAX9
IN
MAUSEMBRYONEN
UND
IN
ORGANEN
ADULTER
MAEUSE
.
57
4.5.1.
NACHWEIS
VON
PAX9-TRANSKRIPTEN
WAEHREND
DER
EMBRYOGENESE
UND
IM
THYMUS
ERWACHSENER
MAEUSE
.
57
4.5.2
UEBERBLICK
UEBER
DIE
EXPRESSIONSDOMAENEN
VON
PAX9
WAEHREND
DER
EMBRYONALENTWICKLUNG
DER
MAUS
UND
VERGLEICH
MIT
PAXL
.
58
4.5.3.
UEBERBLICK
UEBER
DIE
EXPRESSION
VON
CHPAX9
IN
HUENEREMBRYONEN
IM
STADIUM
18
.
63
4.5.4.
EXPRESSION
VON
PAXL
UND
PAX9
WAEHREND
DER
ENTWICKLUNG
DER
WIRBELSAEULE
.
64
4.5.5.
EXPRESSION
VON
PAX9
IN
DEN
EXTREMITAETENANLAGEN
.
71
4.5.6.
EXPRESSION
VON
PAX9
IN
DER
VORDERDARMREGION
.
75
4.5.6.1.
EXPRESSION
VON
PAX9
IM
VORDERDARM
UND
IN
DEN
SCHLUNDTASCHEN
.
76
4.5.6.2.
EXPRESSION
VON
PAX9
IN
DERIVATEN
DER
SCHLUNDTASCHEN
.
78
4.5.6.3.
EXPRESSION
VON
PAX9
IM
OESOPHAGUS
.
83
4.5.6.4.
EXPRESSION
VON
PAX9
IN
DER
ZUNGE
.
85
4.5.6.5.
EXPRESSION
VON
PAX9
IN
DEN
SPEICHELDRUESEN
.
89
4.5.7.
MESENCHYMALE
EXPRESSION
VON
PAX9
IM
BEREICH
DES
KOPFES
.
91
4.5.7.1.
PAX9
EXPRESSION
IM
BEREICH
DER
SPAETEREN
SCHAEDELBASIS
.
92
4.5.7.2.
EXPRESSION
VON
PAX9
WAEHREND
DER
ENTWICKLUNG
DER
NASE
UND
DES
VORDEREN
OBERKIEFERS
.
94
4.5.7.3.
EXPRESSION
VON
PAX9
WAEHREND
DER
ENTWICKLUNG
DES
SEKUNDAEREN
GAUMENS
.
97
4.5.8.
EXPRESSION
VON
PAX9
IN
MAUSMUTANTEN
.
101
4.5.8.I.
UNDULATED(UN)
.
101
4.5.8.2.
DANFORTH'S
SHORT-TAIL
(SD)
.
101
4.5.8.3.
ACRODYSPLASIA
(ADP):
EINE
TRANSGENINSERTIONSMUTATION
IN
DER
NAEHE
DES
PAX9-GENS
.
102
4.6.
ISOLIERUNG
UND
ANALYSE
VON
GENOMISCHEN
POX9-KLONEN
.
104
4.7.
HERSTELLUNG
EINES
KONSTRUKTES
ZUR
INAKTIVIERUNG
DES
PAX9-GENS
UEBER
HOMOLOGE
REKOMBINATION
IN
ES-ZELLEN
.
107
5.
DISKUSSION
.111
5.1.
DIE
PAX9-CDNA
.
111
5.2.
PAXL
UND
PAX9
SIND
PARALOGE
GENE
.
112
5.3.
DIE
KONSERVIERUNG
DER
PAIRED
DOMAENE
UND
DES
CARBOXYTERMINALEN
BEREICHS
IN
PARALOGEN
UND
HOMOLOGEN
PAX-PROTEINEN
.
114
5.4.
DIE
PAIRED
DOMAENE
ALS
DNA-BINDENDES
MOTIV
.
115
5.5.
DIE
CARBOXYTERMINALE
HAELFTE
DER
PAX-PROTEINE
.
118
5.6.
DIE
FUNKTIONEN
VON
PAXL
UND
PAX9:
IDENTISCH
ODER
VERSCHIEDEN?
.
119
5.7.
GIBT
ES
EIN
PAXLO-GEN
DER
MAUS?
.
121
5.8.
DIE
EXPRESSION
VON
PAX9
WAEHREND
DER
ENTWICKLUNG
DER
WIRBELSAEULE
DER
MAUS
-
VERGLEICH
MIT
DER
EXPRESSION
VON
PAXL
.
122
5.9.
DIE
BEDEUTUNG
DES
NOTOCHORDS
FUER
DIE
DORSOVENTRALE
POLARISIERUNG
DER
SOMITEN
UND
DESSEN
EINFLUSS
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
PAXL
UND
PAX9
.
126
5.10.
PAX9
-
EIN
SCHLUESSEL
ZUM
VERSTAENDNIS
DES
UNDULATED-PHENOTYPS?
.
130
5.11.
EXPRESSION
VON
PAX9
WAEHREND
DER
ENTWICKLUNG
DES
SCHWANZES
.
132
5.12.
EXPRESSION
VON
PAX9
WAEHREND
DER
ENTWICKLUNG
DER
EXTREMITAETEN
.
134
5.13.
DIE
EXPRESSION
VON
PAX9
IM
ENTODERM
DES
FRUEHEN
VORDERDARMS
.
137
5.14.
EXPRESSION
VON
PAX9
IN
DERIVATEN
DES
VORDERDARMS
.
137
5.14.1.
THYMUS
.
137
5.14.2.
PARATHYROIDEA
.
143
5.14.3.
ULTIMOBRANCHIALKOERPER
UND
THYROIDEA
.
144
5.14.4.
UNTERSCHIEDE
IN
DER
EXPRESSION
VON
PAXL
IN
MAUS
UND
HUEHNER
EMBRYONEN
-
KORRELATION
ZUM
UNTERSCHIEDLICHEN
URSPRUNG
DES
THYMUS
UND
DER
PARATHYROIDEA
IN
DIESEN
BEIDE
SPEZIES
.
145
5.14.5.
SPEICHELDRUESEN
.
146
5.14.6.
OESOPHAGUS
UND
ZUNGE
.
146
5.15.
EXPRESSION
VON
PAX9
IN
MESENCHYMALEN
GEWEBEN
IM
BEREICH
DES
KOPFES
.
148
5.15.1.
SCHAEDELBASIS
.
148
5.15.2.
NASE
UND
VORDERER
OBERKIEFER
.
149
5.15.3.
GAUMEN
.
150
5.15.4.
ZAHNANLAGEN
.
151
5.16.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
.
152
6.
LITERATUR
.
156 |
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| spelling | Neubüser, Annette Verfasser aut Molekularbiologische und embryologische Charakterisierung von Pax9, einem Paired Box enthaltenden Entwicklungskontrollgen der Maus von Annette Neubüser 1995 172 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 1995 Maus (DE-588)4169148-9 gnd rswk-swf Paarregel-Gen (DE-588)4429028-7 gnd rswk-swf Embryonalentwicklung (DE-588)4070792-1 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Maus (DE-588)4169148-9 s Embryonalentwicklung (DE-588)4070792-1 s Paarregel-Gen (DE-588)4429028-7 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007263422&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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