Charakterisierung der Wirkmechanismen des Oxysterols 25-Hydroxycholesterin auf die Acyl Coenzym A: Cholesterin Acyltransferase:
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
INHALTSVERZEICHNIS
I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
III
ZUSAMMENFASSUNG
1
EINLEITUNG
3
CHOLESTERINESTERBILDENDE
ENZYME
3
SUBSTRATSPEZIFITAET
DER
ACAT
4
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
DER
ACAT
5
SOLUBILISIERUNG,
REINIGUNG
UND
KLONIERUNG
DER
ACAT
5
STELLUNG
DER
ACAT
IN
DER
CHOLESTERINHOMOEOSTASE
7
REGULATION
DER
ACAT
8
AUFGABENSTELLUNG
9
ERGEBNISSE
10
OPTIMIERUNG
DES
ASSAYS
ZUR
AUFNAHME
DER
SPEZIFISCHEN
AKTIVITAET
DER
ACAT
10
EINFLUSS
VON
25-HYDROXYCHOLESTERIN,
LDL-CHOLESTERIN
BZW.
CHOLESTERIN
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
AKTIVITAET
DER
ACAT
19
EINFLUSS
STOFIWECHSELSPEZIFISCHER
INHIBITOREN
AUF
DIE
25-HYDROXYCHOLESTERIN
INDUKTION
21
EINFLUSS
VON
TPA,
A23187,
FORSKOLIN
BZW.
CAMP-ANALOG
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
AKTIVITAET
DER
ACAT
26
EINFLUSS
DER
DESENSIBILISIERUNG
DER
ZELLEN
DURCH
TP
A-INKUBATION
AUF
DIE
25-HYDROXYCHOLESTERIN-STIMULATION
DER
SPEZIFISCHEN
AKTIVITAET
DER
ACAT
27
EINFLUSS
DER
25-HYDROXYCHOLESTERIN-INDUKTION
AUF
DIE
TRANSLOKATION
DER
PROTEINKINASE
C
28
EINFLUSS
DER
PROTEINKINASE
C
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
AKTIVITAET
DER
ACAT
31
EINFLUSS
VON
CALMODULIN
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
AKTIVITAET
DER
ACAT
35
EINFLUSS
ENDOGENER
PROTEINPHOSPHATASEN
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
AKTIVITAET
DER
ACAT
36
EFFEKT
EXOGENER
PROTEINPHOSPHATASEN
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
AKTIVITAET
DER
ACAT
37
NORTHERN-ANALYSE
41
DISKUSSION
45
OPTIMIERUNG
DES
ASSAYS
ZUR
AUFNAHME
DER
SPEZIFISCHEN
ACAT-AKTIVITAET
45
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
25-HYDROXYCHOLESTERIN
WIRKUNG
47
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
ACAT-REGULATION
53
HYPOTHETISCHES
MODELL
DER
25-HYDROXYCHOLESTERIN
VERMITTELTEN
ACAT-AKTIVIERUNG
57
INHALTSVERZEICHNIS
MATERIAL
60
NICHTBIOLOGISCHES
MATERIAL
61
BIOLOGISCHE
MATERIALIEN
62
METHODEN
63
ZELLKULTUR
63
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
63
PROTEINBESTIMMUNG
63
ERSTELLUNG
EINER
TWEEN
80/CHOLESTERIN-SUSPENSION
63
AUFNAHME
DER
SPEZIFISCHEN
AKTIVITAET
DER
ACAT
(ACAT-ASSAY)
63
PRAEPARATION
MIKROSOMALER
PROTEINFRAKTIONEN
AUS
SCHWEINELEBER
MITTELS
DIFFERENTIELLER
ZENTRIFUGATION
64
PRAEPARATION
CYTOSOLISCHER
UND
MIKROSOMALER
PROTEINFRAKTIONEN
AUS
ADHAEREND
WACHSENDEN
ZELLEN
MITTELS
DIFFERENTIELLER
ZENTRIFUGATION
64
PRAEPARATION
VON
SUBZELLULAEREN
PROTEINFRAKTIONEN
ZUR
ERMITTLUNG
DES
PROTEINKINASE
C-EINFHISSES
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
ENZYMAKTIVITAET
65
MIKROSOMEN-PRAEPARATION
ZUR
ERMITTLUNG
VON
CAHNODULIN-EFFEKTEN
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
ENZYMAKTIVITAET
66
MIKROSOMEN-PRAEPARATION
ZUR
ERMITTLUNG
VON
EINFLUESSEN
DER
PROTEINPHOSPHATASEN
AUF
DIE
SPEZIFISCHE
ENZYMAKTIVITAET
66
PRAEPARATION
SUBZELLULAERER
PROTEINFRAKTIONEN
FUER
IMMUNOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
66
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
67
ELEKTROBLOTTEN
67
WESTERN-BLOT
68
CHEMILUMINESZENZDETEKTION
DER
SEKUNDAEREN
ANTIKOERPER
MIT
DEM
CHEMILUMINESZENZ
DETECTION
KIT
68
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
68
OLIGONUKLEOTID-SYNTHESE
68
ERST-STRANG-SYNTHESE
69
PCR
69
KOMPETENTE
ZELLEN
69
LIGATION
UND
TRANSFORMATION
69
PLSMID-MINI-PRAEPARATION
70
PLASMID-GROSS-PRAEPARATION
70
DNA-SEQUENZIERUNG
70
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
71
RNA-PRAEPARATION
AUS
EUKARYOTISCHEN
ZELLEN
71
RNA
GELELEKTROPHORESE
71
NORTHEM-BLOTTING
72
HYBRIDISIERUNG
72
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
HYBRIDISIERUNGSPROBEN
72
LITERATURVERZEICHNIS
73 |
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