Untersuchungen an der Membran experimentell veränderter und genetisch defekter Erythrozyten bei hereditärer Sphärozytose sowie an Erythrozyten unter hochdosierter Methotrexattherapie:
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1995
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Beschreibung: | Jena, Univ., Diss., 1995 |
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GLIEDERUNG:
SEITE
1. EINLEITUNG 4
2. PROBLEMSTELLUNG 6
3. MATERIAL UND METHODEN 7
3.1 UNTERSUCHUNGSMATERIAL 7
3.2 HERSTELLUNG LEUKOZYTENARMER ERYTHROZYTENSUSPENSIONEN DURCH 7
ENTFERNUNG DES BUFFY-COATS
3.3 HERSTELLUNG EINER STANDARDISIERTEN ERYTHROZYTENSUSPENSION 7
3.4 EXPERIMENTELLE ALTERATIONEN AN ERYTHROZYTEN 7
3.4.1 VARIATION DES PH-WERTES 7
3.4.2 VERAENDERUNG DER OSMOLARITAET 7
3.4.3 BEHANDLUNG MIT AMPHIPATEN 8
3.4.4 BEHANDLUNG MIT DIAMID 8
3.4.5 BEHANDLUNG MIT NATRIUMFLUORID 8
3.4.6 ALTERATIONEN MIT PROTEASEN 8
3.4.6.1 ALTERATION MIT PRONASE 8
3.4.6.2 ALTERATION DURCH TRYPSIN 9
3.4.6.3 ALTERATION DURCH CHYMOTRYPSIN 9
3.5 ULTRAZENTRIFUGATION NACH MURPHY 9
3.6 UNTERSUCHUNGSVERFAHREN 9
3.6.1 FORMENANALYSE DER ERYTHROZYTEN 9
3.6.2 ERMITTLUNG EINER PRICE-JONES-KURVE 9
3.6.3 CHARAKTERISIERUNG DER MEMBRANFLUIDITAET MITTELS 10
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
3.6.3.1 FLUORESZENZMIKROSKOPIE MIT MEROCYANIN 540 10
3.6.3.2 FLUORESZENZMIKROSKOPIE MIT ANILINBLAU 10
3.6.4 ERFASSUNG VON AENDERUNGEN DER GLYKOKALYXSTRUKTUR MIT HILFE 11
DER TOPO-OPTISCHEN TOLUIDINBLAUREAKTION NACH ROMHANYI UND
DEAK
3.6.5 DENSITOMETRISCHE BESTIMMUNG DER IGG-BINDUNG 11
3.6.6 NACHWEIS VON VERAENDERUNGEN DES MEMBRANSKELETTS MITTELS 12
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE NACH DOUCET
3.6.6.1 HERSTELLUNG VON SAPONIN-SCHATTEN 12
3.6.6.2 HERSTELLUNG DES ELEKTROPHORESEGELS UND DURCHFUEHRUNG DER 13
ELEKTROPHORESE
3.6.7 BESTIMMUNG DES BANDE-3-GEHALTS DER ERYTHROZYTEN MITTELS 13
IMMUNOBLOT
3.7 GERAETE UND REAGENZIEN 15
3.8 STATISTISCHE METHODEN 17
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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4. ERGEBNISSE 18
4.1 ERGEBNISSE DER FLUORESZENZMIKROSKOPISCHEN UNTERSUCHUNGEN 18
4.1.1 FLUORESZENZMIKROSKOPISCHES VERHALTEN BIOLOGISCH JUNGER UND 18
GEALTETER SOWIE EXPERIMENTELL ALTERIERTER ERYTHROZYTEN
4.1.2 FLUORESZENZMIKROSKOPISCHES VERHALTEN DER ERYTHROZYTEN BEI 25
HEREDITAERER SPHAEROZYTOSE
4.1.3 FLUORESZENZMIKROSKOPISCHES VERHALTEN DER ROTEN BITUZELLE BEI 27
CHEMOTHERAPIE
4.2 EXPRESSION DER IGG-REZEPTOREN 31
4.2.1 IGG-BINDUNGSDICHTE EXPERIMENTELL ALTERIERTER ERYTHROZYTEN 31
4.2.2 EXPRESSION VON IGG-REZEPTOREN BEI HEREDITAERER SPHAEROZYTOSE 34
4.2.3 EXPRESSION VON IGG-REZEPTOREN BEI HOCHDOSIERTER 35
METHOTREXATBEHANDLUNG
4.3 TOPO-OPTISCHE ERGEBNISSE 37
4.3.1 TOPO-OPTISCHES VERHALTEN EXPERIMENTELL ALTERIERTER 37
ERYTHROZYTEN
4.3.2 TOPO-OPTISCHES VERHALTEN DER ERYTHROZYTEN BEI HEREDITAERER 41
SPHAEROZYTOSE
4.3.3 TOPO-OPTISCHES VERHALTEN DER ERYTHROZYTEN BEI HOCHDOSIERTER 42
METHOTREXATBEHANDLUNG
4.4 VERAENDERUNGEN AM MEMBRANSKELETT DER ERYTHROZYTEN 45
4.4.1 ZUSTAND DES MEMBRANSKELETTS BIOLOGISCH JUNGER UND GEALTETER 45
SOWIE EXPERIMENTELL GESCHAEDIGTER ERYTHROZYTEN
4.4.2 AUSWERTUNG DER SDS-GELELEKTROPHORESE BEI HEREDITAERER 47
SPHAEROZYTOSE
4.4.3 AUSWERTUNG DER SDS-GELELEKTROPHORESE BEI PATIENTEN UNTER 50
CHEMOTHERAPIE
4.5 ERGEBNISSE AM IMMUNOBLOT 55
4.5.1 IMMUNOBLOT BEI HEREDITAERER SPHAEROZYTOSE 55
4.5.2 IMMUNOBLOT BEI CHEMOTHERAPIE 58
4.6 WICHTIGE KLINISCHE DATEN VON PATIENTEN UNTER CHEMOTHERAPIE 62
MIT HOCHDOSIERTEM METHOTREXAT
5. DISKUSSION 64
5.1 AUFBAU DER ERYTHROZYTENMEMBRAN UND DES MEMBRANSKELETTS 64
5.2 DISKUSSION VON VERAENDERUNGEN AN BIOLOGISCH ALTEN UND JUNGEN 73
SOWIE EXPERIMENTELL ALTERIERTEN ERYTHROZYTEN
5.3 HEREDITAERE SPHAEROZYTOSE 93
5.4 CHEMOTHERAPIE MIT HOCHDOSIERTEM METHOTREXAT 107
6. ZUSAMMENFASSUNG 117
7. LITERATUR 122
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