Identifizierung und Charakterisierung eines Di-Leucin-Internalisierungssignals im Interleukin-6-Signaltransduktor gp130:
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
Aachen
Mainz
1996
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Beschreibung: | Zugl.: Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 1996 |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
_
1
1.1
Z
YTOKINE
.
1
1.2
Z
YTOKIN
-R
EZEPTOREN
:
S
TRUKTUR
UND
F
UNKTION
.
1
1.3
I
NTERLEUKIN
-6:
S
TRUKTUR
UND
F
UNKTION
.
4
1.4
D
ER
I
NTERLEUKIN
-6-R
EZEPTORKOMPLEX
:
S
TRUKTUR
UND
S
IGNALTRANSDUKTION
.
4
1.5
D
IE
R
EZEPTOR
-
VERMITTELTE
E
NDOZYTOSE
.
6
1.6
Z
IELSETZUNG
DER
A
RBEIT
.
10
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
12
2.1
C
HEMIKALIEN
.
12
2.2
P
LASMIDE
.
13
2.3
P
ROKARYONTISCHE
Z
ELLEN
UND
DEREN
K
ULTIVIERUNG
.
13
2.4
E
UKARYONTISCHE
Z
ELLEN
UND
DEREN
K
ULTIVIERUNG
.
14
2.5
T
RANSAKTION
EUKARYONTISCHER
Z
ELLEN
.
15
2.6
P
LASMIDPRAEPARATION
UND
A
NALYSE
VON
P
LASMIDEN
.
15
2.6.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
BAKTERIEN
.
15
2.6.2
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
.
15
2.6.3
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
16
2.6.4
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
VON
DNA
.
16
2.6.5
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
16
2.6.6
ANALYSE
VON
DNA
UEBER
AGAROSE-GELE
.
16
2.6.7
ANALYSE
VON
DNA
UEBER
NICHT-DENATURIERENDE
POLYACRYLAMIDGELE
.
17
2.6.8
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSE-GELEN
.
17
2.6.9
ELUTION
KURZER
DNA-FRAGMENTE
AUS
PAA-GELEN
.
17
2.6.10
LIGATION
.
18
2.7
H
ERSTELLUNG
SYNTHETISCHER
O
UGONUKLEOTIDE
.
18
2.8
E
RZEUGUNG
VON
P
UKTMUTATIONEN
.
19
2.9
P
OLYMERASE
-K
ETTEN
-R
EAKTION
(PCR)
.
19
2.10
E
XPRESSION
DES
IL-6
R
EZEPTORS
(IL-6R)
IN
COS-7
Z
ELLEN
.
19
2.10.1
HERSTELLUNG
DES
IL-6R
EXPRESSIONSVEKTORS
.
19
2.10.1
KONSTRUKTION
DER
IL-6R
MUTANTE
IL-6RA82
.
19
2.11
E
XPRESSION
VON
GP
130
IN
COS-7
Z
ELLEN
.
20
2.11.1
HERSTELLUNG
VERSCHIEDENER
GPL
30
DELETIONSMUTANTEN
.
20
N
INHALTSVERZEICHNIS
2.11.2
KONSTRUKTION
VERSCHIEDENER
GPL30
PUNKTMUTANTEN
.
21
2.12
D
ARSTELLUNG
DER
T
AC
-C
HIMAEREN
(T
AC
-STQPLL/
T
AC
-STQPAA)
.
22
2.13
DNA-S
EQUENZIERUNG
.
23
2.14
M
ETABOLISCHE
M
ARKIERUNG
MIT
ANSCHLIESSENDER
I
MMUNPRAEZIPITATION
.
23
2.15
D
ISKONTINUIERLICHE
SDS-P
OLY
ACRYLAMID
-G
ELELEKTROPHORESE
.
24
2.17
K
OMPETITIONSSTUDIEN
.
24
2.18
I
NTERNALISIERUNGSSTUDIEN
.
25
2.19
B
ESTIMMUNG
DER
INTERNALISIERUNGSRATEN
-
KONSTANTE
.
25
2.20
I
NDIREKTE
I
MMUNFLUORESZENZ
.
26
2.21
K
ONFOKALE
L
ASER
-S
CAN
-M
IKROSKOPIE
.
26
2.22
B
ESTIMMUNG
DER
P
HOSPHATIDYLINOSITOL
-3-K
INASE
A
KTIVITAET
.
30
2.23
I
MMUNOBLOT
(ECL)
.
28
3
ERGEBNISSE
----------------------------------------------------------------------------------------------
29
3.1
E
XPRESSION
DES
L
NTERLEUKIN
-6
R
EZEPTORKOMPLEXES
IN
COS-7
Z
ELLEN
.
29
3.1.1
TRANSFEKTION
VON
COS-7
ZELLEN
MIT
DEN
BEIDEN
UNTEREINHEITEN
DES
IL-6
REZEPTORKOMPLEXES
.
29
3.1.2
KONSTRUKTION
DER
VERSCHIEDENEN
DELETIONSMUTANTEN
DES
IL-6R
UND
DES
SIGNALSTRANSDUKTORS
GP!30.
.
29
3.1.3
NACHWEIS
DER
EXPRESSION
DER
IL-6R
UND
GPL30
WILDTYP-PROTEINE
SOWIE
DER
VERSCHIEDENEN
MUTANTEN
.
30
3.2
D
IE
ZYTOPLASMATISCHE
D
OMAENE
DES
S
IGNALTRANSDUKTORS
GP
130
IST
NOTWENDIG
FUER
EINE
EFFIZIENTE
I
NTERNALISIERUNG
VON
IL-6
.
33
3.3
D
IE
D
ELETION
DER
ZYTOPLASMATISCHEN
D
OMAENE
DES
IL-6R
ODER
DES
GPL
30
HAT
KEINEN
ELNFLUB
AUF
DIE
BINDUNGSAFFINITAET
.
34
3.4
L
OKALISIERUNG
EINER
ZYTOPLASMATISCHEN
,
ZEHN
A
MINOSAEUREN
LANGEN
R
EGION
IM
GP
130,
DIE
EINE
EFFIZIENTE
E
NDOZYTOSE
VOM
IL-6
VERMITTELT
.
36
3.5
I
DENTIFIZIERUNG
EINES
D
I
-L
EUCIN
I
NTERNALISIERUNGSMOTIVS
.
37
3.6
L
EUCIN
145
IST
ABSOLUT
ESSENTIELL
FUER
DIE
F
UNKTION
DES
I
NTERNALISIERUNGSSIGNALS
.
40
3.7
D
AS
D
I
-L
EUCIN
-M
OTIV
VERMITTELT
NEBEN
DER
E
NDOZYTOSE
AUCH
DEN
T
RANSPORT
ZU
DEN
L
YSOSOMEN
.
41
3.8
D
IE
D
I
-L
EUCIN
-M
UTANTE
(LI
45/
146A)
WIRD
IN
DER
G
EGENWART
VON
IL-6
LANGSAMER
DEGRADIERT
ALS
DER
WLLDTYP
.
44
INHALTSVERZEICHNIS
FFL
3.9
S
ERIN
139
N
TERMINAL
DES
D
I
-L
EUCIN
-M
OTIVS
IST
FUER
EINE
SCHNELLE
I
NTERNALISIERUNG
NOTWENDIG
.
45
3.10
M
OEGLICHE
B
EDEUTUNG
DER
P
HOSPHATIDYLINOSITOL
-3-K
INASE
FUER
DIE
I
NTERNALISIERUNG
VON
IL-6-R
EZEPTORKOMPLEXEN
.
48
3.10.1
MESSUNG
EINER
GESTEIGERTEN
PI-3-K
AKTIVITAET
NACH
PDGF
STIMULATION,
NICHT
ABER
NACH
IL-6
STIMULATION
.
49
3.10.2
KEINE
ASSOZIATION
DER
PI-3-K
MIT
DEM
SIGNALTRANSDUKTOR
GP!30
.
49
3.10.3
KEINE
INHIBITION
DER
IL-6
INTERNALISIERUNG DURCH
DEN
WIRKSTOFF
WORTMANNIN
.
51
4
DISKUSSION
.
53
5
AUSBLICK
62
5.1
D
ER
I
NTERNALISIERUNGSMECHANISMUS
.
62
5.2
F
UNKTIONALE
V
ERKNUEPFUNG
VON
S
IGNALTRANSDUKTION
UND
E
NDOZYTOSE
.
64
6
ZUSAMMENFASSUNG
_
66
7
LITERATUR
_
67
ANHANG
_
.79
A
BKUERZUNGEN
.
79 |
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spelling | Dittrich, Elke Verfasser aut Identifizierung und Charakterisierung eines Di-Leucin-Internalisierungssignals im Interleukin-6-Signaltransduktor gp130 Elke Dittrich 1. Aufl. Aachen Mainz 1996 III, 81 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Zugl.: Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 1996 Internalisierung Molekularbiologie (DE-588)4445525-2 gnd rswk-swf Endocytose (DE-588)4152168-7 gnd rswk-swf Rezeptor (DE-588)4049722-7 gnd rswk-swf Signaltransduktion (DE-588)4318717-1 gnd rswk-swf Interleukin 6 (DE-588)4246734-2 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Interleukin 6 (DE-588)4246734-2 s Internalisierung Molekularbiologie (DE-588)4445525-2 s Signaltransduktion (DE-588)4318717-1 s DE-604 Rezeptor (DE-588)4049722-7 s Endocytose (DE-588)4152168-7 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=007232287&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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