Entwicklung eines immunoluminometrischen Nachweisverfahrens für Parathyroid hormone-related Protein (PTH-related Protein, PTHrP):
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1995
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Beschreibung: | Heidelberg, Univ., Diss., 1996 (Nicht für den Austausch) |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.1
2. EINLEITUNG.3
2.1 DIE HYPERKALZAEMIE BEI MALIGNOMEN.3
2.2 DAS PTH - RELATED PROTEIN.5
2.3 MESSSYSTEME FUER PTHRP.8
2.4 THERAPEUTISCHE ANSAETZE ZUR BEHANDLUNG DER HHM.12
2.5 PHYSIOLOGISCHE FUNKTIONEN DES HORMONS PTHRP.13
YY PTHRP IN DER EMBRYOGENESP.14
YY PTHRP ALS ZELLULAERER WACHSTUMSFAKTOR.15
YY PTHRP ALS HORMON IM REPRODUKTIONSABLAUF.15
YY PTHRP ALS MEDIATOR DES EPITHELIALEN KALZIUMTRANSPORTS.17
YY PTHRP ALS MUSKELRELAXANS.17
3. ZIELSETZUNG DER ARBEIT.18
3.1 DIE ENTWICKLUNG EINES HOCHEMPFINDLICHEN MESSSYSTEMS ZUR
BESTIMMUNG VON PTHRP IN PATIENTENPLAESMA.18
3.2 DIE REINIGUNG DER ANTIKOERPER MIT HILFE DER
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE.18
3.3 DER EINSATZ EINES NICHTRADIOAKTIVEN MESSVERFAHRENS.19
4. MATERIAL UND METHODIK.20
4.1 MATERIAL.20
4.1.1 REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN.20
4.1.2 ANTISEREN, MONOKLONALE ANTIKOERPER UND
HORMONFRAGMENTE.22
4.1.3 SPEZIALARTIKEL.22
4.1.4 GERAETE.22
4.2 METHODEN.25
4.2.1 HERSTELLUNG DER LOESUNGEN UND PUFFER.25
4.2.2 ANTISEREN GEGEN PTHRP VON DER ZIEGE.28
4.2.3 TITERBESTIMMUNG DER ANTISEREN UND DER
REINIGUNGSFRAKTIONEN.28
4.2.4 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE.30
4.2.4.1 HERSTELLUNG DER SAEULENMATRIX.30
1. CNBR - AKTIVIERTE SEPHAROSE 4B.30
2. ECH - SEPHAROSE 4 B.31
3. EAH - SEPHAROSE 4 B.32
4. NHS - ACTIVATED SUPEROSE HR 10/2.33
4.2.4.2 ABLAEUFE DER ANTIKOERPERREINIGUNGEN.36
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
YY DIE MANUELLE AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE.36
YY DIE REINIGUNG MIT DER FPLC - ANLAGE.36
4.2.5 PROTEINBESTIMMUNGEN DER GEREINIGTEN FRAKTIONEN.38
4.2.6 ACRIDINIUMESTERMARKIERUNG DER ANTIKOERPER.39
4.2.7 IMMOBILISIERUNG DER ANTIKOERPER AN EINER FESTPHASE.40
4.2.8 HERSTELLUNG VON STANDARDS UND KONTROLLEN.42
4.2.9 ILMA PTHRP (1-86) STANDARDVORSCHRIFT ZUR
DURCHFUEHRUNG DER MESSUNG.42
4.2.10 KINETIK DES MESSSYSTEMS.43
4.2.11 QUALITAETSKONTROLLE DES MESSSYSTEMS ILMA PTHRP (1-
86).44
4.2.12 KONTROLLE DES ABBAUS VON PTHRP IN PATIENTENPROBEN.45
5. ERGEBNISSE.47
5.1 ROHANTISEREN GEGEN PTHRP.47
5.1.1 ANTI-PTHRP (1-34).3.47
5.1.2 ANTI-PTHRP (53-84).48
5.2 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE DER ANTISEREN.48
5.2.1 SAEULENMATRIZES FUER DIE MANUELLE
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE.48
5.2.2 SAEULENMATRIZES FUER DIE HALBAUTOMATISCHE
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE.50
5.2.3 ELUTIONSMETHODEN FUER DIE MANUELLE
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE.54
5.2.4 ELUTIONSMETHODEN FUER DIE HALBAUTOMATISCHE
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE.55
5.2.5 VERSCHIEDENE ANTISERUMVOLUMINA PRO REINIGUNGSLAUF.57
5.2.6 DIE ROUTINEMAESSIGE REINIGUNG VON ANTI-PTHRP (1-34).58
5.2.7 DIE ROUTINEMAESSIGE REINIGUNG VON ANTI-PTHRP (53-84).60
5.3 ACRIDINIUMESTERMARKIERUNG DER GEREINIGTEN ANTIKOERPER.62
5.3.1 DIE BIOLOGISCHE AKTIVITAET UND PROTEINKONZENTRATION DER
GEPOOLTEN ELUATE.62
5.3.2 DIE ACRIDINIUMESTERMARKIERUNG UND NACHFOLGENDE
ENDREINIGUNG DER ANTIKOERPER.64
5.4 HERSTELLUNG DER FESTPHASE.67
5.5 ILMA PTHRP (1-86) STANDARDKURVE.69
5.6 KINETIK DES MESSSYSTEMS.70
5.7 QUALITAETSKONTROLLE DES MESSSYSTEMS.72
INHALTSVERZEICHNIS
5.7.1 INTRA- UND INTERASSAYVARIANZ.72
5.7.2 COMPOUND - PRECISION - PROFILE.72
5.7.3 EMPFINDLICHKEIT (DETECTION LIMIT).73
5.7.4 KREUZREAKTIONEN.73
5.7.5 BEEINFLUSSUNG BEI NIERENINSUFFIZIENZ.73
5.8 ABBAU VON PTHRP (1-86) IN PLASMA UND SERUM.74
5.9 KLINISCHE ANWENDUNG.76
5.9.1 NORMALBEREICH. 76
5.9.2 PTHRP (1-86) BEI HHM.77
6. DISKUSSION.79
6.1 ALLGEMEINES.79
6.2 ISOLIERUNG DER ANTIKOERPER MITTELS AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE.80
6.3 MARKIERUNG DER ANTIKOERPER UND OPTIMIERUNG.84
6.4 HERSTELLUNG DER FESTPHASE UND OPTIMIERUNG.85
6.5 HERSTELLUNG DER STANDARDS UND KONTROEHSEREN.87
6.6 DER ILMA FUER PTHRP (1-86).88
6.7 KLINISCHE ANWENDBARKEIT DES ILMA.92
6.8 VERGLEICH MIT ANDEREN ASSAYS.93
6.9 ABSCHLIESSENDE BEWERTUNG.94
7. ZUSAMMENFASSUNG. 96
8. LITERATURVERZEICHNIS. 99
9. LEBENSLAUF.112
10. DANKSAGUNG.114 |
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