Bestimmung der Phosphorylierungsstellen von in Baculovirus exprimierten Proteintyrosinkinasen:
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1995
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
20
2.1.
MATERIAL
20
2.2.
PRAEPARATIVE
METHODEN
21
2.2.1.
PRAEPARATIVE
EINDIMENSIONALE
GELELEKTROPHORESE
21
2.2.2.
GEL
ELUTIONS-KONZENTRATIONS-SYSTEM
23
2.2.3.
PROTEIN-ELEKTROBLOTTING
AUF
PVDF-MEMBRAN
26
2.2.4.
IN
SITU
VERDAU
VON
AN
IMMOBILEN
PSQ
GEBUNDENEN
PROTEINEN
27
2.2.5.
PEPTIDAUFTRENNUNG
DURCH
RP-HPLC
27
2.3.
ANALYTISCHE
METHODEN
29
2.3.1.
BESTIMMUNG
VON
PTH-PHOSPHOTYROSIN
DURCH
KAPILLARELEKTROPHORESE
29
2.3.2.
HERSTELLUNG
DES
ELEKTROPHORESE-PUFFERS
30
2.3.3.
PARTIALHYDROLYSE
VON
PHOSPHOTYROSINHALTIGEN
PROTEINEN
SOWIE
UMWANDLUNG
DER
FREIGESETZTEN
AMINOSAEUREN
IN
DIE
ENTSPRECHENDEN
PTH-DERIVATE
30
2.3.4.
SEQUENZANALYSE
32
2.3.5.
SEQUENZANALYSE
VON
PHOSPHOTYROSIN-HALTIGEN
PEPTIDEN
33
2.3.6.
OPTIMIERTES
PROGRAMM
ZURFESTPHASENSEQUENZIERUNG
VON
PHOSPHOTYROSIN-HALTIGEN
PEPTIDEN
34
2.3.7.
S-ETHYLCYSTEIN-MODIFIZIERUNG
36
2.3.8.
PHENYLTHIOCARBAMYL
(PTC)-AMINOSAEUREANALYSE
37
2.3.9.
MATRIX-UNTERSTUETZTE
LASERDESORPTIONS/LONISATIONS
MASSENSPEKTROMETRIE
(MALDI)
38
2.3.10.
ELEKTROSPRAY
LONISATIONS
(ESI)-MASSENSPEKTROMETRIE
39
2.3.11.
LC-MS
EINES
PROTEINVERDAUS
40
2.3.12.
LC-MS/MS-MASSENSPEKTROMETRIE
40
2.3.13.
ANALYSE
DER
INTRAZELLULAEREN
INSULINREZEPTOR
KINASEDOMAENE
41
3.
ERGEBNISSE
42
3.1.
OPTIMIERUNG
DER
FESTPHASENSEQUENZIERUNG
ZUR
IDENTIFIKATION
VON
PHOSPHOTYROSIN
42
3.2.
IDENTIFIZIERUNG
DER
PHOSPHORYLIERUNGSSTELLEN
IN
DER
LOESLICHEN
INTRAZELLULAEREN
KINASEDOMAENE
DES
INSULINREZEPTORS
(IRKD)
48
3.3.
IDENTIFIKATION
DER
PHOSPHORYLIERUNGSSTELLE
DER
C-TKL
75
4.
DISKUSSION
86
4.1.
4.2.
OPTIMIERUNG
DER
PHOSPHOTYROSINANALYTIK
86
DIE
PHOSPHORYLIERUNGSSTELLEN
DER
LOESLICHEN
INTRAZELLULAEREN
KINASEDOMAENE
DES
INSULINREZEPTORS
(IRKD)
92
4.3.
IDENTIFIKATION
DER
PHOSPHORYLIERUNGSTSELLE
DER
C-TKL
100
5.
ZUSAMMENFASSUNG
106
6.
LITERATUR
108 |
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