Nachweis des aviären Adeno-assoziierten Virus mit Hilfe der Polymerase-Kettenreaktion:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 95 S. Ill., graph. Darst. |
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Datensatz im Suchindex
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INHALTSVERZEICHNIS
5
ABKUERZUNGEN
8
EINLEITUNG
10
MATERIAL
UND
METHODEN
18
1.0
AVIAERES
ADENO-ASSOZIIERTES
VIRUS
(AAAV)
18
2.0
ZELLEN
UND
ZELLKULTUREN
18
2.1
PRIMAERE
ZELLKULTUREN
18
2.1.1
HUEHNEREMBRYOFIBROBLASTEN
(HEF)-KULTUREN
18
2.1.2
KUEKENNIEREN
(KN)-KULTUREN
19
2.1.3
HUEHNEREMBRYONIEREN
(HEN)-KULTUREN
19
2
1.4
HUEHNEREMBRYOLEBER
(HEL)-KULTUREN
19
2.2
PERMANENTE
ZELLINIEN
20
2.2.1
KONTROLLZELLEN
20
2.2.2
MAREK-VIRUS
(MAREK'S
DISEASE
VIRUS,
MDV)-TRANSFORMIERTE
ZELLINIEN
20
2.2.3
CHEMISCH
TRANSFORMIERTE
ZELLINIE
22
3.0
ORGANPRAEPARATION
23
3.1
LYMPHOZYTENGEWINNUNG
UND-PRAEPARATION
23
3.2
ORGANMATERIAL
23
4.0
DNS-PRAEPARATION
24
4
1
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
DER
AAAV-DNS
24
4.2
PRAEPARATION
VON
VIRUS-DNS
25
4.3
AUFBEREITUNG
UND
DNS-GEWINNUNG
VON
GEWEBEPROBEN,
ZELLKULTUREN
UND
LYMPHOZYTEN
25
4.3.1
AUFBEREITUNG
DER
GEWEBEPROBEN
25
4.3.2
PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTIONSMETHODE
FUER
GEWEBE
26
4.3.3
PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTIONSMETHODE
FUER
ZELLKULTUREN
26
4.3.4
DNS-EXTRAKTIONSMETHODE
MIT
EINEM
KOMMERZIELLEN
DNS-EXTRAKTIONSKIT
27
5.0
IMMUNFLUORESZENZTEST
28
6.0
INFEKTION
VON
ZELLKULTUREN
28
6
I
NHALTSVERZEICHNIS
7.0
POLYMERASE-KETTENREAKTION
29
7.1
DURCHFUEHRUNG
DER
PCR
MIT
DEN
PRIMERN
AUS
DER
CAP-REGION
32
7.1.1
REAKTIONSBEDINGUNGEN
BEI
DER
PRIMAERAMPLIFIKATION
MIT
DEM
PRIMERPAAR
PR6/PR1
3
32
7.1.2
REAKTIONSBEDINGUNGEN
BEI
DER
HEMI
NESTED
PCR
MIT
DEM
PRIMERPAAR
P
R
1
2/PR1
3
33
7.2
DURCHFUEHRUNG
DER
PCR
MIT
DEN
PRIMERN
AUS
DER
REP-REGION
34
8.0
ANALYSE
DER
AMPLIFIKATE
IN
DER
GELELEKTROPHORESE
34
9.0
ANALYSE
DER
AMPLIFIKATE
IN
EINEM
NICHT-RADIOAKTIVEN
SOUTHERN
BLOT
35
10.0
ANALYSE
GENOMISCHER
DNS
DURCH
SOUTHERN
BLOT-HYBRIDISIERUNG
36
11.0
DNS-SEQUENZANALYSE
37
VERSUCHSERGEBNISSE
42
1.0
ETABLIERUNG
DER
PCR
MIT
EXTRAHIERTER
VIRALER
DNS
43
1.1
ANALYSE
DER
AMPLIFIKATE
DURCH
SOUTHERN
BLOT-HYBRIDISIERUNG
45
2.0
ETABLIERUNG
DER
PCR
MIT
EXTRAHIERTER
ZELLULAERER
DNS
46
2.1
PRIMAERAMPLIFIKATION
MIT
DEN
PRIMERN
AUS
DER
KAPSIDREGION
(PR6/PR13)
46
2.1.11
SEPARATION
GENOMISCHER
LEBER-DNS
IM
AGAROSEGEL
47
2.1.2
PRIMER-UND
DNTP-KONZENTRATIONEN
48
2.1.3
MAGNESIUMIONEN
49
2.1.4
TAQ-POLYMERASE
50
2.1.5
THERMOCYCLERBEDINGUNGEN
51
2.1.5.1
DENATURIERUNGSTEMPERATUR
UND-ZEIT
51
2.1.5.2
ANLAGERUNGSTEMPERATUR
UND-ZEIT
52
2.1.5.3
KETTENVERLAENGERUNGSTEMPERATUR
UND-ZEIT
53
2.1.5.4
ZYKLENZAHL
53
2.2
PRIMAERAMPLIFIKATION
MIT
DEN
PRIMERN
AUS
DER
NICHTSTRUKTURPROTEINREGION
(PR2/PR3)
54
3.0
MODIFIKATIONEN
DER
PCR
(REAMPLIFIKATION,
HEMI
NESTED
UND
NESTED
PCR)
56
3.1
REAMPLIFIKATION
56
3.2
HEMI
NESTED
UND
NESTED
PCR
57
3.2.1
HEMI
NESTED
PCR
MIT
DEN
PRIMERN
AUS
DER
CAP-REGION
57
3.2.1.1
PRIMERKONZENTRATION
58
I
NHALTSVERZEICHNIS
7
3.2.1.2
THERMOCYCLERBEDINGUNGEN
59
3.2.2
NESTED
PCR
MIT
PRIMERN
AUS
DER
REP-REGION
59
4.0
UEBERPRUEFUNG
VON
SPF-ZELLKULTUREN
ZUR
ERMITTLUNG
EINER
AAAV
INTEGRATION
61
4.1
UEBERPRUEFUNG
VON
PRIMAEREN
HUEHNERZELLKULTUREN
AUS
SPF-TIEREN
ZUR
ERMITTLUNG
EINER
AAAV-INTEGRATION
61
4.2
UEBERPRUEFUNG
VON
ORGANEN
UND
PERIPHEREN
BLUTLYMPHOZYTEN
AUS
SPF-TIEREN
ZUR
ERMITTLUNG
EINER
AAAV-INTEGRATION
61
4.3
UEBERPRUEFUNG
VON
ORGANEN
AUS
FELDINFIZIERTEN
(ADENOVIRUS-INFIZIERTEN)
TIEREN
ZUR
ERMITTLUNG
EINER
AAAV-INTEGRATION
63
4.4
UEBERPRUEFUNG
VON
ZELLINIEN
ZUR
ERMITTLUNG
EINER
AAAV-INTEGRATION
63
4.4.1
KONTROLLZELLINIEN
63
4.4.2
CHEMISCH
TRANSFORMIERTE
ZELLINIE
64
4.4.2.1
NACHWEIS
VON
AAAV-DNS
NACH
BEIMPFUNG
VON
QT35-ZELLEN
64
4.4.3
MDV-TRANSFORMIERTE
ZELLINIEN
66
4.4.4
RETROVIRAL-TRANSFORMIERTE
ZELLINIE
66
5.0
GENOMISCHER
SOUTHERN
BLOT
67
6.0
DNS-SEQUENZANALYSE
69
DISKUSSION
70
ZUSAMMENFASSUNG
81
SUMMARY
82
LITERATURVERZEICHNIS
83 |
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| author | Kalvelage, Elke |
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