Eigenschaften und Spezifität eines Tonoplasten-Carriers für Pyrrolizidinalkaloid-N-Oxide:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
5
2.1.
DAS
PFLANZENMATERIAL
.
5
2.1.1.
HERKUNFT
DES
PFLANZENMATERIALS
.
5
2.1.2.
KULTURBEDINGUNGEN
FUER
DIE
ZSK
.
6
2.1.3.
KULTURBEDINGUNGEN
FUER
DIE
SPROSSKULTUREN
.
6
2.2.
TRACER-EXPERIMENTE
.
6
2.2.1.
FUETTERUNGSVERSUCHE
MIT
ZSK
.
7
2.2.1.1.
LANGZEITFUETTERUNG
.
7
2.2.1.2.
KURZZEITFUETTERUNG
VON
ZSK
UND
PROTOPLASTEN
.
7
2.2.I.3.
FUETTERUNG
VON
BERBERIN
AN
DIE
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
9
2.2.2.
FUETTERUNGSVERSUCHE
MIT
SPROSSKULTUREN
.
9
2.3.
ALKALOIDEXTRAKTION
.
9
2.4.
PRAEPARATIONEN
.
10
2.4.1.
PRAEPARATION
VON
[
14
C]
MARKIERTEN
PAS
.
10
2.4.2.
PRAEPARATION
VON
ALKALOID
N-OXIDEN
.
11
2.5.
CHROMATOGRAPHISCHE
VERFAHREN
.
11
2.5.1.
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
(DC)
.
11
2.5.2.
HOCHLEISTUNGSFLUESSIGCHROMATOGRAPHIE
(HPLC)
.
12
2.5.3.
GASCHROMATOGRAPHIE
(GLC)
.
13
2.6.
SPEKTROSKOPISCHE
METHODEN,
GC-MS-KOPPLUNG
.
14
2.7.
RADIOCHEMISCHE
METHODEN
.
15
2.7.1.
SZINTILLATIONSMESSUNGEN
.
15
2.7.2.
RADIO-DC
.
15
2.7.3.
RADIO-HPLC
.
15
2.8.
ISOLIERUNG
VON
PROTOPLASTEN
AUS
DER
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
16
2.8.1.
VORBEHANDLUNG
DER
ENZYME
ZUR
PROTOPLASTIERUNG
.
16
2.8.2.
PROTOPLASTIERUNG
.
16
2.8.3.
VITALITAETSTESTS
.
17
2.8.4.
NEUTRALROTFAERBUNG
.
17
SEITE
2.9.
VAKUOLENISOLIERUNG
.
18
2.9.1.
LYSE
DER
PROTOPLASTEN
.
19
2.9.2.
REINIGUNG
DER
VAKUOLEN-ROHPRAEPARATION
.
19
2.9.3.
BESTIMMUNG
DES
VAKUOLENDURCHMESSERS
.
20
2.9.4.
NEUTRALROTFAERBUNG
.
21
2.10.
BESTIMMUNG
VON
ENZYMAKTIVITAETEN
.
21
2.10.1.
A-MANNOSIDASE
.
21
2.10.2.
MALAT-DEHYDROGENASE
.
22
2.10.3.
CYTOCHROM-C-REDUKTASE
.
22
2.10.4.
CYTOCHROM-C-OXIDASE
.
23
2.10.5.
GLUCOSE-6-PHOSPHAT-DEHYDROGENASE
.
23
2.11.
ALKALOIDAUFNAHME
IN
ISOLIERTE
VAKUOLEN
.
24
2.12.
DICHTEMESSUNGEN
.
25
2.13.
PHOTOMETRISCHE
UND
MIKROSKOPISCHE
METHODEN
.
25
2.13.1.
PHOTOMETRISCHE
BERBERIN-BESTIMMUNG
.
25
2.13.2.
FLUORESZENZ-MIKROSKOPIE
.
26
2.14.
RADIO-CHEMIKALIEN
.
27
2.15.
CHEMIKALIEN
.
27
3.
EIGENSCHAFTEN
UND
SPEZIFITAET
EINES
CARRIERS
FUER
PA-N-OXIDE
.
29
3.1.
PROTOPLASTENISOLIERUNG
AUS
DER
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
29
3.1.1.
AUSWAHL
DES
ZELLMATERIALS
.
30
3.1.2.
PARAMETER
BEI
DER
PROTOPLASTIERUNG
.
32
3.1.2.1.
AUSWAHL
UND
VORBEHANDLUNG
DER
ENZYME
.
32
3.1.2.2.
WAHL
DES
INKUBATIONSMEDIUMS
.
33
3.1.2.3.
DAUER
UND
TEMPERATUR
DER
PROTOPLASTIERUNG
.
33
3.1.2.5.
REINIGUNG
DER
PROTOPLASTEN
.
34
3.1.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
PROTOPLASTEN
.
35
3.1.3.1.
AUSBEUTE
.
35
3.1.3.2.
VITALITAET
.
36
3.1.3.3.
STABILITAET
.
36
SEITE
3.2.
ENTWICKLUNG
EINER
METHODE
ZUR
VAKUOLENISOLIERUNG
AUS
DER
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
38
3.2.1.
ISOLIERUNG
VON
VAKUOLEN
DURCH
POLYBASEN-INDUZIERTE
LYSE
(DEAE-DEXTRAN-METHODE)
.
38
3.2.1.1.
AUSWAHL
DES
LYSE-PUFFERS
.
39
3.2.1.2.
VORINKUBATION
.
39
3.2.I.3.
DEAE-DEXTRAN-KONZENTRATION
UND
SCHUETTELBEDINGUNGEN
.
40
3.2.1.4.
REINIGUNG
DES
VAKUOLEN-ROHLYSATES
.
40
3.2.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
DURCH
DIE
DEAE-DEXTRAN-METHODE
ISOLIERTEN
VAKUOLEN
.
43
3.2.2.1.
AUSBEUTE
.
44
3.2.2.2.
CYTOPLASMATISCHE
KONTAMINATION
.
45
3.2.2.3.
STABILITAET
.
46
3.2.2.4.
GROESSENVERTEILUNG
.
47
3.2.3.
PH-VERHAELTNISSE
IN
DEN
PROTOPLASTEN
UND
ISOLIERTENVAKUOLEN
.
48
3.2.4.
ISOLIERUNG
VON
VAKUOLEN
DURCH
DIE
METHODE
DES
OSMOTISCHEN
SCHOCKS
.
51
3.2.5.
VERGLEICH
DER
METHODEN
ZUR
VAKUOLENISOLIERUNG
.
52
3.3.
ABTRENNUNG
ISOLIERTER
VAKUOLEN
MITTELS
SILICONOEL-FILTRATIONSZEN
TRIFUGATION
.
54
3.4.
FUETTERUNG
VON
SENECIO
VULGARIS
ZELLEN
UND
PROTOPLASTEN
MIT
[
14
C]
SENECIONIN-N-OXID
UND
ANSCHLIESSENDER
VAKUOLENISOLIERUNG
.
57
3.5.
AUFNAHME
VON
[
14
C]
SENECIONIN-N-OXID
IN
ISOLIERTE
VAKUOLEN
DER
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
59
3.5.1.
ENERGETIK
DES
TRANSPORTS
.
59
3.5.1.1.
EINFLUSS
VON
ATP,
MAGNESIUM
UND
DES
MGATP-KOMPLEXES59
3.5.1.2.
ERSATZ
VON
ATP
DURCH
EIN
NICHTHYDROLYSIERBARES
ATP
ANALOGES
.
60
3.5.1.3.
VARIATION
DER
ATP-KONZENTRATION
.
62
3.5.1.4.
EINFLUSS
VON
KALIUM
.
63
SEITE
3.5.2.
EINFLUSS
VON
HEMMSTOFFEN
.
65
3.5.2.I.
ATPASE-INHIBITOREN
.
65
3.5.2.2.
NITRAT
.
66
3.5.2.3.
LONOPHORE
.
67
3.5.3.
PH-ABHAENGIGKEIT
DES
TRANSPORTS
.
69
3.5.4.
BESTIMMUNG
DER
SENECIONIN-N-OXID-KONZENTRATION
IN
DER
VAKUOLE
.
70
3.5.5.
CHROMATOGRAPHISCHE
ANALYSE
DES
VAKUOLEN-INHALTS
NACH
FUETTERUNG
MIT
SENECIONIN-N-OXID
.
70
3.5.6.
BEEINFLUSSUNG
DES
TRANSPORTS
DURCH
ORGANISCHE
SAEUREN
.
72
3.6.
AUFNAHME
VON
[
14
C]
SENECIONIN
UND
PA-MONOESTEM
DURCH
ISOLIERTE
VAKUOLEN
DER
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
73
3.7.
SPEZIFITAET
DES
SENECIONIN-N-OXID-TRANSPORTS
.
76
3.7.1.
HEMMUNG
DES
TRANSPORTS
DURCH
ANDERE
PAS
.
76
3.7.2.
HEMMUNG
DES
TRANSPORTS
DURCH
TROPAN-ALKALOIDE
.
80
3.7.3.
AUFNAHME
VON
TROPANALKALOIDEN
DURCH
ISOLIERTE
VAKUOLEN
DER
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
82
3.7.3.1.
AUFNAHME
VON
ATROPIN-N-OXID
.
82
3.7.3.2.
CHROMATOGRAPHISCHE
ANALYSE
DES
VAKUOLENINHALTS
NACH
FUETTERUNG
MIT
ATROPIN-N-OXID
.
84
3.7.3.3.
AUFNAHME
VON
ATROPIN
.
85
3.7.4.
HEMMUNG
DES
TRANSPORTS
DURCH
AMINOSAEUREN
.
86
3.7.4.1.
HEMMUNG
DURCH
VERSCHIEDENE
L-AMINOSAEUREN
.
87
3.7.4.2.
KINETIK
DER
SEN-N-OX-AKKUMULATION
IN
GEGENWART
VON
L
UND
D-PROLIN
.
88
3.7.4.3.
HEMMUNG
DURCH
PROLIN-ANALOGA
.
89
3.7.5.
AUFNAHME
VON
[
14
C]
L-PROLIN
DURCH
ISOLIERTE
VAKUOLEN
DER
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
90
3.7.5.I.
KINETIK
DER
PROLIN-AUFNAHME
.
90
3.7.5.2.
HEMMUNG
DURCH
SENECIONIN-N-OXID
.
91
3.7.5.3.
HEMMUNG
DURCH
ATROPIN-N-OXID
.
92
3.7.5.4.
HEMMUNG
DURCH
ANDERE
L-AMINOSAEUREN
.
94
SEITE
3.7.6.
HEMMUNG
DES
TRANSPORTS
DURCH
DAS
ISOCHINOLINALKALOID
BERBERIN
.
96
3.7.7.
AUFNAHME
UND
SPEICHERUNG
VON
BERBERIN
DURCH
ZELLEN
UND
ISOLIERTE
VAKUOLEN
DER
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
96
3.7.7.1.
AUFNAHME
VON
BERBERIN
DURCH
DIE
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
97
3.1.1.2.
ISOLIERUNG
VON
VAKUOLEN
AUS
MIT
BERBERIN
VORGEFIILLTEN
ZELLEN
.
98
3.1.1.3.
AUFNAHME
VON
BERBERIN
DURCH
ISOLIERTE
VAKUOLEN
DER
ZSK
SENECIO
VULGARIS
.
99
4.
VORVERSUCHE
ZUR
BIOTRANSFORMATION
.
100
4.1.
BIOTRANSFORMATION
VON
SENECIONIN-N-OXID
IN
DEN
ZSK
SENECIO
JACOBAEA
UND
SENECIO
ERUCIFOLIUS
.
100
4.2.
BIOTRANSFORMATION
VON
SENECIONIN-N-OXID
IN
SPROSSKULTUREN
VON
SENECIO
JACOBAEA
.
103
5.
DISKUSSION
.
107
5.1.
MODELLE
DES
SEKUNDAERSTOFFTRANSPORTS
IN
DIE
VAKUOLE
.
107
5.2.
DIE
BESONDEREN
EIGENSCHAFTEN
DER
PA-N-OXIDE
.
108
5.3.
ENERGETISIERUNG
DES
SEN-N-OX-TRANSPORTS
DURCH
MGATP
.
108
5.4.
BETEILIGUNG
EINER
ATPASE
UND
EINES
PROTONENGRADIENTEN
AN
DER
SEN-N-OX-AKKUMULATION
.
109
5.5.
EINFLUSS
VON
KALIUM
.
111
5.6.
PH-ABHAENGIGKEIT
DES
TRANSPORTS
.
112
5.7.
VERGLEICH
DER
AKKUMULATION
VON
SEN-N-OX
UND
SEN
.
112
5.8.
MODELL
FUER
DIE
AKKUMULATION
VON
SEN-N-OX
IN
ISOLIERTE
VAKUOLEN
VON
SENECIO
VULGARIS
.
113
5.9.
SPEZIFITAET
DES
ALKALOID-TRANSPORTS
IN
SENECIO
VAKUOLEN
.
113
5.10.
VERWANDTSCHAFT
ZU
EINEM
AMINOSAEURE-TRANSPORTER
?
.
115
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
117
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
119 |
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